Bu çalışmada, fare kalbinin sol ventrikül fonksiyonel parametrelerini ölçmek için kapsamlı bir kardiyovasküler manyetik rezonans görüntüleme (CMR) protokolü açıklanmaktadır. Protokol, CMR görüntülerinin alımını, işlenmesini ve analizini ve farklı kardiyak fonksiyonel parametrelerin değerlendirilmesini açıklar.
Fare modelleri, sağlıklı kardiyak fonksiyonda rol oynayan genetik ve fizyolojik faktörlerin anlaşılmasına, pertürbasyonların patoloji ile nasıl sonuçlanacağını ve miyokard hastalıklarının nasıl tedavi edilebileceğinin anlaşılmasına önemli katkıda bulunmuştur. Kardiyovasküler manyetik rezonans görüntüleme (CMR), kardiyak anatomi ve fonksiyonun kapsamlı bir in vivo değerlendirmesi için vazgeçilmez bir araç haline gelmiştir. Bu protokol, 7-Tesla CMR kullanarak fare kalbi sol ventrikül fonksiyonu, miyokard gerinimi ve hemodinamik kuvvetlerin ayrıntılı ölçümlerini göstermektedir. İlk olarak, tarayıcıda hayvan hazırlama ve konumlandırma gösterilmiştir. Çeşitli kısa ve uzun eksenli görünümlerde görüntüleme dilimlerinin planlanması için anket taramaları gerçekleştirilir. Kalbi uçtan tabana kaplayan, son sistolik ve son diyastolik evreleri yakalayan bir dizi potansiyel EKG tetikli kısa eksenli (SA) film (veya CINE görüntüleri) elde edilir. Daha sonra, tek dilimli, geriye dönük olarak kapılı CINE görüntüleri, özel olarak oluşturulmuş ve açık kaynaklı yazılımlar kullanılarak yüksek zamansal çözünürlüklü CINE görüntüleri olarak yeniden oluşturulmak üzere orta seviye SA görünümünde ve 2, 3 ve 4 odacıklı görünümlerde elde edilir. CINE görüntüleri daha sonra özel CMR görüntü analizi yazılımı kullanılarak analiz edilir.
SA end-sistolik ve son diyastolik CINE görüntülerinde endomyokardiyal ve epikardial sınırların delinmesi, uç-sistolik ve son diyastolik hacimlerin, ejeksiyon fraksiyonunun ve kardiyak çıkışın hesaplanmasına izin verir. Orta düzey SA CINE görüntüleri, ayrıntılı bir hacim-zaman eğrisi çıkarmak için tüm kardiyak zaman dilimleri için tanımlanmıştır. Zaman türevi, diyastolik fonksiyonun erken dolum ve atriyal kasılma dalgalarının oranı olarak hesaplanmasını sağlar. Son olarak, 2,3 ve 4 odacı görünümlerdeki sol ventrikül endokardiyal duvarlar, boyuna miyokard gerinim parametrelerinin ve sol ventriküler hemodinamik kuvvetlerin hesapıldığı özellik izleme kullanılarak tanımlanmıştır. Sonuç olarak, bu protokol, kalp hastalığının çeşitli fare modellerinde kardiyak fonksiyondaki zamansal değişiklikleri incelemek için kullanılabilecek fare kardiyak parametrelerinin ayrıntılı in vivo nicelemesini sağlar.
Küçük hayvanlarda kardiyovasküler manyetik rezonans (CMR), miyokard fonksiyonunun doğru bir in vivo ölçümünü sağlayarak CMR’yi kardiyovasküler hastalıklarda preklinik araştırmalar için en uygun araç haline getirir. CMR görüntülerde kan ve miyokard arasındaki yüksek mekansal çözünürlük ve yüksek kontrast nedeniyle, endo ve epikardial konturları ayırt etmek ve miyokard kütlesini ve ventrikül hacimlerini hesaplamak mümkündür1,2. 600 atım/dk’ya varan yüksek kalp atış hızlarına rağmen, elektrokardiyogram (EKG) ve solunum tetikleme kullanımı, solunum hareketi eserleri olmadan farklı kardiyak evrelerin (CINE görüntüleri olarak da adlandırılır) yüksek kaliteli ölçümlerine izin verir. Bu şekilde, çıkarma fraksiyonu (EF), uç sistolik hacim (ESV), son diyastolik hacim (EDV) ve kardiyak çıkış (CO)3gibi sistolik fonksiyon parametrelerini ayıklamak için kalbi uçtan tabana örtmek için birden fazla dilim kullanılabilir. Temel sistolik fonksiyon değerlendirmesinin yanı sıra, diyastolik disfonksiyon4, miyokard gerinimi5ve hemodinamik kuvvetleri (HDF) değerlendirmek için ek CMR teknikleri geliştirilmiştir6.
EKG gating, R-tepenin algılanmasının ardından MR sinyal alımını başlatarak ve R-R aralığında tanımlanmış sayıda kardiyak faz kaydederek kardiyak döngüye senkronizasyon sağlar. Bununla birlikte, bu şekilde elde edilebilen kardiyak fazların (kare hızı) sayısı, sistemin kabul edilebilir bir sinyal-gürültü oranı (SNR) ve uzamsal çözünürlük4korurken ulaşabileceği mümkün olan en düşük tekrarlama süresine (TR) bağlıdır. Ayrıca, yüksek manyetik alan gradyanlarının kullanımı EKG sinyalini geçici olarak bozabildiğinden, alım genellikle son diyastolik fazdan önce durdurulur. Her iki faktör de bu tür taramaların kullanımını sistolik fonksiyon değerlendirmeleriyle sınırlar, çünkü diğer kardiyak fonksiyonel parametrelerin hesaplanması sol ventrikül (LV) hacim-zaman eğrisinin daha iyi tanımlanmasını gerektirir.
Yüksek kare hızında CINE görüntüleri retrospektif gating ile elde edilebilir, böylece tarama sırasında MR sinyali sürekli olarak alınır ve radyofrekans (RF) uyarılmasından sonra birikmiş bir navigasyon ekosu kardiyak ve solunum hareketini algılar. CMR alımı kardiyak hareketle zaman uyumsuz olarak gerçekleştirildiği için, elde edilen MR sinyalleri daha sonra geriye dönük olarak seçilen sayıda kardiyak çerçeveye atanabilir. Bu şekilde, yeterli veri toplanırsa, yüksek kare hızında CINE görüntüleri yeniden yapılandırılabilir4,7. Bu daha sonra, atriyal kasılma (A’) ile tepe erken dolum oranı (E’) ve pik geç dolum oranı arasındaki oran ile temsil edilen diyastolik fonksiyon değerlendirmesine izin verir.
Klinik araştırmalarda, CINE görüntüleri miyokard suşunu ve HDF6,8’ideğerlendirmek için CMR özellik izleme ile analiz edilebilir. Miyokard gerinimi, miyokard segmenti9’unbaşlangıç uzunluğu (genellikle son diyastolik uzunlukta) ile maksimum uzunluğu (genellikle son sistole) arasındaki yüzde farkını ölçen bir kardiyak deformasyon parametresidir. Miyokard gerinim ölçümleri, gerinim değerleri miyokard duvarının kısaltılmasını ve kalınlaşmasını ölçttükçe LV fonksiyonunu değerlendirmek için artımlı değerde olabilir. Kısaltma fonksiyonunda bir azalma subendokardiyal lif hasarının bir göstergesi olabilir10. Miyokard suşunda değişiklikler EF’den bağımsız olarak ortaya çıkabilir ve altta yatan komplikasyonların habercisi olabilir.
Özellikle, küresel boyuna suş (GLS) ve küresel çevresel suşun (GCS) kalp hastalığı10 , 11,12’yikarakterize ederken katma değerli olduğu gösterilmiştir. Benzer şekilde, HDF’nin değiştirilmiş kardiyak fonksiyon6,13‘ü belirtmek için potansiyel bir yeni parametre olduğu öne sürlenmiştir. Bu HDF veya müdahaletriküler basınç gradyanları (IVPG) kalbin atılması ve doldurulması sırasında kan hareketini yönlendirr ve aort ve mitral kapak14,15dahil olmak üzere kan ve miyokard arasındaki momentum değişiminden etkilenir.
Bu çalışmada, fare kalplerinin LV fonksiyonunu, miyokard zorluğunu ve HDF’yi ölçmek için sağlam küçük hayvan CMR ölçümleri yapmak için kapsamlı bir protokol açıklanmıştır. Hayvan hazırlama, kalbin hem prospektif hem de retrospektif olarak kapılı CINE görüntülerini kullanarak veri toplamanın yanı sıra hacimsel ölçümleri, E’/A’ oranını, miyokard zorluğunu ve kalbin HDF’lerini hesaplayabilen özel yazılımla analiz içerir. Bu protokol, kardiyovasküler hastalıkların çeşitli fare modellerinde LV işlevinin kapsamlı bir şekilde değerlendirilmesi için kullanılabilir.
Sunulan protokol, farelerde kalp fonksiyonunu analiz etmek için boyuna, invaziv olmayan, in vivo deneyler için CMR görüntülemenin kullanımını açıklar. Bu sonuçlar, kardiyak parametreleri ölçmek için CINE görüntülerini kullanmanın fizibilitesini göstermek için sağlıklı hayvanlara örnektir. Bununla birlikte, açıklanan yöntemler çeşitli hayvan modelleri için kullanılabilir. Spesifik hastalık modelleri protokolde küçük değişiklikler gerektirse de, farklı kardiyak fonksiyonel parametreleri değerlendirmek için temel yapısı çok benzer olacaktır. Bahsetmeye değer özel bir durum, kalbin bir kısmının kontritasyonda önemli kayıplar yaşadığı miyokard enfarktüsü modelidir. Bu, bu dilim içinde kardiyak navigasyon sinyalinin düşük kalitesine neden olabilir. Bu durumda, alternatif bir seçenek, Coolen ve ark.16tarafından daha önceki bir çalışmada açıklandığı gibi, navigasyonu ayrı bir dilimden almak olacaktır. Farklı görünümlerdeki CINE görüntüleri, CS algoritmaları kullanılarak geriye dönük olarak geçişli verilerden yeniden oluşturulur ve gerinim ve HDF değerlerini hesaplamak için görüntü analiz yazılımı kullanılarak analiz edilir.
Elde edilen görüntülerin kalitesi doğal olarak, kardiyak MRI protokolüne başlamadan önce dikkatlice yapılması gereken tüm hazırlık adımlarına bağlıdır. Örneğin, hayvanı MRI tarayıcısının içine yerleştirirken net EKG ve solunum sinyalleri görülmezse, bu muhtemelen manyetohidrodinamik bozulmaların ilave etkisi nedeniyle düşük alımlara ve hatta tarama sürelerinin artmasına neden olacaktır17. Dilim yönelimlerinin sıralı planlaması nedeniyle, hayvanların sadece taramalar arasında yeniden konumlandırılamayacağını fark etmek önemlidir. Bu nedenle, taramalar arasında EKG müşteri adaylarını yeniden ayarlamak mümkün değildir, çünkü bu farenin tarayıcıdaki konumunu değiştirecektir. Tarama sırasında, sıcaklık kontrolü sabit bir kardiyak ve solunum aralığını korumak için çok önemlidir, bu da özellikle daha uzun bir süre boyunca elde edilen geriye dönük geçişli taramaların kalitesine fayda sağlar. Bu yüksek çevrimli tarama sırasında, hayvanın sıcaklığı sürekli olarak artabilir ve kalp atış hızının ve solunum hızının artmasına neden olabilir. Isıtma sisteminin ve anestezinin sıcaklığının ayarlanması, taramadan önce veya tarama sırasında solunum hızının stabilize etmesine büyük ölçüde katkıda bulunabilir.
Analiz sırasında kritik bir adım, kontur çiziminde tutarlılıktır. Otomatik segmentasyon klinik veriler için iyi çalışsa da, fare kardiyak verileri durumunda sağlam bir performans göstermez (sıçanlar için test değildir). Belirli kardiyak evrelerde, özellikle LV dolgusunun başlangıcındaki yüksek kalp hızı ve yüksek kan akışı, miyokard duvarı tanımlamasını tehlikeye atarak intravoksel defasing ve sinyal boşluklarına neden olabilir. Bu nedenle, her kareyi bağımsız olarak analiz etmek tavsiye edilir, ancak miyokard duvarının çerçeveler arasındaki hareketini görsel olarak inceleyin ve tüm çerçeveler boyunca konturları çizirken bunu dikkate alın. Analizde daha doğal bir kontraj hareketini korumak için endokardiyal konturun ardışık iki kare arasında kopyalanması ve ayarlanması önerilir. Bu protokolde papiller kaslar sistolik ve diyastolik fonksiyon değerlendirmesi için SA görüntülerindeki ventrikül lümen hacminden çıkarılırken, gerilme ve HDF analizi için 2CH, 3CH ve 4CH görünümlerine dahil edilir, çünkü ikincisi ventrikül lümeninin kesin hacmi yerine miyokard duvarının hassas hareketinin bilgisine dayanır.
Sistolik ve diyastolik fonksiyon parametreleri kardiyak döngü boyunca LV hacimlerinin ölçülmesini temel alıp, gerinim ve HDF parametreleri miyokard duvarındaki hareket kalıplarına da bağlıdır. Bunun için miyokard segmentinin yer değiştirmesinin sonraki CINE evreleri arasında farklı anatomik özellikler ve sinyal yoğunlukları tanınarak değerlendirilebileceği özellik izleme teknikleri kullanılır. CMR görüntülerde kan havuzu ve miyokard arasındaki güçlü kontrast, sonraki gerinim ve HDF analizi için özellik izlemenin kullanılmasını kolaylaştırır8. CMR özellik takibi öncesinde benek takibi eksografisi ve CMR doku etiketleme ile miyokard suşları belirlendi. CMR özellik izleme, CMR doku etiketlemeye kıyasla ek tarama süresi gerektirmez. Bununla birlikte, geriye dönük tetikleme kullanımına rağmen, CMR hala sınırlı bir zamansal çözünürlüğe sahiptir, bu da kardiyak döngü içindeki hızlı deformasyonları doğru bir şekilde değerlendirmeyi zorlaştırabilir.
HDF’nin kardiyak döngü boyunca değerlendirilmesi, daha önce tanımlanmış denklemleri kullanarak apeks bazlı ve inferolateral-anteroseptal yönlerde HDF’yi hesaplamak için mitral ve aort kapaklarının çaplarının ölçülmelerini gerektirir18. Bu yöntem, karmaşıklığı nedeniyle klinik kullanımda sınırlı bir kullanılabilirliğe sahip olan referans standart 4D akışlı MRI ile karşılaştırıldığında HDF’nin tutarlı tahminlerini göstermiştir6. Valf çaplarının sağlam bir şekilde tahmin edilmesinin zor olduğunu bilmek önemlidir ve bu nedenle, valf çapları bir grup hayvan için ve uzunlamasına bir çalışmada tekrarlanan ölçümler boyunca sabit tutulmalıdır, çünkü bu parametredeki yanlış tahminlerle yapılan varyasyonlar HDF parametrelerindeki ince değişiklikleri kolayca gölgede bırakabilir. GLS ve HDF parametrelerini hesaplamak için kullanılan belirli yazılım tüm kullanıcılar tarafından kullanılamayabilir. Bu nedenle, analiz yazılımı tarafından gerçekleştirilen ilgili hesaplamaların temelini oluşturan tüm matematiksel açıklamaları içeren Voigt ve ark.19 (GLS) ve Pedrizzetti ve ark.
Bu çalışmanın amacı doğrultusunda protokol sağlıklı hayvanlarda değerlendirilmiş (N = 6). Şekil 5A–C‘de LV ses düzeyi, dV/dt, endoGLS ve HDF için temsili bir zaman eğrisi kümesi gösterilmiştir. Birden fazla kardiyak fonksiyonel parametrenin ortalama değerleri (EF, E’/A’oranı, tepe GLS ve HDF) Şekil 5D‘de gösterilmiştir. Bunlar literatürde kullanılan benzer protokollerle iyi bir şekilde kabul eder21. Farelerde GLS ve HDF verileri üzerine literatür azdır. Klinik verilerle aynı aralıkta olan ortalama %-22,8 GLS değeriölçüldüğü 8, açıklanan yöntemle elde edilen GLS ölçümlerinin farelerde mümkün olduğunu göstermektedir. Farelerde elde edilen HDF eğrileri de insan verilerinde görülenle aynı belirgin evreleri göstererek bu tekniğin preklinik araştırmalara başarılı bir şekilde çevrilmesini göstermektedir. HDF parametreleri kardiyak disfonksiyonun erken biyobelirteçleri olarak hizmet edecek şekilde hipotez edilirken, bu yeni parametrenin tanısal ve tahmine dayalı değerini araştırmak için daha fazla çalışma garanti edilmektedir. Bu protokoldeki sonuçlar, HDF ve GLS sonuçlarının hayvanlar arasında daha değişken olmasının beklendiğini ve bunun hayvan modellerinde veya tedavi etkilerinde ince farklılıklar beklendiğinde dikkate alınması gerektiğini göstermektedir.
The authors have nothing to disclose.
Yazarlar, fare ölçümleri ve veri analizi konusunda yardım için Dorita Dekkers ve Fatimah Al Darwish’e teşekkür ediyor.
Equipment | |||
AccuSens single and multi-channel signal conditioner | Opsens solutions inc., Canada | ACS-P4-N-62SC | Used with fiber optic temperature sensor to monitor body temperature |
Duratears eye ointment | Alcon Nederland B.V., Netherlands | ||
Mouse cell | Équipment Vétérinaire Minerve, France | referred to as mouse cradle | |
MR-compatible Monitoring & Gating System for Small animals | SA Intuments, Inc., United States | Model 1030 | ERT Module (ECG/respiratory interface module) , ERT Control/Gating Module, battery pack and subdermal ECG Electrode Set |
MRI scanner | MR Solutions Ltd., United Kingdom | Model: MRS-7024 | Preclinical MRI System 7.0T/24 cm |
Multistation temperature control unit and High Flow PCA | Équipment Vétérinaire Minerve, France | Model: URT Multipostes | animal heating system |
Respiration Sensor | Graseby Medical Limited, United Kingdom | Ref 2005100 | |
RF coil | MR Solutions Ltd., United Kingdom | MRS-MVC | 38mm mouse volume RF coil for mouse body studies |
SF flowmeter | flow-meter, Italy | SF 3 | |
Vaporizer sigma delta Intermed | Penlon Ltd., United Kingdom | ||
Materials | |||
Isoflurane | AST farma, Netherlands | ||
Vaseline petroleum jelly | Unilever, United Kingdom | ||
Software | |||
BART toolbox | https://mrirecon.github.io/bart/ | ||
Mathematica 12.0 | Wolfram Research, Inc., United States | ||
MATLAB 2019a | The MathWorks,Inc., United States | ||
MEDIS Suite MR | Medis Medical Imaging Systems B.V. ,Netherlands | Image analysis software | |
PC-SAM | SA Intuments, Inc., United States | ||
Preclinical Scan | MR Solutions Ltd., United Kingdom | Scanning software | |
Retrospective version 7.0 | Amsterdam UMC, the Netherlands | Reconstuction software: https://github.com/Moby1971?tab=repositories |