تصف هذه الدراسة بروتوكولا شاملا للتصوير بالرنين المغناطيسي القلبي الوعائي (CMR) لقياس المعلمات الوظيفية البطينية اليسرى لقلب الماوس. يصف البروتوكول اقتناء صور CMR ومعالجتها وتحليلها بالإضافة إلى تقييم المعلمات الوظيفية القلبية المختلفة.
ساهمت نماذج الماوس بشكل كبير في فهم العوامل الوراثية والفسيولوجية المشاركة في وظيفة القلب الصحية ، وكيف تؤدي الاضطرابات إلى علم الأمراض ، وكيف يمكن علاج أمراض عضلة القلب. أصبح التصوير بالرنين المغناطيسي القلبي الوعائي (CMR) أداة لا غنى عنها لتقييم شامل في الجسم الحي لتشريح القلب ووظيفته. يظهر هذا البروتوكول قياسات مفصلة لوظيفة البطين الأيسر لقلب الماوس، وسلالة عضلة القلب، والقوى الديناميكية الدموية باستخدام 7-Tesla CMR. أولا، يتم عرض إعداد الحيوانات وتحديد المواقع في الماسح الضوئي. يتم إجراء مسح مسح لتخطيط شرائح التصوير في مختلف طرق العرض قصيرة وطويلة المحور. يتم الحصول على سلسلة من الأفلام القصيرة المحور (SA) المحتملة التي تسببها تخطيط القلب (أو صور CINE) التي تغطي القلب من قمة إلى قاعدة ، والتقاط المراحل الانبساطية النهائية والانبساطية النهائية. في وقت لاحق ، يتم الحصول على صور CINE ذات الشريحة الواحدة والمسورة بأثر رجعي في عرض SA منتصف البطين ، وفي مشاهدات 2 و 3 و 4 غرف ، ليتم إعادة بنائها إلى صور CINE عالية الدقة الزمنية باستخدام برامج مصممة خصيصا ومفتوحة المصدر. يتم تحليل صور CINE لاحقا باستخدام برنامج تحليل صور CMR مخصص.
تحديد الحدود الانحلالية والإبيكاردية في SA نهاية الانقباضي ونهاية الانبساطي صور CINE يسمح لحساب نهاية الانقباضي ونهاية الانبساطي المجلدات، طرد كسر، وإخراج القلب. يتم تحديد صور SA CINE منتصف البطين لجميع الأطر الزمنية القلبية لاستخراج منحنى مفصل لحجم الوقت. مشتق الوقت يسمح لحساب وظيفة الانبساطي كنسبة من ملء في وقت مبكر وموجات انكماش الأذينية. وأخيرا، يتم تحديد الجدران البطينية اليسرى في وجهات النظر 2-، 3-، و 4 غرف باستخدام ميزة تتبع، والتي يتم حساب المعلمات سلالة عضلة القلب الطولية والقوى الهينامية البطينية اليسرى. في الختام ، يوفر هذا البروتوكول تفصيلا في القياس الكمي الحي لمعلمات قلب الماوس ، والتي يمكن استخدامها لدراسة التغيرات الزمنية في وظيفة القلب في نماذج الماوس المختلفة لأمراض القلب.
يوفر الرنين المغناطيسي القلبي الوعائي (CMR) في الحيوانات الصغيرة قياسا دقيقا في الجسم الحي لوظيفة عضلة القلب ، مما يجعل CMR أداة مثالية للأبحاث قبل السريرية في أمراض القلب والأوعية الدموية. نظرا لارتفاع الدقة المكانية وارتفاع التباين بين الدم و عضلة القلب في صور CMR ، فمن الممكن تحديد ملامح بطانة الرحم و epicardial وحساب كتلة عضلة القلب وحجم البطين1،2. على الرغم من ارتفاع معدلات ضربات القلب تصل إلى 600 نبضة / دقيقة ، فإن استخدام تخطيط القلب الكهربائي (ECG) والتسبب التنفسي يسمح بقياسات عالية الجودة لمراحل القلب المختلفة (وتسمى أيضا صور CINE) دون قطع أثرية للحركة التنفسية. وبهذه الطريقة، يمكن استخدام شرائح متعددة لتغطية القلب من قمة إلى قاعدة لاستخراج معلمات الوظيفة الانقباضية مثل كسر القذف (EF)، وحجم نهاية الانقباضي (ESV)، وحجم نهاية الانبساطي (EDV)، وإخراج القلب (CO)3. وبصرف النظر عن تقييم الوظيفة الانقباضية الأساسية، وقد وضعت تقنيات CMR إضافية مؤخرا لتقييم الخلل الانبساطي4،سلالة عضلة القلب5،والقوى الدموية (HDF)6.
يسمح تخطيط القلب بالتزامن مع الدورة القلبية من خلال بدء اكتساب إشارة MR بعد الكشف عن ذروة R وتسجيل عدد محدد من مراحل القلب خلال الفاصل R-R. ومع ذلك ، فإن عدد مراحل القلب (معدل الإطار) التي يمكن الحصول عليها بهذه الطريقة يعتمد على أقل وقت تكرار ممكن (TR) يمكن للنظام الوصول إليه مع الحفاظ على نسبة إشارة إلى ضوضاء مقبولة (SNR) والدقة المكانية4. وعلاوة على ذلك، لأن استخدام تدرجات المجال المغناطيسي العالي يمكن أن يشوه مؤقتا إشارة تخطيط القلب، فإن الاقتناء يتوقف عادة قبل المرحلة الانبساطية النهائية. يحد كلا العاملين من استخدام هذه الفحوصات لتقييمات الوظائف الانقباضية ، حيث يتطلب حساب المعلمات الوظيفية القلبية الأخرى تعريفا أفضل لمنحنى وقت الصوت البطيني الأيسر (LV).
يمكن الحصول على صور CINE عالية معدل الإطار عن طريق الإثارة بأثر رجعي ، حيث يتم الحصول على إشارة MR باستمرار أثناء المسح الضوئي ، ويكتشف صدى الملاح المدمج بعد الإثارة الراديوية (RF) الحركة القلبية والجهاز التنفسي. نظرا لأن اكتساب CMR يتم بشكل غير متزامن مع الحركة القلبية ، يمكن بعد ذلك تعيين إشارات MR المكتسبة إلى عدد مختار بأثر رجعي من إطارات القلب. وبهذه الطريقة، إذا تم جمع بيانات كافية، يمكن إعادة بناء صور CINE عالية الإطار بمعدل4،7. وهذا يسمح بعد ذلك بتقييم الوظيفة الانبساطية، ممثلة في النسبة بين معدل التعبئة المبكر الذروة (E’) ومعدل التعبئة المتأخر الذروة من الانكماش الأذيني (A’).
في البحوث السريرية، يمكن تحليل الصور CINE مع CMR ميزة تتبع لتقييم سلالة عضلة القلب وHDF6،8. إجهاد عضلة القلب هو معلمة تشوه القلب التي تقيس الفرق في النسب المئوية بين الطول الأولي (عادة في الطول الانبساطي النهائي) والحد الأقصى للطول (عادة في نهاية السستولي) من الجزء عضلة القلب9. يمكن أن تكون قياسات إجهاد عضلة القلب ذات قيمة إضافية لتقييم وظيفة LV حيث تحدد قيم الإجهاد تقصير جدار عضلة القلب وسماكته. انخفاض في تقصير وظيفة قد يكون مؤشرا على تلف الألياف تحت القلب10. يمكن أن تحدث التعديلات في إجهاد عضلة القلب بشكل مستقل عن EF ويمكن أن تكون مقدمة للمضاعفات الكامنة.
على وجه التحديد، وقد ثبت أن السلالة الطولية العالمية (GLS) وسلالة محيطية عالمية (GCS) أن تكون ذات قيمة مضافة في توصيف أمراض القلب10،11،12. وبالمثل، اقترح HDF لتكون معلمة رواية محتملة للإشارة إلى تغييروظيفةالقلب 6،13. هذه HDF أو تدرجات الضغط المتدخل (IVPG) محرك حركة الدم أثناء طرد وملء القلب وتتأثر تبادل الزخم بين الدم والقلب العضلي، بما في ذلك الصمام الأبهري والميترالي14،15.
في هذه الدراسة، يتم وصف بروتوكول شامل لأداء قياسات CMR الحيوانية الصغيرة القوية لقياس وظيفة LV، سلالة عضلة القلب، وHDF من قلوب الفئران. أنه يحتوي على الخطوات اللازمة لإعداد الحيوانات، والحصول على البيانات باستخدام كل من الصور CINE بوابات مستقبليا وبأثر رجعي من القلب، فضلا عن تحليل مع برامج مخصصة قادرة على حساب القياسات الحجمية، E’/A’ نسبة، سلالة عضلة القلب، وHDF من القلب. يمكن استخدام هذا البروتوكول للتقييم الشامل لوظيفة LV في نماذج الماوس المختلفة لأمراض القلب والأوعية الدموية.
يصف البروتوكول المقدم استخدام التصوير CMR للتجارب الطولية وغير الغازية في الجسم الحي لتحليل وظائف القلب في الفئران. هذه النتائج هي أمثلة على الحيوانات السليمة لإثبات جدوى استخدام صور CINE لتحديد معالم القلب. ومع ذلك، يمكن استخدام الأساليب الموصوفة لمختلف النماذج الحيوانية. على الرغم من أن نماذج الأمراض المحددة قد تتطلب تعديلات صغيرة على البروتوكول ، إلا أن بنيته الأساسية لتقييم المعلمات الوظيفية القلبية المختلفة ستكون متشابهة للغاية. حالة واحدة معينة جديرة بالذكر هي نموذج احتشاء عضلة القلب حيث يعاني جزء من القلب من خسارة كبيرة في الانقباض. وهذا يمكن أن يسبب انخفاض نوعية إشارة الملاح القلب داخل هذه الشريحة. وفي هذه الحالة، فإن الخيار البديل هو الحصول على الملاح من شريحة منفصلة، كماهو موضح في دراسة سابقة أجراها كولين وآخرون. يتم إعادة بناء صور CINE في طرق عرض مختلفة من بيانات مسورة بأثر رجعي باستخدام خوارزميات CS ويتم تحليلها باستخدام برنامج تحليل الصور لحساب قيم السلالة وHDF.
تعتمد جودة الصور المكتسبة بشكل طبيعي على جميع خطوات التحضير ، والتي تحتاج إلى إجراء بعناية قبل بدء بروتوكول التصوير بالرنين المغناطيسي القلبي. على سبيل المثال ، إذا لم يتم رؤية إشارات تخطيط القلب والجهاز التنفسي واضحة عند وضع الحيوان داخل الماسح الضوئي التصوير بالرنين المغناطيسي ، وهذا من المرجح أن يؤدي إلى عمليات الاستحواذ دون المستوى الأمثل وحتى زيادة أوقات المسح الضوئي بسبب التأثير الإضافي للتشوهات المغناطيسية17. من المهم أن ندرك أنه بسبب التخطيط التسلسلي للتوجهات شريحة، لا يمكن فقط إعادة وضع الحيوانات في ما بين عمليات المسح الضوئي. ولذلك فإنه ليس من الممكن إعادة ضبط قادة تخطيط القلب في ما بين عمليات المسح الضوئي، لأن هذا سوف يغير موقف الماوس في الماسح الضوئي. أثناء المسح الضوئي، يعد التحكم في درجة الحرارة أمرا حاسما للحفاظ على فاصل زمني ثابت للقلب والجهاز التنفسي، مما يفيد بشكل خاص جودة عمليات المسح المسور بأثر رجعي التي يتم الحصول عليها على مدى فترة زمنية أطول. خلال هذا الفحص عالي الخدمة ، قد ترتفع درجة حرارة الحيوان باطراد ، مما يؤدي إلى زيادة معدل ضربات القلب والجهاز التنفسي. يمكن أن يساهم ضبط درجة حرارة نظام التدفئة والتخدير بشكل كبير في استقرار معدل التنفس قبل أو أثناء المسح الضوئي.
خطوة حاسمة أثناء التحليل هو الاتساق في رسم كفاف. في حين أن التقسيم التلقائي يعمل بشكل جيد للبيانات السريرية ، إلا أنه لا يؤدي بقوة في حالة بيانات قلب الماوس (لم يتم اختبارها للفئران). ارتفاع معدل ضربات القلب وارتفاع تدفق الدم خلال مراحل معينة من القلب، وخاصة في بداية ملء LV، قد يسبب تخفيف الفرج وفراغات إشارة، مما يعرض للخطر ترسيم جدار عضلة القلب. لذلك لا ينصح بتحليل كل إطار بشكل مستقل ، ولكن فحص حركة جدار عضلة القلب بين الإطارات بصريا وأخذ ذلك في الاعتبار عند رسم الخطوط العريضة عبر جميع الإطارات. ينصح بنسخ وضبط كفاف الشغاف بين إطارين متتاليين للحفاظ على حركة انقباش أكثر طبيعية في التحليل. في هذا البروتوكول، يتم استبعاد العضلات الحليمية من حجم التجويف البطيني في صور SA لتقييم الوظيفة الانقباضية والانبساطية، في حين يتم تضمينها في وجهات النظر 2CH و 3CH و 4CH للإجهاد وتحليل HDF لأن الأخير يعتمد على معرفة الحركة الدقيقة للجدار عضلة القلب، بدلا من الحجم الدقيق للغشاء البطيني.
في حين تستند معلمات الوظائف الانقباضية والانبساطية على قياس أحجام LV طوال دورة القلب ، تعتمد معلمات الإجهاد وHDF على أنماط الحركة داخل جدار عضلة القلب أيضا. لهذا، يتم استخدام تقنيات تتبع الميزات حيث يمكن تقييم إزاحة الجزء عضلة القلب من خلال التعرف على السمات التشريحية المتميزة وكثافة الإشارات بين مراحل CINE اللاحقة. التباين القوي بين تجمع الدم و عضلة القلب في صور CMR يسهل استخدام ميزة تتبع لسلالة لاحقة وتحليل HDF8. قبل تتبع ميزة CMR ، تم تحديد سلالة عضلة القلب مع تتبع البقعة ووسم الأنسجة CMR. لا يتطلب تتبع ميزة CMR وقتا إضافيا للمسح الضوئي مقارنة بوضع علامات على أنسجة CMR. ومع ذلك ، على الرغم من استخدام الزناد بأثر رجعي ، لا يزال CMR لديه قرار زمني محدود ، مما قد يجعل من الصعب تقييم التشوهات السريعة بشكل صحيح داخل الدورة القلبية.
يتطلب تقييم HDF طوال دورة القلب قياسات أقطار الصمامات التاجية الأبهرية لحساب HDF في الاتجاهات الأساسية والاستدلالية الأمامية باستخدام المعادلات الموصوفة سابقا18. وقد أظهرت هذه الطريقة تقديرات متسقة من HDF بالمقارنة مع معيار مرجعي 4D تدفق التصوير بالرنين المغناطيسي، والتي لديها توافر محدود في الاستخدام السريري نظرا لتعقيده6. من المهم أن نعرف أن التقدير القوي لأقطار الصمام صعب ، وبالتالي ، يجب الحفاظ على أقطار الصمام ثابتة لمجموعة من الحيوانات وعبر القياسات المتكررة في دراسة طولية ، حيث أن الاختلافات في هذه المعلمة بتقديرات غير صحيحة يمكن أن تطغى بسهولة على التغيرات الدقيقة في معلمات HDF. قد لا يتوفر البرنامج المحدد المستخدم لحساب معلمات GLS و HDF لجميع المستخدمين. لذلك، يمكن للمرء أن يشير إلى Voigt وآخرون19 (GLS) وكذلك Pedrizzetti وآخرون6و20 (HDF)، والتي تحتوي على جميع الأوصاف الرياضية التي تشكل أساس الحسابات ذات الصلة كما يؤديها برنامج التحليل.
ولأغراض هذه الدراسة، تم تقييم البروتوكول في الحيوانات السليمة (N = 6). تظهر مجموعة تمثيلية من منحنيات الوقت لحجم LV وdV/dt و endoGLS وHDF في الشكل 5A–C. يتم عرض متوسط قيم المعلمات الوظيفية القلبية المتعددة (EF و E’/A’ratio وذروة GLS وHDF) في الشكل 5D. هذه تتفق بشكل جيد مع بروتوكولات مماثلة المستخدمة في الأدب21. الأدب على GLS وبيانات HDF في الفئران نادرة. تم قياس متوسط قيمة GLS -22.8٪ ، وهو في نفس نطاق البيانات السريرية 8 ، مما يشير إلى أنقياساتGLS التي تم الحصول عليها باستخدام الطريقة الموصوفة ممكنة في الفئران. تظهر منحنيات HDF التي تم الحصول عليها في الفئران أيضا نفس المراحل المتميزة كما رأينا في البيانات البشرية ، مما يدل على الترجمة الناجحة لهذه التقنية إلى أبحاث ما قبل السريرية. في حين يفترض أن معلمات HDF لتكون بمثابة علامات بيولوجية مبكرة لخلل القلب ، هناك ما يبرر إجراء المزيد من الدراسات للتحقيق في القيمة التشخيصية والتنبؤية لهذه المعلمة الجديدة. تظهر النتائج في هذا البروتوكول أنه من المتوقع أن تكون نتائج HDF و GLS أكثر متغيرة عبر الحيوانات ، والتي يجب أن تؤخذ في الاعتبار عند توقع اختلافات طفيفة في النماذج الحيوانية أو آثار العلاج.
The authors have nothing to disclose.
يشكر المؤلفان دوريتا ديكرز وفاطمة الدرويش على مساعدتهما في قياسات الماوس وتحليل البيانات.
Equipment | |||
AccuSens single and multi-channel signal conditioner | Opsens solutions inc., Canada | ACS-P4-N-62SC | Used with fiber optic temperature sensor to monitor body temperature |
Duratears eye ointment | Alcon Nederland B.V., Netherlands | ||
Mouse cell | Équipment Vétérinaire Minerve, France | referred to as mouse cradle | |
MR-compatible Monitoring & Gating System for Small animals | SA Intuments, Inc., United States | Model 1030 | ERT Module (ECG/respiratory interface module) , ERT Control/Gating Module, battery pack and subdermal ECG Electrode Set |
MRI scanner | MR Solutions Ltd., United Kingdom | Model: MRS-7024 | Preclinical MRI System 7.0T/24 cm |
Multistation temperature control unit and High Flow PCA | Équipment Vétérinaire Minerve, France | Model: URT Multipostes | animal heating system |
Respiration Sensor | Graseby Medical Limited, United Kingdom | Ref 2005100 | |
RF coil | MR Solutions Ltd., United Kingdom | MRS-MVC | 38mm mouse volume RF coil for mouse body studies |
SF flowmeter | flow-meter, Italy | SF 3 | |
Vaporizer sigma delta Intermed | Penlon Ltd., United Kingdom | ||
Materials | |||
Isoflurane | AST farma, Netherlands | ||
Vaseline petroleum jelly | Unilever, United Kingdom | ||
Software | |||
BART toolbox | https://mrirecon.github.io/bart/ | ||
Mathematica 12.0 | Wolfram Research, Inc., United States | ||
MATLAB 2019a | The MathWorks,Inc., United States | ||
MEDIS Suite MR | Medis Medical Imaging Systems B.V. ,Netherlands | Image analysis software | |
PC-SAM | SA Intuments, Inc., United States | ||
Preclinical Scan | MR Solutions Ltd., United Kingdom | Scanning software | |
Retrospective version 7.0 | Amsterdam UMC, the Netherlands | Reconstuction software: https://github.com/Moby1971?tab=repositories |