评估对流感嗜血杆菌的呼吸道免疫应答

流感嗜血杆菌 （Hi）是一种正常的共生细菌，存在于大多数健康成人的咽部。Hi可能具有多糖胶囊（A-F型，例如B型或HiB型）或缺乏胶囊并且不可分型（NTHi）¹。这种细菌的粘膜定植始于儿童早期，并且存在不同定^植菌株的更替2。这种细菌也能够侵入上呼吸道和下呼吸道;在这种情况下，它可以诱导免疫反应和炎症的激活^3，4。这种炎症反应可能导致临床疾病并导致各种重要的呼吸系统疾病，包括鼻窦炎、中耳炎、支气管炎、囊性纤维化、肺炎和慢性阻塞性肺病 （COPD）。这些情况大多是由于NTHi菌株²引起的。本文将介绍使用流式细胞术和共聚焦显微镜评估对Hi的呼吸免疫反应的方法。

下面描述的方法已改编自成熟的技术，这些技术已被修改以评估对Hi的炎症反应。选择适当的抗原形式的Hi是该评估的关键部分。抗原制剂的范围从细胞壁成分到活细菌。为了建立和标准化检测，最初使用外周血样本可能非常有帮助。

流式细胞术能够在细胞水平上测量一个样品的各种参数和功能测定。与其他更通用的方法（例如酶联免疫吸附测定（ELISA）或ELISspot）相比，该技术的优点是可以评估特定的细胞反应（例如，活性氧（ROS）的产生或细胞内细胞因子的产生）。

细胞外陷阱由中性粒细胞（NET）⁵，^6，7和其他细胞如巨噬细胞（^MET）8表达。它们越来越被认为是一种关键的炎症反应，特别是在肺部感染中⁹.它们可以通过共聚焦荧光显微镜进行评估。该技术可以明确识别NET/MET，并将其表达与其他形式的^{细胞死亡区}分开来6。

流式细胞术和共聚焦显微镜都是基于荧光的测定。它们的成功取决于生物样品的最佳过滤方案。这些方法确实需要一些时间来学习，并且需要适当的监督专业知识。所涉及的仪器的购买和运行成本也很高。使用它们的最佳环境包括主要大学和三级转诊医院。

本协议中使用的方法可转移用于研究涉及呼吸系统疾病的其他类似生物（例如， 卡他莫沙菌 和 肺炎链球菌）。NTHi还与其他常见的呼吸道细菌相互作用¹⁰。