同種の抗体を用いた二重標識免疫蛍光による宿主と病原体の相互作用の研究

病原体と宿主細胞との相互作用を細胞レベルで研究するために、ウイルス、細菌、原虫などの異なるグループがほとんどの宿主細胞タイプ^1,2,3,4に感染する可能性があるため、疾患の根本的な原因に関する必須情報を提供する。また、病原体の成長を遅らせるか阻害する可能性のある治療標的を開発し、同定するのにも役立ちます。生きた条件では、産生された抗体は自己成分、ウイルスからの抗原、細菌成分または製品、真菌、寄生虫、および他の人を認識する責任がある⁵。

このため、抗体は、主に細胞構造およびタンパク質の位置および機能を理解するために広く使用されているツールである。複数の抗体標識を用いたいくつかの研究は、追加のブロッキングステップが免疫局在の特異性に寄与することを示している。さらに、ほとんどの記載されたプロトコルは、同じ宿主種からの抗体を含む特定の商業的モノクローナル抗体を使用する^{6,7,8,9,10,11,12,13,14}。

通常、二重標識免疫蛍光は、異なる種で生起された2つの抗体を使用して、目的の細胞構造または病原体および宿主細胞間の相互作用を見るために染色する。しかし、これは、一部の病原体に特異的な市販のモノクローナル抗体またはポリクローナル抗体が二重標識を行う利用できない場合に問題となる可能性がある。また、市販の抗体コンジュゲーションキットがあり、かつ、一次抗体をスクシニミジルエステル反応¹⁵によって直接フルオロフォアに結合させることができる。問題は、これらのキットはしばしば高価であり、ラベルを付けるのに十分な抗体が必要であるということです。これを知りながら、トリパノソーマbrucei16でタンパク質の局在を研究するために、同じ種で育てられた2つの異なる抗体を用いた二重免疫蛍光法の開発に成功しました。しかし、トリパノソーマクルシを含む細胞内寄生虫については、このアプローチは実証されていない。ここでは、クロス反応を伴わずに同種で生起した一次抗体を用いて細胞内T.クルジ寄生虫および宿主細胞を研究するために二重標識免疫蛍光を行う方法を示す。この方法に加えて、異なる種からの第3抗体を添加して三重免疫蛍光標識が確立されている。これらのアプローチは、抗体の供給源が限られており、任意の細胞タイプで使用できる場合に役立ちます。