双电穿孔，以定时和空间分离的细胞群

大脑皮层是一个非常复杂和复杂的组织结构。为了实现这种程度的组织，皮质投影神经元经历复杂的发育过程，需要其时间生成，迁移到皮质板的最终目的地，以及建立短和远程连接^11，2。2长期以来，研究皮质成因的经典方法基于对感兴趣的基因的敲除或敲模模型的使用。然而，这种策略，特别是使用有条件的挖空小鼠，既费时又昂贵，有时在存在遗传冗余或缺乏具体的CRE驱动因素等方面提出了其他问题。试图解决这些问题的方法之一，现在被广泛用于研究皮质发育的方法之一是在子宫电穿孔^33，4。4在子宫电穿孔是一种用于体细胞转变的技术，允许在体内瞄准神经干细胞及其后代。该方法可用于通过表达荧光蛋白^55、66来标记细胞，用于体内基因操作（即功能测定的增益或丧失^{）7、8、9，8,}用于在体外分离⁷电质皮质和培养细胞^98,8、10。此外，在电体电穿孔中，允许对目标区域进行时间和区域控制。该技术具有多种应用，已广泛应用于研究神经元迁移、干细胞分裂、神经元连通性等学科^{88、9、11、12。9,11,12}

目前的手稿描述了在子宫电穿孔中使用一种称为双质电穿孔的电穿孔变体，用于分析不同时间和空间起源的大脑皮层细胞的相互作用。这些研究在使用鼠型时完成极其复杂，因为它们需要组合使用几种转基因系。本文中描述的协议的一些应用包括研究相邻细胞之间的紧密相互作用，以及通过远程投影研究远程细胞之间的相互作用。该方法要求在子宫电穿孔手术中进行两次独立的手术，在时间和空间上分离，以针对感兴趣的不同细胞群。这种方法的优点是有可能利用野生动物操纵一种或两种神经元的基因功能。此外，这些功能实验可以结合细胞质或膜标记荧光蛋白的表达相结合，以可视化靶细胞（包括树突和斧头）的精细形态，并分析与对照组相比细胞相互作用的可能差异（即仅标记荧光蛋白的细胞）。

此处划定的协议侧重于研究新皮质内的细胞相互作用，但这一策略也可用于研究与可用于子宫电穿孔的外皮质区域的相互作用，如亚皮质或丘脑^13、14,14或其他结构中的细胞-细胞相互作用，如小脑^15。不同区域的瞄准基于电极的方向和注入DNA的心室（横向、第三或第四）。通过此处描述的策略，我们可以标记大量细胞，这对于评估功能实验中连接/内伸的一般变化非常有用。然而，为了研究连接性的变化，人们可以使用子宫电穿孔的修改版本来获得更稀疏的标签和识别单细胞^16。总之，双电镀是一种通用方法，它允许瞄准时空分离的细胞群，并在控制条件下或与功能实验相结合，详细研究它们的相互作用，大大降低了时间和经济成本。