使用流细胞测定测量红细胞补充受体1

CR1（补充受体类型1，CD35）是一种200 kDa跨膜糖蛋白存在于许多细胞类型的表面，如红细胞^1、B淋巴细胞^2、单细胞细胞、一些T细胞、卵泡变性细胞^3、胎儿星斑细胞⁴和球状球状细胞^5。CR1干扰其配体C3b、C4b、C3bi^6,6、7、8、9，第一补分组C1q^7,8,910和MBL（曼南结合语^）11的子单元抑制补品的激活，并参与体液和细胞免疫反应。

在灵长类动物，包括人类，红细胞CR1参与将免疫复合物输送到肝脏和脾脏，以净化血液，防止它们在脆弱的组织中积累，如皮肤或肾脏12、13、14。^12,13,14免疫复合物和红细胞之间的免疫粘附现象取决于CR1分子^{的数量15。}在人类中，CR1/E的平均密度只有500（即，每红细胞500个CR1分子）。此密度因人而异（100~1，200 CR1/E），同一个体从一个红细胞到另一个红细胞。一些”空”表型的个体表达少于20 CR1/E^16。

CR1/E的密度由两个共同主导体体等位基因调节，这些等位基因编码为CR1_1^17，18,18的intron 27中。这种突变为HindIII酶产生额外的限制位点。在这种情况下，使用 HindIII 消化后获得的限制片段为 7.4 kb，用于与 CR1（H： 高等位基因）的强表达相连的等位基因，与低 CR1 表达式（L：低等位基因）相连的等位机为 6.9 kb。这种联系在白种人和亚洲人中被发现，但在¹⁹岁的非洲人后裔中却找不到。

红细胞CR1的表达水平也与exon 13编码SCR 10（I643T）和exon 19编码SCR16（Q981H）中存在点核苷酸突变有关。其高在同型643I/981Q和低同源643T/981H个体^20。因此，”低”个人表达约150 CR1/E，”中等”个人表达约500CR1/E，”高”个人表达约1，000CR1/E。

除了这种红细胞密度多态性外，CR1 还具有与四种不同尺寸的异位对应的长度多态性：CR1+1 （190 kDa）、CR1+2 （220 kDa）、CR1+3 （160 kDa） 和 CR1+4 （250 kDa）²¹和对应于血型 KN²²的抗原多态性。

我们提出基于流细胞测定的方法，以确定CR1/E的密度。 使用已知CR1/E密度的三个受试者，表达低密度水平（180 CR1/E）、中等密度水平（646 CR1/E）和高密度水平（966 CR1/E），使用流式细胞仪进行抗CR1免疫后，很容易测量其红细胞或红血球（RBC）的平均荧光强度（MFI）。然后，可以将表示 MFI 的标准线绘制为 CR1/E 密度的函数。测量其CR1/E密度不为人知的受试者的MFI，并将其与该标准线进行比较，可以确定个体的CR1/E密度。这项技术已在实验室使用多年，并使我们能够发现红细胞CR1在许多疾病的表达减少，如系统性红斑狼疮^{（SLE）23，}后天免疫机能丧失综合症（艾滋病^）24，疟疾^25，最近阿尔茨海默病（AD）26，27。^26,27开发针对CR1的药物与红细胞耦合，如抗血栓药物²⁸需要评估CR1/E密度，以及提供量化CR1的可靠技术。

呈现的协议以唱歌的方式运行。它适用于确定CR1/E的密度，许多个人使用特定的商业上可用的96孔板（见材料表）。为此，我们很容易将方法适应任何96井板。对于每个样本，红细胞细胞的细胞悬浮液（0.5 x 10⁶×10⁶红细胞）分布在每口井。对于每一口井，首先添加主要的抗CR1抗体，然后是链球菌PE，二级抗链球菌类抗体，再次使用与方法相同的稀释剂，但通过调整体积和尊重相称性。

应同时抽取来自受试者的血液样本和用于CR1的受试者的血液样本，在4°C下储存在冰箱中，并在4°C（冰上和/或冰箱）处理。