成年斑马鱼端脑中疟原虫DNA在活体传递的电穿孔方法

斑马鱼是优秀的动物模型，用于检查刺伤后的大脑再生。与哺乳动物相比，在进化阶梯上，斑马鱼等进化较少的物种通常表现出较高的形成性神经发生率和成人神经干细胞栖息的更广区域，导致在整个过程中不断产生新的神经元成人生活中的大多数大脑区域。与^{哺乳动物1}相比，这一特征似乎与斑马鱼的再生能力显著提升有关，因为斑马鱼在所研究的大多数脑损伤模型中具有显著的潜力，能够有效地产生新的^神经元。 3，4，5，6，7，8 。在这里，斑马鱼端脑研究，因为它是一个大脑区域与突出的神经发生在成年。这些成年神经发生区与成年哺乳动物脑^中神经原发生^{区9、10、11}同源。

由于存在径向胶质细胞或脑细胞等径向胶质，斑马鱼端脑素中存在丰富的神经原发生区。Ependymoglial细胞作为常驻的成人神经干细胞，负责在完整和再生^{的大脑3，5}中产生新的神经元。系骨追踪实验表明，心室叶膜对损伤有反应，然后增殖并产生新的神经细胞，迁移到病变^部位5。由于斑马鱼端脑的电化性质，腹腔细胞排列在心室表面，并建造心室壁。背叶心室壁由背端阴膜细胞层形成（图1A）。重要的是，斑马鱼叶黄体体现了哺乳动物径向胶质和阴叶细胞的特征。长径向过程是径向胶质细胞的典型特征，而细胞延伸和紧密结（及其心室位置）是阴囊^{细胞12、13、14}的典型特征。因此，这些细胞被称为阴叶细胞。

为了在再生过程中遵循单个阴叶细胞的体内行为，需要可靠地标记它们。荧光显微镜的体内细胞标记方法已经描述过，如内源性报告剂或亲脂^染料15。与电穿孔相比，这些方法可能需要较长的时间，而且通常无法提供单细胞标记或永久长期跟踪的可能性。然而，电穿孔（除了单细胞标记）提供了将新的DNA引入宿主细胞的可能性。此外，与其他DNA移植到细胞的方法相比，电穿孔已被证明是最有效的方法之一16，17，18，19。

这里介绍的是一个电穿孔协议，已细化，以标记在成年斑马鱼端脑中的单一脑细胞。该协议允许标记单个细胞，以便长期跟踪^它们20或操纵特定途径在细胞自主^{的方式21，22。}