성체 얼룩말 기피 텔렌세팔론에서 플라스미드 DNA의 생체 내 전달을 위한 전기 개공 방법

Zebrafish는 찔린 상처 부상 후 뇌 재생을 검사하는 우수한 동물 모델입니다. 포유류에 비해, 진화 사다리에, 제브라피시와 같은 덜 진화 된 종은 일반적으로 구성 신경 발생의 높은 비율을 보여주고 성인 신경 줄기 세포 거주의 넓은 영역, 전반에 걸쳐 새로운 뉴런의 일정한 생성으로 이어지는 성인 생활에서 대부분의 뇌 영역. 이 기능은 포유류 1에 비해 제브라피시의 상당히 높은 재생 능력과 상관 관계가 나타납니다^1,제브라피쉬는 효율적으로 연구^대부분의뇌 손상 모델에서 새로운 뉴런을 생성하는 놀라운 잠재력을 가지고^{2, 3,4},^5,6,7,8. 여기에서, 얼룩말 말살론은 성인기에 있는 눈에 띄는 신경 발생을 가진 두뇌 지역이기 때문에, 공부됩니다. 이러한 성인 신경발생 영역은 성인 포유류^뇌의신경발생 영역과 상동성이며^9,10,11.

얼룩말기 말뇌에 풍부한 신경 영역은 세포 또는 ependymoglia 세포 같이 방사형 신경교의 존재 때문에 존재합니다. Ependymoglial 세포는 상주 성체 신경 줄기 세포역할을 하며 뇌의 손상및 재생 모두에서 새로운 뉴런의 생성을 담당하고 있으며^3,5. 계보 추적 실험은 심실 ependymoglia가 상해에 반응한다는 것을 보여주었습니다, 그 때 증식하고 병변^{사이트5로}이동하는 새로운 neuroblasts를 생성합니다. zebrafish 말뇌파의 적중특성으로 인해, ependymoglial 세포는 심실 표면을 일렬로 세우고 심실 벽을 건설합니다. 등쪽 심실 벽은 등쪽 에펜디멀 세포층에 의해 형성된다(도1A). 중요한 것은, 제브라피쉬 ependymoglia는 포유류 방사형 글리아 및 형형 세포 둘 다의 특성을 구현합니다. 긴 방사형 과정은 방사형 신경교 세포의 전형적인 특징이며, 반면 세포 확장 및 단단한 접합부 (뿐만 아니라 심실 위치)는 ependymal 세포^12,13,14의전형적인 특징이다. 따라서, 이들 세포는 에펜디모글리아 세포라고 한다.

재생 중에 단일 ependymoglial 세포의 생체 내 거동을 따르려면, 그들은 안정적으로 표지 될 필요가있다. 형광 현미경 검사법에 대한 생체 내 세포 표지의 다양한 방법은 내인성 리포터 또는 친유성^{염료(15)와}같은 이전에 기술되어 왔다. 이러한 방법은 전기 천공과는 달리 더 오랜 시간이 필요할 수 있으며 종종 단일 세포 라벨링 또는 영구 장기 추적의 가능성을 제공하지 않습니다. 전기 천공은, 그러나 (단 하나 세포 표지 이외에) 호스트 세포로 새로운 DNA를 소개의 가능성을 제안합니다. 더욱이, 세포 내로의 DNA 전달의 다른 방법에 비해, 전기천공은^{16,17,18,19중}가장 효율적인 방법 중 하나인 것으로 입증되었다.

여기서 제시된 것은 성체 얼룩말기 말뇌골론에서 단일 에펜디모글리아 세포에 라벨을 붙이기 위한 목적으로 정제된 전기 개루 프로토콜이다. 이 프로토콜은 장기간^20에 걸쳐 이를 따르거나 세포 자율 방식으로 특정 경로를 조작하기 위해 단일 ependymoglial 세포의 라벨링을^{허용한다 21,22.}