排ビボ移行システムにおけるリンパ球移動の評価

このオリジナルの移行方法は、実験医学1のジャーナルで1962年にスティーブン・ボイデンによって提示されました。ケモタキシスとケモキネティクスについて私たちが知っていることの多くは、ボイデン室の開発なしには不可能です。1977年に最初のケモカインが発見される前に、好中球1、2の細胞運動を増幅しながらマクロファージの細胞運動を停止させることができる血清因子について学ぶために、ex vivo移行システムが使用された。免疫細胞の移動に関する膨大な知識が開発され、現在までに47のケモカインが19の対応する^{受容体3、4}で発見されています。さらに、これらのケモカイン経路の多数の阻害剤/増強剤は、^治療目的5、6、7、8の開発を受けている。これらの化合物の多くは、与えられたケモカ^イン9に対する化合物と免疫細胞応答性との間の直接的な相互作用を理解するために同様の移行室で試験されている。

転移、または糖尿病は、炎症を起こした組織への、明確な^{感染10、11}に対する健康的な炎症反応に不可欠なプロセスである。ボイデン室、移動システム、またはトランスウェル装置は、一般に多孔質^膜1、12によって分離された2つのチャンバーから構成される。下部チャンバーは、最も頻繁に目的のケモカインを含む媒体を保持し、一方、白血病は上部のチャンバーに配置されます。膜中の細孔の大きさは、目的の細胞の大きさに基づいて選択することができる。このプロジェクトでは、リンパ球細胞の大きさが7~20μmの3μmの多孔質膜を細胞開発の段階に応じて選択しました。この細孔の大きさは、これらの細胞が受動的に細孔を通って落ちていないことを保証するが、彼らは積極的にケモカイン勾配に応答して移動していることを保証します。

このプロトコルの主な利点は、その費用対効果です。生体内移住では、動物の取り扱いや手術に関する広範な訓練が必要であり、研究者が常に利用できるわけではない高出力顕微鏡検査が必要な場合が多いため、移住は困難です。トランスマイグレーションを増強または阻害すると考えられる化合物の費用対効果の高いスクリーニングは、生体内イメージングの前に達成することができる。移行システムが厳密に制御されているので、細胞は最初にトランスウェル装置に加え、またはその逆に、ケモカイン阻害剤で最初に処理し、次いでトランスウェル装置に添加された細胞を治療してもよい。最後に、内皮細胞および/または地下膜タンパク質は、ケモキネティクスにおけるこれらのバリア細胞の関与を理解するために、トランスウェルインサートの1〜2日前にトランスウェルインサートの底部に添加することができる。繰り返しますが、システムのこれらの操作は、生体内研究のより複雑な前に、特定の化合物の有効性に関する重要な情報を決定する強力な手段を提供します。

転移室システムを利用することは、インビボおよびインビトロ^{条件12、13、14}の様々な下でリンパ球移動性を評価する効果的な方法である。ここで、我々は、移民室内におけるケモカインに対する外生生リンパ球応答性を評価するための最適化された方法について説明する。この実験の例^{では、CD4+T}細胞およびグループ2の自然リンパ球細胞(ILC2)を、雄および雌から単離し、BALB/cマウスをOVA-アレルゲン曝露後に分離した。アレルゲンチャレンジマウス由来のCCR4+CD45+リネージュ-(LIN-)ILC2がCCR4+CD4+Tヘルパー細胞よりもCCL17およびCCL22に向かってより効率的に移行するという仮説が生成された。 CCL17およびCCL22は、M2(アレルギー性)表現型の樹状細胞およびマクロファージによって一般的に産生されるケモカインであり、他の細胞の中でも、^{アレルギー15、16}において。CCL17およびCCL22は、気道^{悪化16、17、18}の間に肺で容易に検出されるので、アレルギー性炎症のバイオマーカーと考えることができる。重要なことに、CCR4発現は未処理の対照と比較して上昇し、ハウスダストダニ処理動物から単離されたILC2から生成されたバイオインフォマティクスデータ、および同様にIL-33でex vivoを処理したナイーブ動物からのILC2(IL-33()アレルゲン促進生殖細胞カイン)は、CCR4^19、20をアップレギュレートします。さらに、免疫ゲノムプロジェクトデータベース(www.immgen.org)におけるILC2のデータによれば、CCR4 mRNAはこれらの自然免疫細胞において高く発現される。現在までに、ILC2の組織への人身売買に関してはほとんど知られていないが、ILC2^{およびCD4+T}細胞は、同様の転写因子および受容体を発現する化学タキシスおよびケモキチン学に類似したケモカインおよび受容体を使用する可能性が高い。そこで、ILC2^とCD4+Tリンパ球のCCL17対CCL22応答性を、雄と雌の両方から、OVAチャレンジ動物と比較した。