使用莫里斯水迷宫对阿尔茨海默氏病小鼠模型学习和记忆能力的分析

该协议经北京中医药大学动物伦理委员会批准，符合《中国实验室动物护理与使用指南》。在实验过程中没有意外死亡的情况，在这项研究中也不需要对动物进行安乐死。 1. 准备 购买30只雄性SAMP8小鼠和10只雄性SAMR1小鼠（年龄：8个月）。 以24°2°C的温度和12小时的黑暗/光循环将小鼠单独安置在单独的通风笼中。 用标准颗粒饮食喂养小鼠，并提供无菌饮用水。 在实验前，将所有小鼠适应环境5天。 2. 动物分组 随机将30个SAMP8小鼠分成三组（n = 10/组）：AD组、手动针灸（MA）组和医学（M）组。 使用10个SAMR1小鼠作为正常对照（N）组6。 3. 盐酸二甲苯片剂的管理 粉碎多普齐尔盐酸片剂（5毫克/片），并将其溶解在50 mL的蒸馏水中。 在整个实验期间，每天8次，包括进行MA治疗和MWM测试的日子，每天使用口服气肿一次，以1mg/kg的剂量向小鼠提供步骤3.1中制备的药物。 4. 人工针灸管理 将MA组的小鼠固定在小鼠袋中。 使用一次性无菌针灸针（0.25毫米 x 13毫米），在白辉（GV20）和银塘（GV29）5对鼻子上应用MA的扁平刺法20分钟。确保针深度为0.2~0.3厘米。 在整个实验过程中，每次每次 15 秒，包括执行 MA 治疗和 MWM 测试的天数，在 90° 范围内以大约 180 r/min 的速度双向旋转操作。 5. MWM测试 注：在连续15天治疗后24小时，对四组小鼠进行MWM测试。有序进行可见平台审判、隐藏平台审判、探究审判和逆转审判。 准备 MWM 测试。 将MWM器件和信号采集和处理系统放置在实验室中，用于保持隔音。 将圆形白色储罐（直径 = 90 厘米，高度 = 50 厘米）包围在 MWM 设备中间，由不透明布包围。 将摄像机固定在 MWM 设备的天花板上，并将其连接到带有自动跟踪系统的录像机以收集数据。 使用两条相互垂直的线（标为北 （N）、南 （S）、东 （E） 和西 （W），将水迷宫水箱平均划分为四个相等的区域。在概念上将池区域划分为四个大小相同的象限（NE、NW、SW 和 SE）。 在鼠标的视线中，将不同形状的视觉提示作为可视参考值（例如，正方形、三角形和圆形）放在每个象限的墙上。注：远端提示是动物定位平台的导航参考点。因此，请勿在测试期间移动它们。研究者的位置是一个潜在的远端提示，可以影响MWM。因此，研究人员在等待动物进行试验时，应远离老鼠的视线。 用电加热器将水注到30厘米深的圆形水箱中，并保持在22~2°C。 用大约 150 克奶粉使水不透明。 执行可见平台试用。 将塑料圆形平台（直径 = 9.5 厘米;高度 = 28 厘米）放置在水面上方 1 厘米处随机放置任何象限。 在平台上放一个黑色的旗帜。 从面向水箱壁的四个起始位置之一，将每只鼠标轻轻地从水中放入水中。不要将鼠标放入水中。 一旦鼠标释放到水中，立即激活计算机跟踪程序。 给每只鼠标60s搜索平台。在每个试验结束时，将每只鼠标放在平台上，让它在平台上停留 10-30 s。 观察电脑上老鼠的游泳轨迹，记录鼠标寻找平台的时间作为逃生延迟，并分析游泳速度。 用毛巾擦干每只鼠标，用电加热器加热。请务必使用适当的热源，以防止动物过热。注：将每只鼠标放入四个不同起始象限的池中，进行四次试验，并在每次后续试验时将平台移动到不同位置。使用每只鼠标进行两次试验之间的间隔为 15-20 分钟。 执行隐藏的平台试用/放置导航测试。 在 SE 象限中放置同一平台而不放置标志。 从面向池壁的四个象限（NE、NW、SW、N）中随机将鼠标放入池中，进行四次试验。在两次试验之间使用 15-20 分钟的时间间隔。 给每只鼠标60s搜索隐藏的平台。 在鼠标爬到平台进行后续分析后，记录每次试验的逃生延迟。 用毛巾擦干每只鼠标，用电加热器加热。注：从第 2 天到 6 天开始执行隐藏平台试用。如果鼠标在 60 s 内找不到平台，请引导鼠标爬到平台，并在每次试用结束时将其停留在 10-30 s。连续5天对每只鼠标执行4次试验/天，平台和视觉提示处于恒定位置。 执行探测试验。注：将池中的每一只鼠标定位在新颖的起始位置，以观察鼠标的空间探索能力。 卸下平台。 找到池中面向罐壁的每个鼠标一次，为 60 s。 在迷宫中记录游泳距离、游泳速度和平台交叉编号。 用毛巾擦干每只老鼠，并在试验后提供温暖。 执行反转试验。注：从第8天至11天开始执行反转试验。 将平台放置在 NW 象限的中间（而不是 SE 象限）。 按照隐藏平台试用部分中详述的步骤 5.3.2 +5.3.5 进行操作。 6. 统计分析 使用统计软件（例如，SPSS 20.0）执行统计分析。