여기에 전 생체 모성 태아 혈관 관류의 프로토콜이 제시 되어 모계의 혈관 조직으로 시험 물품의 투여를 가능 하 게 하 고, xenobiotic 입자 또는 약리학 적 제제의 변경 이외에의 태 반 전달을 평가할 수 있도록 태 반 생리학.
태 반은 임신 중 태아에 대 한 장벽 역할을 하 고 폐기물에 대 한 영양분 교환을 중재 하는 주요 기관입니다. 분석은 여기에 고립 된 쥐 태 반을 완료 하 고 생체 이물질 ex vivo의 모성 대 태아 전 좌를 평가 하기 위하여 여기에 기술 됩니다. 또한, 이러한 방법론을 통해 태아 및 태 반 대사에 대 한 유체 흐름과 같은 생리 적 과정의 평가가 진행 될 수 있다. 이 기법은 제약 후보 또는 환경 오염 물질의 모계-태아 동역학을 평가 하는 데 적합 합니다. 현재의 대안적 접근법과는 대조적으로,이 방법론은 분리 된 모계 태아 맥 관 구조의 평가를 가능 하 게 하 고, 전신 신경 또는 면역 침범을 제거 하 고, 생리 적 기능에서 관찰 된 변화를 허용 한다 격리 된 조직 내의 지역 요인에 기인 합니다.
형태 학적 구조 및 생리 적 반응성을 유지 함으로써, 장기 관류는 수용 된 시스템-또는 신진 대사 기능을 분석 하기 위한 조직 기반 접근. 이러한 관류 기술은 다양 한 약리 및 기계적 자극에 대 한 온전한 조직 반응의 전 생체 내 검사를 허용 한다. 인간 태 반의 관류는 초기에 1958에서 설명 하였으며, 구 연산 사이클의 대사 활성에 대 한 호르몬 효과를 확인 하는 단계; 이전에 조직 균질 화에서 확인 된 데, Troen과 고 든은 새로운 생리 적 접근법을 사용 하 여 내 분 비 활동을 명확히 할 필요성을 인식1. 같은 시대에, 단일 관류 (모계에서 태아 또는 태아를 산 모) 전략을 큰2,3 및 작은4 동물 모델에 설명 했다 설탕의 태 반 이동, 염, 및 안티 피 린 약물. 생체 내 및 전 생체 이중 관류 (배위 된 모성 및 태아 관류) 기술 들은 생체 내5 및 전 생체 내6,8 방법론을 이용 하 여 태 반 전달을 특성화 하기 위해 기술 되었다. 트랜스 미션 및 주사 전자 현미경의 기술적 진보는 연구원 들이 관류 후 인간 태 반 조직의 구조적 및 기능적 완전성을 검증할 수 있게 했습니다.
인간 태 반 조직과 개인 자 엽의 관류가 가장 관련성이 있지만, 약리학 적 제제 및 환경 오염 물질의 급속 한 발달은 제 노 생체의 조기 스크리닝을 위한 동물 관류 모델의 사용을 필요로 한다 태 반 장벽을 가로질러 이동 합니다. 이 태 반 관류 방법은 더 쉽게 달성 하 고 생리학적으로 관련 된 쥐 태 반을 사용 하 여 태 반 장벽에 걸쳐 전달의 평가를 허용 한다. 또한, 노출 후 일정 시간에 걸쳐 태 반 장벽을 가로지르는 유체 흐름은 배꼽 으로부터 유입 되는 관류 량의 부피를 측정 함으로써 평가 될 수 있다. 산 모의 및 태아 순환 둘 다에서 태 반 관류를 허용 하는 것에 의해,이 이중 유동 전체 기관 접근법은 현재 시험관 내 및 생체 내 접근법에 비해 유리할 수 있다. 이 방법은 산 모의 측면을 통해 서에 노 바이오 틱을 투여 하는 것은 배꼽 정 맥을 통해 태 반을 가로질러 나온다, 또는 그 반대의 경우에서 측정 될 수 있다. 여기에 제시 된 프로토콜은 모성 자 궁 동맥에서 태아 구획으로 20 nm 폴리스 티 렌 (식품 및 의료 제품에 사용 되는 일반적인 나노 플라스틱)의 전달을 설명 하기 위해 태 반을 가로질러 유체 흐름의 관련 감소를 기술 할 것 이다 임산부 및/또는 태아의 흐름에 영향을 미치는 태 반 전달, 신진 대사 및 생리 적 변형을 평가 하기 위해 여러 생리 적, 약리학 적 및 독성 학적 설정에서이 방법을 사용 합니다.
이러한 관류 법은 자 궁 혈관 구조 및 트로 포 블 라스트 층의 태 반 장벽 및 생리 적 기능에 대 한 신속한 평가를 가능 하 게 한다. 모계 자 궁 동맥의 원 위부 말단에 근 위를 관류 하는 것은 태아에 혈액을 보내는 것을 담당 하는이 주요 혈관을 통해 모계 혈액 흐름의 생리학을 시뮬레이션 한다. 이 방법론은 고립 된 모성, 태 반 및 배꼽 조직에 대 한 생리 적 평가를 허용 하며, 따라서 생리학의 변화는 혈관 병리학으로 확인 될 수 있습니다. 면역 및 신경 자극은 전 생체 절차에서 제거 됩니다. 따라서 적절 한 평가를 위해 용기 벽에 눈물 이나 구멍을 뚫 지 않고 기포를 제거 하지 않도록이 용기를 조심 스럽게 분리 하는 것이 중요 합니다. 가스 색 전 혈관의 내 피 층에 손상을 일으킬 수 있습니다. 해 부 동안 자 궁, 태 반 및 태아 사이의 혈관 연결을 유지 함으로써, 태아에 대 한 유체 및 트랜스 로케이션의 평가가 관찰 될 수 있다. Xenobiotic의 투여와 함께,이 경우 20 nm 폴리스 티 렌, 자 궁 동맥의 말단 부 및 태 반을 통해 태아 구획에 대 한 반응 속도는 180 분의 시간 과정에 걸쳐 폐수의 분석에 의해 평가 될 수 있다.
이중 관류 모델을 설명 하 고이 문서에서 산 모의 입자와 체액을 태아 구획으로 이송 하는 동안, 평가는 또한 태아에서 산 모 구획으로 역으로 이루어질 수 있다. 여기에서 설명 되는 방법의 한 가지 제한은 말단 자 궁 정 맥이 통조림 또는 샘플링 되지 않은 것 이다. 향후 연구에서, 특히 태아와 모계 간의 전이에 초점을 맞춘, 말단 자 궁 혈관을 통조림 화 하 고 샘플링 하는 것이 중요할 것 이다. 이 모의 실험에서 취해진 폐수는 엑 시 놀 틱 전달을 평가 하는데 사용 되었다; 그러나 내 분 비 및 분자 태 반 기능 또는 태아 영양과 관련 된 다양 한 평가가 수행 될 수 있습니다.
이 프로토콜의 강점은 사소한 제한 보다 훨씬 큽니다. 준비는 실험 조건을 평가 하기 위하여 전체 기관의 생리 적인 구조 그리고 완전성을 유지 합니다. Ex vivo 태 반 관류는 생식 위험 평가를 제대로 결정 하기 위해 세포 기반 시험관 내에서 전체 동물 노출로의 과학적 진행입니다. 이것은 태 반 약리학 적 약물 처분, 약 동학, 독성 학, 생리학 및 모성 태아 의학을 평가 하는 연구를 위한 귀중 한 기술로 간주 될 수 있습니다.
The authors have nothing to disclose.
이 작품은 국립 환경 보건 과학 연구소 (R00-ES024783), 럿 거 스 센터 환경 노출과 질병 (P30 ES005022), 트 러 거 스 공동 대학원 독성 학 프로그램 (T32)에 의해 지원 되었다. 우리는 또한 마이클 고 드 켄, 마리 안 Polunas, 페드로 루로가 기술 전문성을 보유 하 고 있으며, 아담 박사는 관류 회로도 설계에 대 한 호의를 베 고 싶습니다 (그림 5).
Black braided silk non-absorbable surgical suture non-sterile | Surgical Specialties Look | AACO805 | |
Fine forceps | FST by Dumont Switzerland | 11252-20 | |
Fine scissors | FST by Dumont Switzerland | 14060-10 | |
Glass cannula pack | Living Systems Instrumentation (LSI) | GCP-75-100 | |
Microcentrifuge Tubes 2.0mL polypropylene graduated tube with locking lid MIXED | Fisherbrand | 02-681-299 | |
Non-serrated fine curved micro serrefine clamps | InterFocus | 18052-03 | |
Perfusate pump | ISMATEC | ISM795C | |
Pressure monitor | Living Systems Instrumentation (LSI) | Mode PM-4 | |
Self-heating single vessel chamber | Living Systems Instrumentation (LSI) | CH-1 | |
Servo Pump | Living Systems Instrumentation (LSI) | ModelPS-200-P | |
Stainless steel blunt needle 23 gauge | Component Supply Co. | 04651-01 | |
Stainless steel blunt needle 25 gauge | Component Supply Co. | 07116-01 | |
STERILE Nylon Suture | AROSurgical Instruments Corporation | T04A00N07-13 | |
Stopcock | Sedation Resource | 6-205-04 | |
Temperature Controller | Living Systems Instrumentation (LSI) | Model TC-09S |