هنا يتم تقديم بروتوكول من الجسم الغريب السابق الام الجنين الاوعيه الدموية الوعائية لتمكين أداره ماده اختبار في الوعائية الاموميه وتقييم نقل المشيمة من الجزيئات البيولوجية أو العوامل الدوائية بالاضافه إلى التعديلات في فسيولوجيا المشيمة.
المشيمة هي الجهاز الرئيسي خلال فتره الحمل التي تعمل كحاجز للتعرض الجنينية اكسيبيوبيوتيك ويتوسط تبادل المواد الغذائية للنفايات. يتم وصف الفحص هنا لأداء المشيمة المعزولة الفئران وتقييم الانتقال من الام إلى الجنين من xenobiotics السابق الجسم الحيوي. الاضافه إلى ذلك ، يمكن اجراء تقييم العمليات الفسيولوجية مثل تدفق السوائل إلى الجنين واستقلاب المشيمة مع هذه المنهجية. هذه التقنية هي مناسبه لتقييم حركيه الام إلى الجنين من المرشحين الصيدلانية أو الملوثات البيئية. وعلي النقيض من النهج البديلة الحالية ، تسمح هذه المنهجية بتقييم الاوعيه الدموية الاموميه الجنينية المعزولة ، مع أزاله المشاركة العصبية أو المناعية الجهازية ، مما يسمح بان تكون اي تغييرات ملحوظة في الوظيفة الفسيولوجية تعزي إلى العوامل المحلية داخل الانسجه المعزولة.
من خلال الحفاظ علي البنية المورفولوجية والاستجابة الفسيولوجية ، كان الجهاز ترويه نهجا معتمدا علي النظام أو الانسجه لتحليل وظيفة التمثيل الأيضي. هذه التقنيات ترويه تسمح لفحص الجسم السابق من الاستجابات الانسجه السليمة لمجموعه متنوعة من المحفزات الدوائية والميكانيكية. وصفت perfusion من المشيمة البشرية في البداية في 1958 لتحديد الآثار الهرمونية علي النشاط الأيضي لدوره حمض الستريك. بعد ان تم التعرف عليها سابقا في المتجانسات الانسجه ، واعترف Troen غوردون الحاجة إلى توضيح النشاط الغدد الصماء باستخدام نهج الفسيولوجية الجديدة1. في نفس الحقبة ، تم وصف استراتيجيات أحاديه الانصهار (من الام إلى الجنين أو الجنين إلى الام) في نماذج كبيره2و3 و4 الحيوانية الصغيرة لفهم نقل المشيمة من السكريات ، والأملاح ، والادويه المضادة للبيرالين. في فيفو والسابقين فيفو ثنائي الانصهار (الام والجنين perfusion) تم وصف تقنيات لمزيد من توصيف نقل المشيمة باستخدام في فيفو5 و ex فيفو6,7,8 منهجيات. سمحت التطورات التكنولوجية في نقل ومسح المجهر الكترون الباحثين للتحقق من سلامه الهيكلية والوظيفية للانسجه المشيمة البشرية بعد ترويه9.
في حين ان ترويه من انسجه المشيمة البشرية و كوتيليدون الفردية هي الأكثر صله بالموضوع ، والتطور السريع للعوامل الدوائية والملوثات البيئية يتطلب استخدام نموذج ترويه الحيوانية للفحص المبكر من غريب حيوي نقل عبر حاجز المشيمة. هذا الأسلوب ترويه المشيمة يسمح لتقييم نقل عبر حاجز المشيمة باستخدام أكثر سهوله يمكن الوصول اليها والمشيمة الفئران ذات الصلة الفسيولوجية. الاضافه إلى ذلك ، تدفق السوائل عبر حاجز المشيمة علي مدي فتره من الزمن بعد التعرض يمكن تقييمها من خلال قياس حجم perfusate القادمة من الشريان السري. بفضل السماح بالتلقيح المشيمة من كل من الام والجنين التعميمات ، وهذا النهج المزدوج التدفق الجهاز كله يمكن ان تكون مفيده بالمقارنة مع الحالي في المختبر والنهج المجرية. يسمح هذا الأسلوب باداره الجانب الأمومي من خلال الجوانب النفاسية التي تقاس من perfusate الذي يظهر عبر المشيمة عبر الوريد السري ، أو العكس. البروتوكول المعروض هنا سوف يصف نقل 20 نانومتر البوليسترين (نانوبلاستيك المشتركة المستخدمة في المواد الغذائية والمنتجات الطبية) من الشريان الرحمي الامومه إلى المقصورة الجنينية وانخفاض المرتبطة في تدفق السوائل عبر المشيمة لتوضيح استخدام هذه الطريقة في العديد من الإعدادات الفسيولوجية ، والدوائية ، والسمية لتقييم انتقال المشيمة ، والأيض ، والتعديلات الفسيولوجية التي تؤثر علي تدفق الأمهات و/أو الاجنه.
هذا الأسلوب ترويه يسمح للتقييم السريع لحاجز المشيمة والوظيفة الفسيولوجية للطبقة الوعائية الرحمية وطبقه تروفوبلاست. ويحاكي التعليب والانصهار في النهايات القريبة لشريان الرحم الأمومي فسيولوجيا تدفق الدم الأمومي من خلال هذه السفينة الرئيسية المسؤولة عن إرسال الدم إلى الجنين النامي. وتسمح هذه المنهجية بالتقييم الفسيولوجي للاوعيه الدموية المعزولة الاموميه والمشيمة والسرية ، التالي يمكن التعرف علي التغيرات في فسيولوجيا كامراض وعائية ؛ تتم أزاله الإينيرفيشنز المناعية والعصبية في الاجراء السابق فيفو. ولضمان التقييم السليم ، من المهم لذلك ان تقوم هذه الاوعيه بعناية بحيث لا تخلق اي دموع أو ثقوب في جدران الاوعيه ، وتزيل فقاعات الهواء. قد يسبب الغاز الصمات ضررا علي الطبقة البطانية من الاوعيه الدموية أو عرقله الاوعيه. من خلال الحفاظ علي الاتصالات الوعائية بين الرحم والمشيمة والجنين اثناء التشريح ، يمكن ملاحظه تقييم السوائل والنقل إلى الجنين. مع الاداره من [اكسيبيوتيك], في هذا حاله 20 [نم] بوليستيرين, حركيه إلى النهاية بعيده من الشريان رحميه ومن خلال المشيمة إلى المقصورة جنينيه يستطيع كنت قيمت بتحليل الفضلات علي دوره زمنيه من 180 دقائق.
في حين تم وصف نموذج ثنائي الانصهار وتم رصد نقل الجزيئات والسوائل من الام إلى المقصورة الجنينية في هذه المقالة ، ويمكن أيضا اجراء تقييمات في الاتجاه المعاكس من الجنين إلى حجره الامومه. أحد القيود علي الطريقة الموصوفة هنا هو ان الوريد الرحمي البعيد لم يتم أكله أو أخذ عينات. في الدراسات المستقبلية ، وخاصه تلك التي تركز علي نقل الجنين إلى الام ، سيكون من المهم تعليب وتذوق الاوعيه الرحمية البعيدة. واستخدمت النفايات السائلة الماخوذه من هذه التجربة الصورية لتقييم نقل القيم البيولوجية. ومع ذلك ، يمكن اجراء مجموعه واسعه من التقييمات المتعلقة بوظائف الغدد الصماء والمشيمة الجزيئية أو تغذيه الجنين.
وقوه هذا البروتوكول تفوق بكثير قيوده الطفيفة. ويحافظ الاعداد علي البنية الفسيولوجية والسلامة للجهاز بأكمله لتقييم الظروف التجريبية. السابقة المجرية المشيمة التروية هو تطور علمي من الخلوية القائمة في المختبر إلى التعرض الحيواني كله لتحديد بشكل صحيح تقييم المخاطر الانجابيه. وهذا يمكن اعتبار ان تكون تقنيه قيمه للدراسات تقييم التخلص من المخدرات الدوائية المشيمة, الدوائية, علم السموم, فسيولوجيا, وطب الام والجنين.
The authors have nothing to disclose.
وقد دعم هذا العمل المعهد الوطني لعلوم الصحة البيئية (R00-ES024783) ، ومركز روتجرز للتعرض البيئي والامراض (P30-ES005022) ، وبرنامج روتجرز المشترك للدراسات العليا في علم السموم (T32-ES007148). ونود أيضا ان نشكر السيد مايكل غويدكين ، وماريان بولناس ، وبيدرو لورو علي خبرتهم التقنية والدكتور ادم حسن النية لمساعدته في تصميم التخطيطي الخاص بنا (الشكل 5).
Black braided silk non-absorbable surgical suture non-sterile | Surgical Specialties Look | AACO805 | |
Fine forceps | FST by Dumont Switzerland | 11252-20 | |
Fine scissors | FST by Dumont Switzerland | 14060-10 | |
Glass cannula pack | Living Systems Instrumentation (LSI) | GCP-75-100 | |
Microcentrifuge Tubes 2.0mL polypropylene graduated tube with locking lid MIXED | Fisherbrand | 02-681-299 | |
Non-serrated fine curved micro serrefine clamps | InterFocus | 18052-03 | |
Perfusate pump | ISMATEC | ISM795C | |
Pressure monitor | Living Systems Instrumentation (LSI) | Mode PM-4 | |
Self-heating single vessel chamber | Living Systems Instrumentation (LSI) | CH-1 | |
Servo Pump | Living Systems Instrumentation (LSI) | ModelPS-200-P | |
Stainless steel blunt needle 23 gauge | Component Supply Co. | 04651-01 | |
Stainless steel blunt needle 25 gauge | Component Supply Co. | 07116-01 | |
STERILE Nylon Suture | AROSurgical Instruments Corporation | T04A00N07-13 | |
Stopcock | Sedation Resource | 6-205-04 | |
Temperature Controller | Living Systems Instrumentation (LSI) | Model TC-09S |