הנה הציג פרוטוקול של לשעבר vivo אימהי-העוברי וסקולזיה העובר כדי לאפשר את הניהול של מאמר מבחן לתוך ואסילטורה אימהית וכלה להעריך העברה שלמה של חלקיקים xenoביוטיים או סוכני תרופתי בנוסף שינויים ב פיזיולוגיה של הסביבה
השליה היא איבר מפתח במהלך ההריון, המשמש כמכשול לחשיפה העוברית xenoביוטית ומדיטים חילופי חומרים מזינים לפסולת. התשובה מתוארת כאן כדי לבשם השליה עכברוש מבודדים ולהעריך את הטרנסלוקציה אימהי-אל-עוברי של לשעבר xenobiotics vivo. בנוסף, ניתן לנהל את האבחון של תהליכים פיזיולוגיים כגון זרימת נוזלים לעובר ולחילוף חומרים מטבוליזם עם מתודולוגיה זו. טכניקה זו מתאימה להערכת קינטיקה אימהית-אל-עוברי של מועמדים פרמצבטיים או מזהמים סביבתיים. בניגוד לגישות חלופיות הנוכחי, מתודולוגיה זו מאפשרת הערכה של הומבודד אימהי העוברי-העובר, עם עצביים מערכתית או מעורבות חיסונית הוסרו, המאפשר כל שינוי נצפה בתפקוד הפיזיולוגי כדי להיות המיוחס לגורמים המקומיים בתוך הרקמה המבודדת.
על-ידי שמירה על מבנה מורפולוגית ותגובתיות פיזיולוגית, המערכת הייתה מקובלת על מערכת-או רקמת הגישה לניתוח תפקוד חילוף החומרים. אלה טכניקות זלוף לאפשר את הבדיקה vivo ex של תגובות רקמות שלמות למגוון גירויים תרופתי ומכני. Perfusion של השליה האנושית תוארה בתחילה ב 1958 כדי לזהות את ההשפעות ההורמונלית על פעילות מטבולית של מחזור חומצת לימון; לאחר שזוהו בעבר רקמת הומוטים, Troen וגורדון זיהה את הצורך להבהיר את הפעילות האנדוקרינית באמצעות גישה פיזיולוגית הרומן1. באותה תקופה, אסטרטגיות חד-פרזיה (אימהית-אל-עוברי או עוברי-אל-אימהית) תוארו ב-2,3 ו-4 מודלים בעלי חיים להבין את העברת האזור של סוכרים, מלחים, ותרופות אנטי-פירין. ב vivo ו ex vivo כפול perfusion (מתואמת אימהית העובר perfusion) טכניקות תוארו עוד לאפיין את העברת הטכניקה באמצעות vivo5 ו ex vivo6,7,8 מתודולוגיות. הפיתוחים הטכנולוגיים בשידור וסריקת המיקרוסקופיה האלקטרונים אפשרו לחוקרים לאמת את השלמות הקונסטרוקטיבית והפונקציונלית של רקמות הגוף האנושי לאחר הפרזיה9.
בעוד שהפיוז של רקמות הסביבה האנושית והcotyledon האישיים הוא הרלוונטי ביותר, ההתפתחות המהירה של סוכני פרמקולוגית ומזהמים סביבתיים מחייבת את השימוש במודל של בעלי חיים להקרנה המוקדמת של הקרנת הסרט מעבר למכשול החיץ. שיטה זו זלוף השיטה מאפשרת הערכה של העברה על פני המכשול מכשול באמצעות יותר בקלות השגה ומבחינה פיזיולוגית השליה החולדה. בנוסף, זרימת הנוזלים מעבר למכשול ההפרדה על פני תקופה של זמן, לאחר החשיפה ניתן להעריך על ידי מדידת נפח החומר המגיע מעורק הטבור. על ידי המוסריות של התרת המשך הפרזיה משני התנודות האימהי והעוברי, הגישה הזאת כפולה זרימה שלמה יכול להיות יתרון לעומת הנוכחי בתוך מבחנה ובגישות vivo. שיטה זו מאפשרת לניהול של xenobiotic יוטי דרך ההיבט האימהי להיות נמדד מתוך מבשם העולה על פני השליה דרך וריד הטבור, או להיפך. הפרוטוקול המוצג כאן יהיה לתאר את העברת 20 פוליסטירן ננומטר (nanoplastic נפוץ משמש מזון ומוצרים רפואיים) מן העורק הרחם אימהי אל התא העוברי ואת ירידה משויכת זרימת הנוזלים על פני השליה כדי להמחיש השימוש בשיטה זו בהגדרות פיזיולוגיות, פרמקולוגיות ורעילות מרובות כדי להעריך את העברת הגדרות, חילוף החומרים ושינויים פיזיולוגיים המשפיעים על זרימה אימהית ו/או עוברי.
שיטת הפרזיה זו מאפשרת הערכה מהירה של מכשול הסביבה ותפקוד פיזיולוגי של הרחם ושכבת הטרופוטסט. הצינורית והפרזיה של האבופה לקצות עורק הרחם האימהי מדמה את הפיזיולוגיה של זרימת הדם האימהית דרך כלי מרכזי זה אחראי על שליחת הדם לעובר המתפתח. מתודולוגיה זו מאפשרת הערכה פיזיולוגית של האמה המבודדת, הפלקתית והטבור, ולכן שינויים בפיזיולוגיה עשויים להיות מזוהים כפתולוגיה של כלי דם; innervations החיסונית ועצביים יוסרו בהליך לשעבר vivo. על מנת להבטיח הערכה נכונה, יש לפיכך קריטית לצינורית כלי זה בזהירות כדי לא ליצור דמעות או דקירות בקירות כלי הקיבול, ולהסיר בועות אוויר. אמבולי גז עלולים לגרום נזק לשכבת האנדותל של היום או לחסום את כלי הדם. על-ידי שמירה על הקשרים בין כלי הדם בין הרחם, השליה והעובר במהלך הניתוח, ניתן לצפות בהערכת הנוזלים והטרנסלוקציה לעובר. עם הממשל של xenobiotic יוטי, במקרה זה 20 פוליסטירן ננומטר, קינטיקה לקצה המרוחק של עורק הרחם ודרך השליה אל התא העוברי ניתן להעריך על ידי ניתוח של קולחים במהלך זמן של 180 דקות.
בעוד מודל כפול perfusion תוארה והעברת חלקיקים ונוזלים מן האימהית אל התא העוברי היה מפוקח במאמר זה, הערכות יכול גם להתבצע בהיפוך מן העובר אל התא האימהי. מגבלה אחת של השיטה המתוארת כאן היא שווריד הרחם המרוחק לא הגיע לידי כך או שנדגם. במחקרים עתידיים, במיוחד אלה המתמקדים בהעברה עוברית-אל-אימהית, יהיה חשוב להגיע לצינורית ולדגום את כלי הרחם המרוחק. הקולחים שנלקחו מניסוי מבוים זה שימשו להערכת העברה ביוביוטית; עם זאת, ניתן לבצע מגוון רחב של הערכות הנוגעות לפונקציות הפלריות האנדוקריניות והמולקולרית או לתזונה עוברית.
היתרונות של פרוטוקול זה עולים בהרבה על המגבלות המשניות. ההכנה שומרת על המבנה הפיזיולוגי ועל השלמות של איבר שלם כדי להעריך את התנאים הניסיוניים. הvivo לשעבר זלוף הפלנטל היא התקדמות מדעית מתוך מבוסס מחוץ לעולם כדי חשיפה מלאה בעלי חיים כדי לקבוע כראוי הערכת סיכונים הרבייה. הדבר עשוי להיחשב לטכניקה רבת ערך למחקרים המעריכים את מערכת התרופות הפרמקולוגית, הפרמקוקינטיקה, הטוקסיקולוגיה, הפיזיולוגיה והרפואה העוברית האימהית.
The authors have nothing to disclose.
עבודה זו הייתה נתמכת על ידי המכון הלאומי למדעי הסביבה (R00-ES024783), מרכז רטגרס לחשיפות ומחלות סביבתיות (P30-ES005022), ותוכנית בוגרת ורטגרס משותפת בטוקסיקולוגיה (T32-ES007148). בנוסף, אנו רוצים להודות לד”ר מיכאל גוז’קן, מריאן פוליונס ופדרו לאורו על המומחיות הטכנית שלהם וד ר אדם רצון טוב על עזרתו בעיצוב שרטוט שלנו (איור 5).
Black braided silk non-absorbable surgical suture non-sterile | Surgical Specialties Look | AACO805 | |
Fine forceps | FST by Dumont Switzerland | 11252-20 | |
Fine scissors | FST by Dumont Switzerland | 14060-10 | |
Glass cannula pack | Living Systems Instrumentation (LSI) | GCP-75-100 | |
Microcentrifuge Tubes 2.0mL polypropylene graduated tube with locking lid MIXED | Fisherbrand | 02-681-299 | |
Non-serrated fine curved micro serrefine clamps | InterFocus | 18052-03 | |
Perfusate pump | ISMATEC | ISM795C | |
Pressure monitor | Living Systems Instrumentation (LSI) | Mode PM-4 | |
Self-heating single vessel chamber | Living Systems Instrumentation (LSI) | CH-1 | |
Servo Pump | Living Systems Instrumentation (LSI) | ModelPS-200-P | |
Stainless steel blunt needle 23 gauge | Component Supply Co. | 04651-01 | |
Stainless steel blunt needle 25 gauge | Component Supply Co. | 07116-01 | |
STERILE Nylon Suture | AROSurgical Instruments Corporation | T04A00N07-13 | |
Stopcock | Sedation Resource | 6-205-04 | |
Temperature Controller | Living Systems Instrumentation (LSI) | Model TC-09S |