Dieses Papier verwendet ein Flow-Zytometrie-based Assays auf Bildschirm Bibliotheken chemische Inhibitoren für die Identifizierung von Inhibitoren und ihre Ziele, die T-Zell-Rezeptor Signalisierung beeinflussen. Die hier beschriebenen Methoden können auch für Hochdurchsatz-Screenings erweitert werden.
Der T-Zell-Rezeptor (TCR) signalisieren, dass Weg umfasst eine Vielzahl von Mediatoren, die übertragen Signale auf die Aktivierung des TCR. Unterschiedliche Strategien wurden vorgeschlagen und für die Identifizierung von neuen Mediatoren der TCR-Signalisierung, die Verbesserung des Verständnisses der T-Zell-Prozesse, einschließlich Aktivierung und Zebrafischembryonen Auswahl würde umgesetzt. Wir beschreiben eine Screening-Test, die es die Identifikation von Molekülen, die TCR Signalisierung basierend auf die Aktivierung ermöglicht der Thymozyten Entwicklung zu beeinflussen. Strong TCR Signale führen Entwicklung Thymozyten Apoptose Maschinen in einem Prozeß bekannt als negative Auswahl aktivieren. Durch die Anwendung der Kinase-Inhibitoren sind die mit den Zielen, die TCR-Signalisierung betreffen, den Prozess der negativen Auslese zu überschreiben. Die Methode detailliert in diesem Papier kann verwendet werden, um Inhibitoren der kanonischen Kinasen mit etablierten Rollen in die TCR-Signalwege und auch Inhibitoren der neuen Kinasen noch, sich in die TCR-Signalwege aufzustellen zu identifizieren. Die Screeningstrategie hier kann auf Bildschirmen der höheren Durchsatz für die Identifizierung von Roman druggable Ziele in TCR Signalisierung angewendet werden.
T-Zellen sind eine Linie von Lymphozyten, die eine Schlüsselrolle bei der Aufrechterhaltung der adaptiven Immunität zu spielen. Sie drücken die TCR, ermöglicht ihnen, ihrer Liganden, komplexe, bestehend aus einem großen Histocompatibility komplexes Molekül (MHC) zu erkennen mit ein gebundenes Peptid, die befinden sich auf der Oberfläche von Antigen-präsentierenden Zellen (APCs). Die Auslösung der TCR Signalweg durch die TCR/MHC-Interaktion ist entscheidend für die T-Zell-Aktivierung und Entwicklung1.
In T-Zell-Entwicklung migrieren Bone-Marrow-derived hämatopoetischen Stammzellen (HSCs) zu den Thymus, wo sie unterziehen, Differenzierung und gehen durch die Stadien der T-Zell-Linie Fortschreiten2. Doppel-positiv (DP) Thymozyten, mit dem Ausdruck der CD4 und CD8 Corezeptoren engagieren mit selbst-Peptid/MHC auf die APCs. Thymozyten mit mäßiger Affinität für ihre selbst-Peptid/MHC-Liganden Reifen Single-positiv (SP) CD4 oder CD8 Thymozyten, einen Prozess als positive Selektion bezeichnet werden. Im Gegensatz dazu unterziehen Thymozyten, die übermäßige TCR Stimulation durch die selbst-Peptid/MHCs erhalten Apoptose über negative Auslese3,4. Dieser Prozess der Stimulation induzierte, Caspase-abhängigen Apoptose kann durch die Stimulierung der Thymozyten, zum Beispiel mit Anti-CD3/28 Antikörper-beschichtete Perlen5nachgeahmt in Vitro . Reife T-Zellen, die das Auswahlverfahren bestehen werden durch nicht-selbst-Peptid/MHC-Liganden von APCs in der Peripherie aktiviert. Selbst-Peptid/MHCs sind immer noch relevant für die peripheren T-Zellen, im Rahmen des Tonikums Signalisierung für überleben und homöostatische Proliferation, Differenzierung der T-Helferzellen und die Verbesserung der T-Zell-Reaktionen auf nicht-selbst-Peptid/MHCs durch Coagonism6,7,8,9. Hohe Affinität TCR Bindung an das Peptid/MHC-Liganden aktiviert mehrere nachgeschaltete Signalwege, die viele Signalmoleküle bilden eine komplexe TCR Signalisierung Netzwerk10beinhalten. Die TCR-Signalwege sind seit mehreren Jahrzehnten untersucht worden, und doch zeigt die Entdeckung von neuen Mediatoren des Weges ungebrochen11,12. Die Modulation des TCR Signalwege hat klinischen Relevanz und kann mit T-Zell-Reaktionen für Immuntherapie Anwendungen oder die Hemmung der T-Zell-Reaktionen für die Kontrolle der Autoimmunität13potenzierende. Strategien für die Modulation des T-Zell-Reaktionen hängen hauptsächlich von der Störung der Kinase oder Phosphatase-Aktivität14,15,16ab.
Wir beschreiben eine Anwendung eines Flow-Zytometrie-based Assays für das Screening von kleinen chemischen Verbindungen für ihre Fähigkeit, TCR Signal- und T-Zell-Aktivierung-17zu modulieren. Der Test steht und fällt auf das Phänomen der Thymozyten Apoptose-Signalweg wenn starke TCR Signale ausgesetzt aktivieren. Der Test ist ausreichend empfindlich auf Veränderungen in der Stärke der Stimulation zu identifizieren; eine entsprechende Zunahme der Aktivierung verwendet als Maß für die Apoptotic Antwort5Caspase führte Inkubation Thymozyten transgenen TCR mit Peptid/MHC-Tetramers mit zunehmender Affinität zum Ausdruck zu bringen. Für den Bildschirm wir nutzten eine Bibliothek von Kinase-Inhibitoren und bewertet ihre Fähigkeit, die Thymocyte Reaktion auf starke Signale TCR modulieren.
Für den Hochdurchsatz-Screening von einem Sortiment von peripheren Aktivierung Phänotypen in verschiedenen T-Zell-Subsets wurden mehrere Flow-Zytometrie-based oder Fluoreszenz-Reporter-basierte Strategien beschrieben. Solche Strategien umfassen die Verwendung von genetischen fluoreszierende Reporter, der Zeitpunkt und das Ausmaß des T-Zell-Aktivierung-18zu bewerten, die Verwendung von Degranulation ein Auslesen der zytotoxischen T-Zell-Aktivität19,20, sowie die Analyse von der Phosphorylierung von verschiedenen Proteinen in Cellular signaling21beteiligt.
Der Screening-Test hier vorgestellten kann erfolgreich Verbindungen zu identifizieren, die kanonische Moleküle des TCR Signalisierung Weg sowie potenzielle, neue Verbindungen mit hemmenden Effekte auf TCR Signalisierung zu hemmen. Beispielsweise haben wir als neue Verbindungen beeinflussen T-Zell-Antworten-17Inhibitoren der GSK3β und Hsp90 identifiziert. Der Test ist in der Lage, die Inhibitoren zu unterscheiden, die Signaltransduktion durch Reduzierung der Apoptotic Antwort, die TCR-unabhängige Effekte der Inhibitoren auf zelluläre Toxizität stören. Neben der Induktion der Apoptose messen wir auch CD69 Hochregulation und TCR Downregulation als Marker der Aktivierung. Als TCR signalisiert, dass Netzwerke komplex sind kann die Verwendung von mehreren Anzeigen die Chancen Moleküle mit speziellen Wirkungen auf einen einzigen Weg zu entdecken erhöhen. Hier stellen wir auch die Verwendung eines Protokolls Zentrifugation-unabhängige als Hochdurchsatz-Alternative zu dem ursprünglichen Protokoll während der Färbung der Zellen zur Vorbereitung der durchflusszytometrischen Analyse. Der in diesem Dokument beschriebenen Test verwendet eine kleine Verbindung Bibliothek von Kinase-Inhibitoren, aber im Prinzip, es kann für höheren Durchsatz-Screening verwendet werden. Die Bibliothek der Wahl kann auch eine Vielzahl von Inhibitoren oder andere Moleküle enthalten.
Die hier vorgeschlagene Screeningstrategie bewertet die Fähigkeit des Small-Molecule-Inhibitoren, die Apoptotic Effekte in Thymozyten nach Stimulation, neben eher konventionellen Marker der T-Zell-Aktivierung-CD69-Hochregulation und TCR Herabregulation unterdrücken . Zusätzliche Marker können auch ermöglichen die Analyse der verschiedenen Thymocyte Teilmengen32einbezogen werden. Ein interessanter Aspekt des aktuellen Tests liegt in der Tatsache, dass Inhibitoren, die TCR-Signalisierung behindern auch die Induktion der Apoptose, weitere Hervorhebung die Unterscheidung des TCR-unabhängige Effekte haben die Inhibitoren auf Zelltod induzieren dämpfen würde. Darüber hinaus ermöglicht ein Flow-Zytometrie-based Assays die Verwendung von mehrere Messwerte als unterschiedliche Aktivierungsmarker, die die Auswirkungen der Inhibitoren auf getrennten einzelnen Zweigen der TCR-Signalisierung berichten könnte. Im hier vorgestellten Fall gab es Hemmstoffe, die eine differenzierte Hemmung der Aktivierung von Caspase-3 und CD69 Hochregulation zeigte. Da einige Verbindungen Funktionen wie Proteinsynthese oder vesikuläre Menschenhandel auswirken können, ist es nicht verwunderlich, Auswirkungen auf die Hochregulation der de Novo synthetisiert Marker (z. B. CD69) aber nicht auf posttranslationale beobachten Änderungen (z. B. die proteolytische Aktivierung von Caspase-3).
Als der Test präsentiert hier Maßnahmen Apoptose als eine Anzeige, ist es unerlässlich, dass die latente toxischen Wirkungen der Inhibitoren die Ergebnisse nicht verdecken. Zum Beispiel auf dem Bildschirm wir nicht verdünnen Staurosporine über 1 nM, obwohl es immer noch für die Zellen in dieser Konzentration giftig. Die repräsentativen Ergebnisse sind in Übereinstimmung mit Staurosporine wird ein promiscuous Kinase-Inhibitor und einem Induktor von Apoptose33. Ohne eine ausreichende Verdünnung der Verbindungen nicht toxische Konzentrationen getestet ist es möglich, potentielle Hits zu übersehen.
Die Screeningstrategie hier wäre schwierig anzuwenden, Menschen aufgrund von Komplikationen im Zusammenhang mit der Erlangung ausreichender Zahl von Thymozyten für Hochdurchsatz-Screening. Jedoch ist es möglich, menschlichen Thymus Proben von pediatric cardiac Biopsien34,35 oder von Föten36,37zu erhalten. Dennoch als TCR signalisiert, dass die Wege und die Aminosäure-Sequenzen von Signalproteinen zwischen Mäusen und Menschen, größtenteils erhalten geblieben sind der Thymocyte-Test bietet eine nützliche Vorauswahl-Strategie und Ergebnisse mit dieser Assay mit Maus Thymozyten können, dann, im primären menschlichen Lymphozyten überprüft werden.
Eine Einschränkung des herkömmlichen Zentrifugation-abhängige Protokolls bezieht sich auf die Perspektive des Zellverlustes, die mehrstufige Natur des Prozesses, zugeschrieben werden kann die Schritte wie Zelle Permeabilisierung und Zentrifugation beinhaltet. Jede Zentrifugation und Wiederfreisetzung Schritt führt unweigerlich zum Verlust von Zellen. Während solche Verluste nicht für Studien, die eine begrenzte Anzahl von Proben von entscheidender Bedeutung sein können, könnte es Probleme bei Anwendung im höheren Durchsatz Screening, insbesondere Fortschreiten der Assay-Format von 96 -, 384-1536 gut darstellen. Eine Möglichkeit zur Umgehung dieses Problems ist die Verwendung von Zelle durchlässig fluoreszierende Caspase Sensoren38 , die den Nachweis von Caspase-Aktivierung unter Vermeidung von Komplikationen der Zelle Permeabilisierung und mehrere Wäschen5ermöglichen. Alternativ ist es auch möglich, zur Minimierung der Zellverlust, beschäftigt eine Zentrifugation-unabhängige Methode Zellen durch laminare Strömung zu waschen. Mit einer automatisierten Platte Waschplatz in Verbindung mit einem Wand-weniger Teller werden Zellen von Laminar-Flow ohne den Einsatz einer Zentrifuge gewaschen. Die exponentielle Verdünnung der Reagenzien ermöglicht die gründliche und effiziente Spülung von Zellen in weniger als 3 min, die eine entsprechende Verdünnung auf zwei Runden der zentrifugalen waschen darstellt. Ohne äußere Belastungen durch Zentrifugation die Zellen sind rentabler und Zelle Verluste minimiert.
Wir haben auch die Möglichkeit der Verwendung der automatisierten Platte Waschstation nach Kultivierung der Thymozyten in 96-Well U-Boden Platten und auch die Kultivierung der Zellen direkt in Wand-weniger Platten kompatibel mit der automatisierten Platte Waschplatz. Die Kultivierung von Zellen in der Wand weniger Platten aktiviert die Beseitigung aller Schritte, Zentrifugation und Zellverlust durch den Wegfall der Notwendigkeit einer Probentransfer über Platten minimiert. In der Regel sind drei verschiedene Protokolle vergleichbar Stimulation Effizienz und Färbung. Die automatische Waschanlage bietet den Vorteil der Automatisierung, Geschwindigkeit und Effizienz, höherer Durchsatz Analyse erleichtert. Darüber hinaus mit erhöhte Automatisierung, die Waschschritte können schneller durchgeführt werden, und gibt es eine größere Kohärenz zwischen den Experimenten oder Experimentatoren. Die Waschanlage hat jedoch einige Nachteile: große Mengen an Wäsche Puffer sind erforderlich für Waschmaschine Grundierung (150 mL pro Puffer wechseln, von denen 50 mL zum Waschen dient); besondere Vorsicht ist beim Umgang mit der Plattenrandes notwendig, um Kreuzkontamination der Brunnen durch begrenzte Partitionierung zwischen den Brunnen der kleinvolumigen Platte zu vermeiden; verbleibende Puffer von 25 µL in den Vertiefungen nach Waschen erfordert die Verwendung von Reagenzien mit einer höheren vorbereitet als 1 X Konzentration. Um die Fragen der Restvolumen und begrenzte Kapazität der Platte, kann ein Accessoire, um die Inkubation Volumen von 70 µL bis 150 µL erweitern hinzugefügt werden, um die Annahme von herkömmlichen Protokollen erleichtern. Automatisierte Platte-Handling-Systeme derzeit verfügbar sind, haben sie einen bedeutenderen Fußabdruck im Vergleich zu der laminaren waschen System, das eine kleine Einheit von ~ 1 Kubikfuß (~0.028 m3). Darüber hinaus ist die Integration der Zentrifugation in automatisierte Handlingsysteme Platte anspruchsvoll, Begrenzung ihrer Verwendung in Zelle waschen. Derzeit gibt es keine andere Zentrifuge-unabhängige Zelle waschen Instrumente zur Verfügung, soweit wir wissen.
Hier vorgelegte Screeningstrategie ist in der Lage, kleine Moleküle und ihre angeblichen Ziel Kinasen, die TCR-Signalisierung und T-Zell-Aktivierung zu identifizieren. Die hier verwendete Bibliothek umfasst vor allem kleine Molekül Inhibitoren der Kinasen und war in der Lage, eine Reihe von potenziell interessante Treffer zu generieren. Das Protokoll kann auch ohne weiteres Inhibitor Bibliotheken anderer Enzym-Klassen oder auf andere Arten von kleinen Molekülen sowie Bibliotheken von anderen Verbindungen (z.B. verschiedene Makromoleküle) angewendet werden. Das Protokoll kann auch verwendet werden, andere Zelltypen wie peripheren T-Lymphozyten oder verewigt Zellen, einschließlich derjenigen mit dem Ausdruck transgenen TCR oder Reporter Tragesysteme auf den Bildschirm. Identifizierung und Charakterisierung neue Mediatoren der T-Zell-Signalisierung verbessern unser Wissen über den Signalweg und auch Hilfe bei der Entwicklung von gezielten Therapie bei Immunerkrankungen13,14,15, 16., fügt dieser Studie auf die Palette der verfügbaren Optionen für den Nachweis von Mediatoren der T-Zelle Signalisierung über Hochdurchsatz-Screening-Assays.
The authors have nothing to disclose.
Diese Arbeit wurde durch Zuschüsse aus Singapur Gesundheitsministeriums National Medical Research Council, NMRC CBRG15may017 und die Singapore Ministry of Education, 2014-T2-1-136 (zu N.R.J.G.) unterstützt.
RPMI | HyClone | SH30027FS | |
FBS | HyClone | SH3007103 | |
L-Glutamine | HyClone | SH3003401 | |
Sodium pyruvate | HyClone | SH3023901 | |
Penicillin/Streptomycin | HyClone | SV30010 | |
b-mercaptoethanol | Sigma Aldrich | 516732 | |
10X PBS | Vivantis | PB0344 – 1L | |
Kinase Screening Library (96-Well) | Cayman Chemical | 10505 | Exact contents of the library may vary |
DMSO | Sigma Aldrich | D2650 | |
Dexamethasone | Sigma Aldrich | D4902 | |
anti-CD3/CD28 beads | Thermo Fisher Scientific | 11452D | |
FITC Active Caspase-3 Apoptosis Kit | BD Pharmingen | 550480 | Contains Fixation/Permeabilisation buffer, 10X Perm/Wash buffer and anti-caspase 3 antibody |
DA-Cell Washer | CURIOX | HT1000 | |
96-well DA-Cell Plate | CURIOX | 96-DC-CL-05 | |
Antibodies | |||
CD3e | BioLegend | 100236 | |
TCRb | BD Biosciences | 553174 | |
CD4 | BD Biosciences | 740007 | |
CD8 | BD Biosciences | 563786 | |
CD69 | eBioscience | 25-0699-42 | |
Inhibitors | |||
TG003 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
PKC 412 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Doramapimod | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Paclitaxel | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Erlotinib | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Necrostatin-5 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
NVP-BEZ235 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Phthalazinone pyrazole | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
AG-879 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
1-NA-PP1 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Torin 1 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Bisindolylmaleimide II | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
BIBF 1120 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
SMI-4a | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Bisindolylmaleimide XI (hydrochloride) | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
CAY10657 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
AS-703026 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Chelerythrine chloride | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Tunicamycin | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
GSK 1059615 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Ruxolitinib | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Necrostatin-1 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
SB 505124 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
INK128 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Canertinib (hydrochloride) | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
SB 431542 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
PD 173074 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Valproic Acid (sodium salt) | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
PD 0325901 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
SB 203580 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
VX-702 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Emodin | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
CHIR99021 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
BIO | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Imatinib (mesylate) | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Sunitinib Malate | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Gefitinib | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
PP2 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
3-Methyladenine | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Bisindolylmaleimide I | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Bisindolylmaleimide IV | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Bisindolylmaleimide V | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
NSC 663284 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
D 4476 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
NU 7026 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
H-9 (hydrochloride) | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Indirubin-3'-monoxime | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
KN-62 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
KN-93 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
CGP 57380 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Iso-Olomoucine | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
(S)-Glycyl-H-1152 (hydrochloride) | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Bisindolylmaleimide VIII (acetate) | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
ST638 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
SU 6656 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
LY364947 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
SB 203580 (hydrochloride) | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
CAY10621 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
YM-201636 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
ZM 447439 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
AS-041164 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
NVP-AEW541 (hydrochloride) | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
PP242 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
ABT-869 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
CAY10622 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
17β-hydroxy Wortmannin | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
CAY10626 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
SU 6668 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
CAY10572 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
N,N-Dimethylsphingosine | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
LY294002 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
U-0126 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Staurosporine | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
KN-92 (hydrochloride) | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
AS-605240 (potassium salt) | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
O-1918 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Y-27632 (hydrochloride) | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Leelamine | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
PD 98059 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
PD 169316 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
TGX-221 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
(S)-H-1152 (hydrochloride) | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
AS-605240 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
D-erythro-Sphingosine C-18 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
OSU03012 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
JNJ-10198409 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Leelamine (hydrochloride) | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Arachidonic Acid Leelamide | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Lauric Acid Leelamide | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
AS-252424 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
CAY10505 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
PI-103 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
PIK-75 (hydrochloride) | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Sphingosine Kinase Inhibitor 2 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Piceatannol | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
SC-1 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
(R)-Roscovitine | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
BAY-43-9006 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
CAY10561 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
AS-604850 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
PI3-Kinase α Inhibitor 2 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
ML-9 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Triciribine | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Erbstatin Analog | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Kenpaullone | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Olomoucine | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
AG-494 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
AG-825 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
AG-1478 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
SB 216763 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
SB 415286 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
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H-8 (hydrochloride) | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
LFM-A13 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
SC-514 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Apigenin | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
AG-18 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
CAY10554 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
DRB | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
RG-13022 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
RG-14620 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
AG-490 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
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AG-99 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
AG-213 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
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Lavendustin C | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
ZM 336372 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
5-Iodotubercidin | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
SB 202190 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
CAY10571 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Nilotinib | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
SP 600125 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
L-threo-Sphingosine C-18 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
H-89 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
HA-1077 (hydrochloride) | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
AG-370 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Wortmannin | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
AG-1296 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
KT 5823 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Janex 1 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
CAY10574 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
CAY10575 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
CAY10576 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
NH125 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
TWS119 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
NSC 210902 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
CAY10577 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
CAY10578 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
PD 184161 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
CCT018159 | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |
Myricetin | Cayman Chemical | – | From the Kinase Screening Library |