Авторадиографии как простой и мощный метод для визуализации и характеристика фармакологического целей

Авторадиографии — это метод, который предоставляет изображения радиоактивного распада. Метод обычно используется для изучения распределения ткани протеина интереса в vitro на основе конкретных фармакологических взаимодействия между радиоизотопами соединения и его цель. Это обеспечивает прямую информацию о избирательность лигандом для целевого объекта. Радиоавтографией в пробирке может также использоваться для количественного определения фармакологических привязки параметров radioligands, таких как Константа диссоциации (_dK) и плотности сайтов связывания (B_Макс), а также для определения Ингибирование константа (_iK) конкурирующих лигандов^1,2. По сравнению с традиционными огневки лиганд привязки, радиоавтография имеет преимущество возможность визуализировать пространственных анатомии и кратким указанием региональных выражение модели³. Методом авторадиографии является поэтому соответствующие альтернативы immunocytochemistry, особенно в отсутствие проверенных антитела. Авторадиографии легко реализуется в стандартной радиоизотопной лаборатории, при условии наличия подходящего лиганд с необходимые фармакологических специфичность, доступ к микротом криостат для подготовки разделов ткани и подходящих изображений устройство, которое имеет возможность анализа распределения радиоактивности в разделах соответствующие ткани. В частности важным критерием отбора для лиганд является ограниченное количество привязки на сайты, не являющиеся объектом. Это может быть другие белки, мембраны или такие материалы, как пластик или фильтры и коллективно называется неспецифичный привязки. Обычно неспецифичный привязки не конденсаторе, но может быть конденсаторе, если она включает в себя конкретные-целевого белка. Лучший способ проверки истинный конкретной привязки является для сравнения тканей, генетически не хватает целевого объекта, например, инженерии тканей (нокаут)⁴.

Здесь методология иллюстрируется с autoradiographic характеристика высокоспецифичные связывающие сайта для γ-оксимасляная кислота (ГОМК) в мозге млекопитающих. Понимание фармакологических взаимодействия между ГОМК и его привязки сайта имеет значение как ГОМК снадобье как клинически полезным в лечении нарколепсии и алкоголизма⁵, но также природных составляющих млекопитающих мозга и отдыха наркотиками⁶. Высокоспецифичные ГОМК привязки сайтов впервые были описаны с помощью [³H] ГОМК привязки для мозга крысы огневки⁷. С годами, дальнейших исследований авторадиографии с [³H] ГОМК и аналог [³H] NCS-382 показал высокую плотность привязки сайтов в регионах мозга крысы^8,9,10, мыши⁹ , свинья¹¹и обезьяна/человеческий мозг¹². Однако молекулярной идентификации и точное функциональные актуальность этих сайтов связывания остаются недостижимой.

С намерением для дальнейшей характеризации привязки сайтов и для облегчения исследования о физиологической роли ГОМК, были разработаны несколько radioligands включения различных изотопов, наделенных различными сходство ([³H] ГОМК, [³ H] NCS-382, [³H] HOCPCA и [¹²⁵я] BnOPh-GHB)^13,14,,1516(обзор в¹⁷) (рис . 1). Сочетание выборочного высокоспецифичные radioligands и ткани очень высокой плотности привязки сайтов, позволили для производства высококачественных изображений с использованием люминофора, изображений техники^9,11. Наряду с изложение практических точек в создании эксперимент autoradiographic и иллюстрации иллюстрируют детали в разделе обсуждения особое внимание будет уделяться i) выбор радионуклидов, ii) выбор условий пробирного и iii) использование фосфора визуализации пластины по сравнению с рентгеновской пленки. Общая цель этого документа заключается в том, предоставлять технических, методологических и научных сведений по технике авторадиографии для информирования о распределении ткани и фармакологические анализа белковых мишеней.