Diagnosi di malattia di Hirschsprung da immunostaining biopsie di aspirazione rettale per calretinina, S100 proteina e proteina gene prodotto 9,5

La malattia di Hirschsprung (HD) è un disturbo intestinale congenito comune caratterizzato da una mancanza di cellule di ganglio in diversi segmenti del tratto intestinale distale¹. Il sistema nervoso enterico umano si forma quando l’invasione delle cellule neurali embrionali è completata. Se c’è un disturbo del processo e l’invasione non riesce a completare, l’intestino distale del neonato diventa aganglionic². Questa condizione potenzialmente fatale è chiamata malattia di Hirschsprung. La proliferazione, la motilità e la crescita intestinale sono i tre componenti principali della colonizzazione di successo.

La colorazione tradizionale di ematossilina e eosina (H & E) di una biopsia submucosa limitata non può raggiungere risultati soddisfacenti come la colorazione H & E di un tessuto a spessore pieno ottenuto dalla chirurgia. Inoltre, la colorazione dell’acetilcolinesterasi (dolore) del tessuto di aspirazione rettale è teoricamente impegnativa a causa della sua inadeguata sensibilità, che è 91%, e l’elaborazione complessa delle sezioni congelate^3,4. Molti altri marcatori immunoistochimici di cellule gangliari e fibre nervose che possono essere macchiati in campioni fissati in formalina e in paraffina stanno gradualmente diventando la diagnostica HD mainstream. La calretinina è una proteina di legame di calcio dipendente dalla vitamina D che non è espressa nel plesso mienterico e submucoso dei segmenti affetti da MH⁵. La proteina S100 è espressa in cellule derivate dalla cresta neurale, come le fibre nervose e le cellule gliali, che spesso presentano ipertrofia neurale nel tessuto submucoso dei segmenti affetti da MH⁶. Il gene proteico prodotto 9,5 (PGP 9.5) macchia in modo affidabile le fibre nervose e le cellule del ganglio; La colorazione di PGP 9.5 agisce come complemento alla colorazione del calretinina, specialmente nei casi di ipoanglionosi isolata. La doppia colorazione con S100 e PGP 9.5 può diminuire il tasso di falsi negativi e aumentare la sensibilità. Come prerequisito, lo studio attuale mira a garantire un’adeguata specificità e un’elevata sensibilità di questo nuovo metodo diagnostico. Il nostro nuovo protocollo ha utilizzato tutti e tre i marcatori per la discriminazione dell’intestino aganglionico e delle fibre nervose ipertrofici. Uno studio prospettico di 318 bambini è stato eseguito dal nostro laboratorio e pubblicato in precedenza senza un protocollo dettagliato⁷. Il protocollo dettagliato e le precauzioni sono discussi in questo articolo. Tutti i neonati che hanno sofferto di un grave problema di defecazione dalla nascita o da bambini affetti da stitichezza cronica, escluse altre malattie comuni, sono potenziali candidati per la biopsia di aspirazione rettale (RSB). Il nostro nuovo protocollo è adatto per la colorazione non solo di RSBs, ma anche di biopsie a pieno spessore o di campioni chirurgici per effettuare una diagnosi finale.