Visualização da migração celular tangencial no desenvolvimento Tectum óptica de Chick

O estudo da migração celular tem sido progredindo com a técnica de avançada de imagem ao vivo. Após a célula fluorescente rotulagem, o movimento temporal de pilhas etiquetadas em um prato de cultura ou na vivo pode ser gravado sob microscopia de vídeo. No estudo do desenvolvimento neural, foram analisadas as mudanças morfológicas da migração de células ou alongando axônios utilizando imagens de lapso de tempo. Para a imagem latente eficaz, é essencial para aplicar um método adequado para a preparação de rotulagem e tecido fluorescente célula, baseado sobre a finalidade do experimento e análise. Para analisar a migração celular no cérebro em desenvolvimento, fatia cultura tem sido comumente usada para observar a migração celular paralela à seção de fatia, como célula radial migração^1,2,3. O sistema de cultura de fatia é também utilizado para detectar células tangencial migração^4,5, mas não é adequado para análise direcional em casos onde as células se dispersar perpendicular à seção de fatia.

O tectum óptica é composta de uma estrutura de várias camada, formada pela migração radial e tangencial celular durante o desenvolvimento embrionário. Formação de camada tectal depende, principalmente, migração radial de células postmitotic neuronal precursor da zona ventricular, e seu destino final nas camadas correlaciona-se com sua data de nascimento na zona ventricular⁶. Quanto a migração tangencial, relatamos anteriormente dois fluxos de migrações nas camadas intermediária e superficiais em um desenvolvimento tectum óptica de garota. Nas camadas médios durante E6 E8, as células bipolares com um processo de tempo principal e um processo à direita fino migram dorsalmente ou ventralmente ao longo do fascículo axônio de axônios eferentes tectal executados dorso-ventralmente⁷. Após esta migração de axophilic, as células se diferenciar em neurônios multipolares localizados nas camadas profundas. Nas camadas superficiais durante E7-E14, as células migratórias dispersarem-se horizontalmente através da reforma de um processo principal ramificado e dispersão em múltiplas direções⁸. Após a migração de dispersão, as último células eventualmente se diferenciar em neurônios superficiais de várias morfologias. Em ambos os casos, uma cultura de plano de montagem é eficiente para observar o movimento da célula paralela à superfície pial.

Aqui, apresentamos um protocolo para Time-Lapse de imagens para visualizar a migração celular tangencial no desenvolvimento garota tectum óptica^7,8. Combinação de célula rotulagem por eletroporação no ovoe uma cultura de montagem plana subsequente na inserção da cultura de célula permite a detecção de direção de movimento e migração de células migrando. O objetivo desse método é facilitar a detecção de comportamento ambos célula individual o longo prazo e a ação coletiva de um grupo de células no plano horizontal.