分離の特性と人間の歯小嚢細胞のマイクロ Rna を用いた遺伝子組み換え

人間の歯小嚢は、発展途上の歯^1,2を取り巻く緩やかな ectomesenchymally から派生した結合組織です。破骨細胞形成と骨延長法歯の噴火プロセスの調整するため、その機能の横には、この組織は、特に歯周組織^3,4、5の開発のための茎および祖先のセルを隠し持っています。したがって、歯小嚢は成体幹細胞^6,7を収穫するための代替ソースとしてと見なされます。

いくつかの研究人間の歯小嚢の幹細胞 (hDFSCs) の骨芽細胞、歯根膜線維芽細胞と酵素^8,9,10を含む歯周の系統に分化の実証.さらに、これらの細胞は自己複製能力、プラスチックの付着、特定の表面マーカーの発現を含む間葉系間質細胞 (MSCs) のすべての特性に合わせて示されていた (例えば, CD73, CD90, CD105) 同様、骨、脂肪細胞と軟骨細胞分化ポテンシャル^11,12,13。他の研究はまた、hDFSCs^{2,14,15,16,17,18}の神経の微分の潜在性を明らかにしました。

それらの有望なプロパティとの容易なアクセスのために hDFSCs なった最近ティッシュ工学^19,20,21に関連します。最初の研究は、骨、歯周組織を再生する DFSCs の可能性に集中しているし、歯の根^{19,22,23,24,25,26、 27,28,29,30}。HDFSCs の神経因性の機能の知識、神経変性疾患の潜在的な治療として応用以来調査^31,32,33。HDFSCs に関しての重要性は益々 も、他の組織 (例えば、角膜上皮)^34,35の再生。HDFSC の治療の可能性は、傍分泌活動にも直接微分の潜在性にのみ基づいていません。最近では、hDFSCs は、豊富なマトリックスメタロプロテアーゼ (Mmp)、インスリン様成長因子 (IGF)、血管内皮増殖因子 (VEGF)、塩基性繊維芽細胞成長因子 (bFGF) と肝細胞の成長などの生理活性因子を分泌する示されています。因子 (HGF)、血管新生、抗炎症、細胞外マトリックスを改造、修復プロセス³⁶の重要な役割を果たしています。

しかし、幹細胞療法の広範な臨床翻訳はまだ大規模な初期細胞死や低有益な幹細胞効果^37,38など、いくつかの課題が損なわれます。遺伝子工学はこれらの課題に対処するための有望な戦略を提供し、したがって、幹細胞^38,39,40の治療効果を大きく向上できます。一時的なセルの操作マイクロ Rna (miRs) は、適切な候補者は、これらの小さな並進レギュレータ運命と安定したゲノム統合^41,42,のハザードの幹細胞の挙動を制御⁴³. までに、いくつかの有益な miRs は幹細胞の増殖、生存、ホーミング、パラクリン活動としていくつか系統⁴⁴に分化を促進識別されています。例えば、ミール 133a 改善心機未変更の MSCs⁴⁵と比較した場合、梗塞ラット心における生存率の増加と生着を示した MSCs を設計されています。同様に、ミール 146a 過剰 MSCs 虚血組織⁴⁶で治療効率につながった VEGF の多量を分泌することが示されました。

この原稿は、選択的な抽出と hDFSCs の遺伝子工学のための詳しいプロトコルを提示します。このため、人間の歯科小胞の収穫と酵素の消化だけでなく、hDFSCs の後続の分離について述べる。隔離されたセルを特徴付けるために MSC プロパティの検証のための重要な手順は、国際細胞治療¹³学会のガイドラインに従って含まれています。また、カチオン性脂質ベースのトランスフェクション戦略とトランスフェクション効率性と細胞毒性の評価を適用することによってミール変更 hDFSCs の世代の詳細な説明を提供します。