토끼 모형에 있는 최적 배아 단계에서 최소 침 습 배아 이식 및 배아 확산

인간 불모를 우회 하거나 높은 유전 가치를 가진 가축의 보급을 개량 하 고 동물성 유전 자원을 보전 하는의 목표를 가진, 일련의 기술의 세트는, 초 배 란과 같은 원조 재생산 기술 이라고 불렀습니다 시험관 내 시비, 배아 배양 또는 냉동 보존은^1,2로 개발 되었다. 현재, 호르몬 치료는 난소를 자극 하 고 다 수의 배 승 난소 모 낭을 생성 하기 위하여 주어 집니다¹. 이들 여 포 로부터 채취 된 난 모 세포는 냉동 보존 되거나 대리 모 (³)로 이송 될 때까지 시험관 내에서 성숙, 수정 및 개발 될 수 있다. 그러나, 이러한 치료법 중에,가 및 zygotes는 이러한 조건^4,5에서 생존 하기 위해 배아 적응이 필요할 수 있는 일련의 비 생리 적 과정에 노출 된다. 이 적응은 유전자 발현 및 발달 프로그래밍⁶에서 배아 변화를 허용 하는 초기 배아가 소성으로 인해 가능 합니다. 그러나, 이러한 수정은 성인이 될 때까지 배아 발달의 후속 단계에 영향을 미칠 수 있고, 지금 널리 방법, 타이밍, 냉동 보존 절차 또는 배양 조건이 배아 운명에 다른 결과를 보여줍니다^{7 , 8}. 따라서 예술의 특정 한 유도 효과를 밝히기 위해 잘 특성화 된 동물 모델을 사용 하는 것은 불가피 합니다.

포유동물 배아의 전사 로부터 발생 되는 최초 기록 된 살아있는 출생은 1890⁹에서 일어났다. 오늘날, 대리 여성에 대 한 배아 이식 (ET)은 후속 배아 개발 단계¹⁰에 이식 하는 동안 당해 유발 효과를 연구 하는 중요 한 단계 이다. ET 기술은 각 동물의 크기 및 해부학 적 구조에 따라 달라 집니다. 대형 동물 모델의 경우, transcervical 비 수술 ET 기술에 의해 ET을 수행 할 수 있었지만, 자 궁 경부의 작은 크기의 카 테 터는 더 복잡 하 고 외과 기술이 자주 사용 됩니다¹¹. 그러나 외과 ET는 혈액이 자 궁 루멘을 침범 하 여 태아 죽음¹⁰을 일으키는 원인이 되기 때문에 이식 및 배아 발달을 손상 시킬 수 있는 출혈 발생할 수 있습니다. Transcervical 비 수술 적 ET 기술은 인간, 개 코 원숭이, 소, 돼지 및 생쥐¹²,¹³,¹⁴,¹⁵,¹⁷에 여전히 적용 되지만 외과 ETs는 여전히 염소, 양 또는 기타 동물 들과 같은 종에서 사용 되 고 있으며이는 추가로 어려움을 겪고 있다^10,18,19,²⁰토끼와 같은 (2 독립 cervices) 또는 마우스 (작은 크기). 그럼에도 불구 하 고, 외과 적 전달 방법은 점차적으로 덜 침 습 적 방법으로 대체 되는 경향이 있습니다. 내 시경은 토끼, 돼지 및 작은 반추 위 제^18,19,20등에서 배아를 전달 하는데 사용 되었다. 이러한 최소 침 습 내 시경 검사 법은 토끼에 필수적 이며 일부 종²⁰에서 유익한 효과를 입증 한 infundibulum을 통해 암 울 라로 배아를 전달 하는 데 사용할 수 있습니다. 이것은 oviduct에 있는 초기 배아 단계 도중 태아와 어머니 사이 정확한 대화의 중요성에 근거를 두고 있습니다. 위에서 언급 한 바와 같이, 배아를 통해 이식 하는 동안 토끼에서 일어나는 배아 리 모델링은 이식^22,23을 할 수 있는 배아를 달성 하는 것이 필수적 이다.

소 등의 대형 동물 모델은 생화학 적 및 이식 기능이 인간 종²⁴와 유사 하기 때문에 흥미롭습니다. 그러나, 큰 동물은 예비 실험에서 사용 하기에는 너무 비싸지 고, 설치류는 실험실 연구²⁵에 대 한 이상적인 모델로 간주 됩니다 (76% 모델 생물은 설치류). 그럼에도 불구 하 고, 토끼 모델은 생식 연구에서 설치류에 비해 몇 가지 장점을 제공 합니다, 인간에 의해 전시 된 일부 생식 생물학 과정은 쥐 보다 토끼에서 더 유사 하다. 인간과 토끼는 유사한 연대순으로 배아 게놈 활성화, gastrulation 및 혈우병 태 반 구조를 제시 한다. 또한, 토끼를 사용 하는 것은 그들의 배 란 (²⁵)의 유도로 인 한 풍부 하 게 함 및 임신 단계의 정확한 타이밍을 알 수 있다. 토끼 라이프 사이클은 짧고, 31 일에 임신을 완료 하 고 약 4-5 개월에 사춘기에 도달; 동물의 유 순 및 비 공격적인 행동으로 인해 취급이 용이 하 고, 그 유지는 큰 동물의 비용에 비해 매우 경제적 이다. 더욱이, 토끼는 두 개의 독립적인 서 비 세스^11,25를 가진 이중 자 궁을가지고 있다는 것을 언급 하는 것이 중요 합니다. 이것은 다른 실험 군의 배아가 동일한 동물로, 그러나 다른 자 궁 경적으로 전달 될 수 있기 때문에, 특혜 위치에 토끼를 배치 합니다. 이것은 우리가 결과에서 모성 요인을 감소, 두 실험 효과를 비교할 수 있습니다.

오늘, 비 외과 ET 방법은 토끼에 사용 되지 않습니다. Transcervical ET 기술을 사용 하 여 90 년대 후반에 수행 된 일부 연구는 외과 적 방법으로 5.5% ~ 20.0%,²⁶ ~ 50-65%에 이르는 낮은 납품 율을 초래 했으며, 그 중에서 복 강경 수술 절차 베 센 펠 더와 브 렘¹⁸. 토끼에서 이러한 비 수술 ET 방법의 낮은 성공률은 transcervical ET에서 피할 수 있는 oviduct에 필요한 배아 리 모델링의 부족과 일치 합니다. 여기서, 우리는 모델 유기 체로 서 토끼를 사용 하는 효과적인 최소 침 습 복 강경 ET 절차를 설명 한다. 이 기술은 큰 동물 및 인간에서 추가 생식 연구를 위한 모델을 제공 합니다.

토끼는 특히 배아 이식에 대 한 좁은 시간 윈도우를가지고 있기 때문에,이 종에서는 ET에서 배아의 발달 단계와 수용자 (²⁷)의 생리 적 상태 사이에 높은 수준의 동기화가 필요 하다. 어떤 경우에는 배아 개발을 느리게 하는 생식 치료 (예: 시험관 내 문화) 또는 자궁내 막 감수 (예: 배 란 치료)를 변경 하는 경우 배아와 모계 자 궁 사이에는 동기화가 없습니다. 이러한 상황은 결과에 부정적인 영향을 줄 수 있습니다. 이러한 맥락에서 응답 하기 위해, 우리는 실험을 일시 중지, 구성 및 재개 할 수 있는 효과적인 토끼 모 룰라 유리 화 프로토콜을 설명 합니다. 이 과정은 재생산 연구를 위해로 서 바람직 하 고 우리에 게 그들의 수송을 허용 하는 배아의 장기 저장을 위한 능력을 줍니다. 복 강경 절차 및 냉동 보존 전략은 적은 동물 연구의 더 나은 계획을 할 수 있습니다. 따라서, 우리의 방법론은 위생 적이 고 경제적 인 이점을 제공 하 고 실험 동물의 인간 치료를 개선 한다는 명시 된 목표로 동물 연구의 3Rs (교체, 감소 및 정제)의 개념을 준수 합니다. 따라서, 이러한 방법으로, 토끼는 생체 내 생식 분석을 위한 이상적인 모델 유기 체를 구성 한다.