Thymus 종속 및 독립 Thymus 면역 글로불린 Isotype 반응 효소 연결 된 Immunosorbent 분석 결과 사용 하 여 마우스의 특성

B 림프 구 체액 성 면역에 주요한 선수 및 포유류 생산 항 체, 면역 글로불린 (Ig)^1,2라고도 할 수 있는 유일한 셀 형식이 있습니다. B 세포에 의해 은닉 하는 항 체 중립화, 보완 활성화, 보호 면역³선도, opsonization 등 다양 한 메커니즘을 통해 병원 균 침입에 대 한 강력한 방어를 제공 합니다. B 세포에 의해 항 체의 분 비는 일반적으로 두 가지 신호³특정 B 세포의 전체 활성화 후만 이루어집니다. 신호 1 B 세포 수용 체 (BCR) 특정 순진한 B 셀³의 표면에 표현 하는 항 원 (Ag)의 직접 바인딩에 의해 릴레이 됩니다. 신호 2의 원본에 따라 B 세포 활성화 thymus (TD) 또는 thymus-독립 (티)^3,4로 나눌 수 있습니다. TD 항 응답에서 신호 2는 세포에 의해 활성화 된 동족 CD4 T 도우미 (T_H), CD154, co-stimulatory 수용 체 CD40 B 세포^1,2,3에 대 한 리간드를 표현 하는 제공 됩니다. TI 항 응답에서 신호 2 수용 체 통행세 같이의 어느 약혼에서 온다 (타입-1의 경우 TLRs TI Ag)는 BCRs의 광범위 한 cross-linking 또는 (2 형의 경우 TI Ag)는 b 세포^3,4. 타입-1 티타늄 (TI 1) 항은 TLRs, 세균성 lipopolysaccharides (LPS), 바이러스 성 RNAs 등 미생물 CpG DNA^4,5의 미생물 ligands. 2 형 티타늄 (TI-2) 항 원 높은 반복 구조, 있고 장기 및 영구 BCRs^4,6의 여러 cross-linking에 의해 B 세포에 신호를 제공할 수 있습니다. TI-2 항의 전형적인 예로 폐 렴 구 균 다 당 류와 다 당 류 hapten 활용^6,7있습니다. TD와 TI 항 강력한 항 원 특정 IgM 응답을 이끌어내는 수 고 또한 항 원 제시 세포 (Apc) 모 수석 세포 (DCs)^{1 에서 제공 하는 도움 isotype 전환 항 체 (IgG, IgA, ige의)의 생산을 일으킬 수 있다 2,3}. 또한, TD와 TI 항 APCs의 도움으로 메모리 응답을 유도 하는 것 수 있지만 TD 항 메모리 B 세포 생성^3,8유도에 더 효율적입니다.

이 프로토콜에서 TD와 TI 서 응답 TNP-다 당 류 (중립, 높은 분기 hapten 활용 모델 항 원 2,4,6-trinitrophenyl-열쇠 구멍 삿 hemocyanin (TNP KLH)와 복 (i.p.) 예방 접종에 의해 쥐에 elicited는 그리고 높은 질량), 각각^9,,1011. TD 항 원 항 체¹²의 생산을 강화 하는 보조 일반적으로 사용 됩니다. 여기 우리의 프로토콜에 TNP KLH 졸업생, 면역 연구¹²에 일반적으로 사용 되는 보조로 주사 된다. 사용할 수 있는 adjuvants의 다른 예로 완전 하거나 불완전 한 Freund의 보조 제 (CFA 또는 아일랜드), monophosphoryl-지질 A / 트 레 할 로스 dicorynomycolate (“Ribi” 보조), 및 CpG oligodeoxynucleotides, 등^{13, 14}. 예방 접종, 후 마우스 세라 다른 시간 지점에서 수확 하 고 세라에 TNP 특정 항 체 Ig isotype-특정 효소 연결 된 immunosorbent 분석 결과 (ELISA)^9,10, 를 사용 하 여 계량은 ¹¹.

애 란은 의학에서 진단 도구와 또한 생물 의학 연구^15,16분석 도구로 서 널리 사용 되는 접시 기반 분석 결과 이다. 그것은 감지 analytes 항 체, 호르몬, cytokines, 발산, 그리고 다양 한 항 원, 등등을 포함 하 여 계량 하는 데 사용 됩니다. ELISA는 직접, 간접, 샌드위치 및 경쟁적인 ELISA^15,16를 포함 하 여 여러 가지 다른 형식에서 수행할 수 있습니다. 일반적으로, 그것은 일반적으로 결정 96 잘 접시, 기본 항 체와 알을 품는 고체 표면에 항 원 동원 정지를 포함 한다. 부 화, 후 언바운드 항 체는 멀리 세척 된다. 직접 ELISA에서 1 차적인 항 체는 효소 (일반적으로 양 고추냉이 과산화 효소 또는 알칼리 성 인산 가수분해 효소), 신호 검출 악기에 의해 감지와 같은 보이는 색상 변화를 비 기판 쪼개 다 수는에 직접 활용 한 분 광 광도 계^15,16. 대조적으로, 효소 연결한 이차 항 체는 1 차 항 체를 바인딩하는 데 사용 됩니다, 다음이 간주 됩니다 간접적인 ELISA^15,16. 직접 ELISA 간접적인 ELISA는 더 민감한^15,16빠릅니다. 샌드위치 ELISA, 번호판, 샘플에 대 한 관심의 항을 무력화 하는 데 사용 하는 “캡처” 항 체로 코팅 하 고 캡처된 항 원 직접 또는 간접적인 방식으로^15, 에 또 다른 “탐지” 항 체에 의해 검출 될 수 있다 ¹⁶. 샌드위치 ELISA 항 원 antigen의 두 개의 서로 다른 항 체에 의해 감지 되 면 이후 높은 특이성을 제공. 경쟁적인 ELISA에서 경쟁 샘플 항 원 및 주 항 체 바인딩 위한 플레이트-바인딩 항 간에 설정 하 고 샘플에 있는 항 원 농도 기판에서 신호 감소를 측정 하 여 정량은 ^{15 , 16}. 경쟁 ELISA 위에서 언급 한 직접 또는 간접 형식을 사용 하 여 수행할 수 있습니다 및 단지 1 개의 epitope^15,16작은 항 원의 검출을 위한 유용.

항 체의 측정에 대 한 대체 기술을 포함 라디오-immunoassay (RIA), electrochemiluminescence (ECL) 분석 결과 및 표면 플라스몬 공명 (SPR) 시험¹⁷. 리아 첫 번째 immunoassay 높은 특이성 및 방사선된 약^18,19를 사용 하 여 감도 항 원 (항 체)의 존재 그 조치를 개발 했다. 그러나, 방사성 독성, 폐기 비용, 수명 및 방사성 재료와 함께 작동 하도록 특별 한 라이선스 문제로 인해 ELISA는 더 나은 하 고 일반에 대 한 더 편리한 기술^20,21을 사용 하 여 키를 누릅니다. ECL은 chemiluminescent 반응 반응성이 매우 높은 종, 전극의 표면에 안정적인 선구자에서 생성 하는 전기를 사용 하 여 시작 되 고 analytes의 양을 측정 하는 데 사용 될 수 있는 매우 중요 한 분석 결과 (항 원 등 또는 항 체)²². 그러나, ECL 특별 한 계기를 요구 하 고 따라서 사용 되지 않습니다으로 광범위 하 게 일 라²³. SPR은 직접 분석 결과 ligands의 바인딩은 측정 하는 데 사용할 수 있습니다 (예., 항 체)를 분자를 움직일 수 (예., 항 원) 센서에 칩 표면²⁴. SPR 매우 구체적으로 실시간으로 상호 작용을 감지 하 고 ELISA로 이라는 시 약의 사용을 요구 하지 않습니다. 그러나, SPR 또한 특별 한 장비를 필요로 하 고 ELISA¹⁷보다 낮은 감도 있다. 다른 방법의 한계를 감안할 때, ELISA는이 프로토콜에 우리의 목적을 위해 가장 적합 하 고 편리한 기술 이다. 여기, 우리는 총 Ig isotype 수준 분석 및 항 원 특정 Ig isotypes의 분석에 대 한 간접적인 ELISA의 절차에 대 한 샌드위치 ELISA 사용 하 여를 설명합니다.