תלת מימדי עיבוד וניתוח של Immunolabeled, מובהר היפרדות villous חלקית וסקולרית הרשתות האנושיות

הבנתנו את השליה המתפתח, פתולוגיות שלה, במידה רבה, מוגבל כדי להסיק יחסים מרחביים בין villi סמוכים נימים כלולות נגזר ממקטעים היסטולוגית. במחקר זה, פתרנו בעיה זו על-ידי פיתוח אמצעי כדי ליצור הדמיות תלת מימדי (3D) של רשתות נימי היפרדות האנושי המתאימים ניתוחים של תכונות רשת נימי (למשל הסתעפות, אחידות). לעשות את זה שילבנו מכתים immunofluorescent עם שני המוצרים ניקוי רקמות מסחרי, Visikol-1 ו- Visikol-2 (המכונים להלן פתרון-1 ופתרון-2).

השליה האנושית הוא מתחם עצום של כלי הדם הממוקם בין הדם intervillous של האם ואת העובר המתפתח. הרחבת החוצה מן ההכנסה שלה המשקולת שליה, הטבור סניפים לרשת של העורקים והוורידים אשר ramify כדי לכסות את המשטח שליה עם רשת כלי הדם משוכלל. הקצוות שלהם ואז לחדור למטה לתוך הפנים או עומק של הדיסק היפרדות איפה הם עוברים מספר דורות יותר מסעף ולסיים את villi מסוף, רשתות נימי כלולות, האתר של חילופי גזים, חומרים מזינים, וחילוף פסולת בין הדם העוברי, אימהית.

עלבונות לרשת הנימים היפרדות במהלך הפיתוח להיות השלכות מתמשך על הבריאות של העובר, הרך הנולד ו-^2,למבוגרים מתהווים ^1,3. על רקע ההריון הקשורות פתולוגיות כגון הפלה, הגבלת גדילה תוך רחמי, סוכרת רעלת היריון אימהי ^4,5,6 שם הוא ערך גבוה על פיתוח שיטות מדידה, אפיון של היפרדות רשתות נימי villous חלקית. מחסום הגדולות היא היפרדות רשתות כלי דם להקיף מגוון רחב של קנה מידה. הרשתות וסקולרית משטח יכול להיות גדול כמו 4-5 מ מ קוטר. הנימים villous חלקית מסוף הם גודל 10-20 מיקרומטר בקוטר; השליה מכילה יותר מ 300 ק מ של כלי הדם ⁷. כיום, ישנן מספר טכניקות קל לשימוש, מהיר ומדויק יכול ללכוד אלה הקצוות של הסקאלה כלי. עד כה, רק מספר קטן של villi שיכול להתבצע על ידי מיקרוסקופ. לדוגמה, Jirkovska. et al. התמקדו סיסי היפרדות-מונח, שילוב מיקרוסקופיה קונפוקלית עם טורי מקטעים אופטי במרווחים 1 מיקרומטר, המתקבל 120 חלקים עבה של מיקרומטר; אין נתונים על מספר דוגמאות למד ולא סטטיסטיקה נמסרו ⁸. מבנים נימי אותרו, קווי המתאר של villi של נימים היו מצוירת ביד, עם לשרטוטים מיוצא לניתוח תמונה. בעוד המחברים לדון על ההשלכות של הממצאים שלהם עבור “גדל villous חלקית וסקולרית הרשת”, מסקנות כאלה הם בעייתיים כאשר רק “המונח” (36 + שבוע הריון גיל) הרקמה הוא למד. באופן דומה, מאיו ואחל’, פירס. ואח הסתמכה על הרקמה של אותו הגיל, עבור שלהם סימולציות של העברת זרימה וחמצן דם, אבל את בדיקותיהם היו מוגבלים רק כמה המונח, ^9,villi מסוף¹⁰ . Stereology גם הוחל במחקר של המבנה של כלי villous חלקית. אבל שוב, המוקד כבר בדרך כלל על הריונות מאוחר יותר אספקת liveborn תינוקות עם אחד או יותר ההריון סיבוכים ^11,12.

עד לאחרונה, מיקרוסקופיה קונפוקלית הייתה מוגבלת לדימות רקמות לעומק של 100-200 מיקרומטר בשל ספיגת עירור פליטת קרינה פלואורסצנטית על ידי רקמת שמעליה ¹³ . למרות רקמות ניקוי, היסטולוגיה 3D נרחב תוארו בספרות ויש שיטות רבות בשביל לרקמות ניקוי רבים הם מתאימים לשימוש עם רקמות באופן כללי, כפי שהם נזק בלתי הפיך מורפולוגיה הסלולר דרך hyperhydration של חלבונים או הסרה של ליפידים. לכן, אין אפשרות לאמת כי תוצאות אלה הם המעידים של הרקמה עצמה, לא ממצאים עיבוד ואילו שלנו רקמות ניקוי תהליך היא טכניקה הפיך כי הוא מסוגל שמולן היסטולוגיה מסורתיים. בדרך כלל, ניקוי רקמות כרוך באחת משלוש גישות עיקריים: 1) התאמת אחיד של מדד השבירה (RI) של מרכיבי רקמת ידי ועלייתו RI התאמת פתרונות, אשר מסיר את פיזור אור המצטבר שנגרם כבידתי עקב רציפה התנודות של רי נמוך (ציטוזול) ומרכיבים RI (חלבון/שומנים) גבוהה; 2) הסרת מרכיבי השומנים דרך הטמעה לתוך הידרוג וניצול אלקטרופורזה/דיפוזיה להסיר את מרכיבי השומנים; 3) הרחבה/דנטורציה של חלבון מבנה כדי לאפשר חדירה מוגברת של ממיסים ולעודד אחידות של רי ¹³. בעוד גישות אלה ניתן לעיבוד רקמות שקוף, לאפשר ייצוגים תלת-ממד של סמנים ביולוגיים שיווצר, ייצוגים תלת-ממד אלה הם ערך קליני רב כמו זה מאתגר כדי לקבוע אם התמונות האלה מעידים על מאפייני הרקמה או של הרקמה תהליך ניקוי. מצד שני, מאז שלנו רקמות ניקוי הוא הפיך תקן היסטולוגית ו/או אימונוהיסטוכימיה ניתן ליישם את הרקמה זהה כדי להעריך אם התיקונים יש משמעות קלינית.

מחקר זה מציג ניתוח של 47 דוגמאות villous חלקית דיסטלי המתקבל סך של הריונות קלינית נורמלי, electively הסתיים 23 בין ההיריון של 9-23 שבועות השלים שני משלוחים מלא לטווח רגיל. Immunofluorescence תיוג של trophoblast ושל endothelia אפשרה ניתוח כמותי, אוטומטי של שינויים הרשתות וסקולרית villous חלקית את המורכבות שלהם.

עם פרוטוקול זה, אנו מבודדים, ניתח villi מסוף ורשתות נימי שלהם בקנה מידה בלתי אפשרי בעבר. גישה זו, כאשר חל פיתוח רשת נימי villous חלקית לאורך ההיריון יהיה לזהות מאפיינים אלה, המהווים הבסיס בלידת ילד בריא. כאשר מוחל על מחקרים של הריונות מסובך, זה נבאר גם כאשר, כיצד פתולוגיות היפרדות לשנות העצים villous חלקית של הרשתות הנימים הם נדן, וכיצד אלה לפגוע בעובר רווחה.