抗と新規 HEp 2 エリート/DFS70 ノックアウト基板アナ選考において混合 DFS70 パターンの同時の区別

HEp 2 エリート/DFS70 KO 基板し古典的なアナのパターンを保持し DFS70 パターンの明確な区別が容易になります。 HEp 2 エリート/DFS70 島基板上従来と設計された細胞は、同一 LEDGF/p75 を除いてすべて自己抗原を維持します。キットによって提供される否定的な制御は、ベースラインの蛍光信号を確立します。HEp 2 エリートに均一、まだら、セントロメア、核小体およびミトコンドリアのパターンの肯定的なコントロールは、従来の IIF HEp 2 基板 (図 2 a) 上想定されるパターンと同じパターンを生成します。これらの参照パターンは、各パターンの抗原病協会とともに詳細に記載されている以前4,29。表 1に図 2 aで見られるパターンの簡単な説明があります。 HEp 2 エリート DFS70 パターン: それぞれのセルの約 10% はよく高密度微細斑点パターンを示す (ICAP 名称を割り当てられる: AC 2)、核のクロマチン上で観察できるし、の分裂核 (図 2 b) を見る関連するクロマチン染色します。従来の HEp 2 基板のすべてのセルはこのパターン DFS70 肯定的なサンプルと反応があります。HEp 2 セルの残りの ~ 90% はノックアウト LEDGF 抗原をコードするpsip1遺伝子がある、したがって信号または抗 DFS70 陽性血清 (図 2 b) と反応のパターンは生成されません。HEp 2 細胞の 10% がある明るい蛍光 DFS70 パターンとセル現在追加パターン (例えば、細かい斑点または核小体) の残りの部分に対応する、混合パターンの存在を示します。このようなパターンを綿密に検討は DFS70 パターンだけでなく存在しているすべての自己抗体の特異性を確認するために不可欠です。HEp 2 エリート基板、血清サンプルで作成されたパネルの能力を実証するには、各種濃度の DFS70 および ANA 陽性血清を制御し、従来の両方でテストおよび HEp 2 エリート基板標準 IIF を使用するプロトコル (図 3、図 4、図 5、図 6、図 7)。 DFS70 抗と従来と HEp 2 エリート基板上に混合反応の解釈: パターンごとに特定疾患関連アナ (図 3、図 4、図 5、図 6、図 7)、抗アナはほとんど列左のパターンおよび抗 DFS70 柄右側列観察することができます。途中で 3 つの列は、様々 な疾患関連の比率と DFS70 パターンのポジティブ コントロールを表します。結果として得られる混合パターンは従来の HEp 2 基板 (図 3図 4図 5図 6図 7の一番上の行) で識別し挑戦しています。しかし、サンプルのほとんどの小説の Hep 2 エリート基板変更されていないし、設計したセルの強度の違いは異なる (以下の明るい細胞に明るいの比がある場合だけではなく DFS70 自己抗体の存在を確認します。1:9) が、またセカンダリ アナ パターンを明らかにします。均質な DFS70 や斑点 DFS70 混合反応の場合、自信を持って追加の試金 (図 1 a) の数を実行することを選択 labs につながる正しいパターンを予測することはにくい。セントロメア DFS70 と核小体 DFS70 の場合混合の反応、DFS70 陽性は非常に挑戦的な疑い (図 5図 6) を実行します。DFS70 パターンは、核小体および細胞質網状/海部反応血清比 50% に達するまでない支配的です。すべての例で DFS70 パターンを提示することができます HEp 2 エリート基板と強度の広い範囲の基になるセカンダリ パターン レベルおよびこうしてより正確なアナの解釈が容易になります。 密接に混合パターン、アナとコントロールされ拡大 (図 8) 従来の HEp 2 エリート基板肯定的な DFS70 の様々 な 50: 50 の組み合わせの結果を観察。中間期および有糸分裂染色解釈と報告されたパターンの精度を向上する HEp 2 基板上への DFS70 を含むすべての ANA パターンを観察することをお勧めします。ただし、混合パターンの細胞核を分割によって提示された差分パターンは可能性があります正確な解釈を容易にするための十分なできません。赤い矢印 (図 8) は、従来、設計された細胞の分裂核を示します。それは、混合 DFS70 細胞分裂反応が準拠していない疾患関連の解釈のためのルールの設定と ANA パターン観察できます。黄色と青の矢印は変更されていないし、設計した (DFS70 島) HEp 2 細胞核をそれぞれ示します。同時上映ができます、同じ顕微鏡の視野の変更されていない細胞核染色 (~ 10%) と人工細胞核 (~ 90%) パターンの明確な強度の違いが観察されるすべての組み合わせは、(図 8) で、DFS70 パターンの確認。 図 1: 従来 HEp 2 と HEp 2 エリート/DFS70 島 IIF を使用してアルゴリズムをスクリーニング アナ。(A) 回路図解くスクリーニング段階 (黄色の斜線部分) で抗と混合 DFS70 肯定的なパターンを識別するに従来の HEp 2 IIF の欠乏と ANA パターンを使用する疾患に関連するセカンダリを排除できない可能性がありますDFS70 パターンによって隠されます。さらに、現在の世代の DFS70 特定の固相験試金は ANAs の追加テストにつながる抗 DFS70 陽性を確認することがないです。(B) 回路図 ANAs、抗と混合の DFS70 反応の同時の区別のスクリーニングのため HEp 2 エリートの機能を明らかにし、確認を試金する固相 DFS70 の必要性を排除すること。大幅 HEp 2 エリートを使用してアルゴリズムとスクリーニング アナを簡単確認試金の必要数が減る。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。 図 2: 古典的なアナと DFS70 HEp 2 エリート/DFS70 島の基板パターン。(A) HEp 2 エリート/DFS70 島基板古典的なアナ パターンが保持されます。古典的な均一反応と DFS70 の肯定的な反応は、キットによって提供される肯定的なコントロールを使用して作り出されました。他の反応は、核小体および細胞質網状/海部反応5まだら、セントロメアの以前に確立された陽性コントロール血清を使用して作り出されました。(B) 基板の HEp 2 エリート/DFS70 島 DFS70 パターンの簡単な区別を容易にする従来設計の細胞を提供しています。その結果、DFS70 抗反応界面上のパターンを汚すと従来と設計 (DFS70-KO) 細胞の細胞核を分割回路図を示しています。設計の HEp 2 細胞は通常従来の HEp 2 基板上 DFS70 自己抗体反応によって隠されているセカンダリのパターンの同時検出を可能にする LEDGF/p75/DFS70 抗原を欠いています。矢印 (黄色) は、有糸分裂細胞核の例を示します。スケール バーを表す 20 μ m.この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。 図 3: DFS70 との組み合わせで均一な血清。DFS70 抗血清は様々 な比率 (正立単、試しました、50: 50、20: 80、および 0:100) の肯定的な均一パターン制御と併用され、従来と設計 (DFS70-KO) HEp 2 基板上でテストします。スケール バーを表す 20 μ m.この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。 図 4: DFS70 の組み合わせで血清を斑点と。DFS70 抗血清は様々 な比率 (正立単、試しました、50: 50、20: 80、および 0:100) の肯定的な斑点パターン制御と併用され、従来と設計 (DFS70-KO) HEp 2 基板上でテストします。スケール バーを表す 20 μ m.この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。 図 5: DFS70 と動原体血清の組み合わせ。DFS 70 抗血清は様々 な比率 (正立単、試しました、50: 50、20: 80、および 0:100) の肯定的なセントロメア パターン制御と併用され、従来と設計 (DFS70-KO) HEp 2 基板上でテストします。スケール バーを表す 20 μ m.この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。 図 6: DFS70 との組み合わせで核小体血清。DFS 70 抗血清は様々 な比率 (正立単、試しました、50: 50、20: 80、および 0:100) の肯定的な核小体パターン制御と併用され、従来と設計 (DFS70-KO) HEp 2 基板上でテストします。スケール バーを表す 20 μ m.この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。 図 7: DFS70 との組み合わせで細胞質網状/海部血清。DFS70 抗血清は様々 な比率 (正立単、試しました、50: 50、20: 80、および 0:100) の肯定的なミトコンドリア パターン制御と併用され、従来と設計 (DFS70-KO) HEp 2 基板上でテストします。スケール バーを表す 20 μ m.この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。 図 8: 混在パターン (50: 50 の比率) 従来の生産と HEp 2 エリート基板。2 枚の基板間の相違点を明らかにしました。赤い矢印は、両方の基板上に設計された従来の細胞の分裂核を示します。これらの組み合わせの従来の HEp 2 基板上の細胞核を割って提示差分パターンは混合パターンの正確な解釈のために十分ではありません。それは、細胞分裂の混合の DFS70 反応することができます摂動疾患関連の解釈のためのルールの設定 ANA パターン観察できます。黄色と青の矢印は変更されていないし、設計した (DFS70 島) HEp 2 細胞核をそれぞれ示します。すべての組み合わせの結果が設計された基板上テスト: 明確な強度差に属する間期核パターン (~ 10%) のセルをそのまま、設計の細胞 (~ 90%) を認めた有効に同時検出と DFS70 パターンの確認。スケール バーを表す 20 μ m.この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。 ANA パターン 説明 均一 全体の核は、びまん性の染色パターンと均等に蛍光を発する。 斑点 離散の斑点をもつ核全体で蛍光を発する。 微細な斑点と粗い斑点パターンが記載されています。 核小体 核小体は核内で複数の固体または斑点のボディとして染色します。サブタイプは、以前に記載されています。 セントロメア 有限数の大きな斑点。凝縮染色体細胞有糸分裂を経る反応性抗原を分離します。 細胞質網状/海部 細胞質とミトコンドリアの染色陽性顆粒が表示されます。 DFS70 ありきたり HEp 2 細胞: 細胞分裂核で見られる染色間期核のクロマチン関連高密度微細斑点パターンが観察されます。 •Engineered DFS70 島細胞: 抗 DFS70 抗体を作り出す否定的な汚損 HEp 2 エリート/約 1:9 比で従来と設計 (DFS70 島) セルには DFS70 島します。従来の細胞を作り出す典型的な DFS70 パターンと設計の細胞を作り出す負のパターン DFS70 抗/分離陽性反応と反応。 表 1: ANA パターンの説明。