Confocal 현미경 검사 법 그리고 형광 일생 화상 진 찰 Hyperspectral에 의해 발광 활용된 Oligothiophenes로 물 녹말 체 조직 이미징

아 밀 로이드로 aberrantly 접힌된 단백질의 증 착은 많은 질병 프로세스의 키 이벤트입니다. Extracellular 녹말 체 패 Aβ 펩 티 드의 구성 및 세포내 neurofibrillary tangles hyperphosphorylated 타우에 의해 형성 된 알 츠 하이 머 병 환자의 뇌에서 찾을 수 있습니다. 다른 단백질, 예를 들면, transthyretin (TTR), 혈 청 아 밀 로이드 A 구성 요소 (SAA), IgG 빛 체인 misfold 및 CNS 외부 조직에 아 밀 로이드 예금으로 매니페스트는 다양 합니다. 아 밀 로이드 예금 알려져 되 고 한 세기 이상, 우리는 여전히에 대 한 공부 방법을 녹말 체의 상세한 지식이 부족 하지만 증 착 분자 수준 및이 프로세스를 방지 하기 위해 할 수 있는 무엇에서 시작 됩니다. Alzheimer의 질병에 대 한 그것은 어떻게 amyloidosis의 과정이 neurodegeneration 연관 확증 해야 합니다. Amyloidosis를 치료 하는 임무에 하나의 주요 모험은 소설 개발 하 끈 녹말 체 개시, 진행 및 회귀; 모니터링을 위한 도구 따라서 타겟된 녹말 체 감지 키입니다. 긴 안목으로 보면, 임상 진단 민감도 선택도 녹말 체 착 방법^7,15의 증가에서 도움이 됩니다. 이 점에서 현재도 전에 엄청난 고 매우 활동적인 연구 분야. 임상 개발 및 실험에 대 한 하나의 주요 문제는 예 후 진단. 이러한 질병 가능성이 시작 전에 증상이 나타나지만 시작 거기 치료 해야 질병의 식별. 여기, 감도 소설 방법론에 대 한 핵심 측면 이다. 또한,이 문제는 일부 단백질 집계는 독성, 일부는 보호, 그리고 일부는 중립 때문에 훨씬 더 복잡 한입니다. 따라서 특정 집계 morphotypes를 모니터 하는 능력 때문에 고유한 집계 된 종의 존재 신경 단백질 집계 질병의 다양성에 대 한 보고 유형이 다른 표현 형을 설명 하기 위해 제안 되었습니다 필수적 이다. 예를 들어, 프리온 단백질은 아미노산의 동일한 기본 시퀀스 특정 프리온 긴장을 별개 집계 morphotypes에 misfold 수 있는 어떻게의 고전적인 예입니다. 유사한 다형성 Aβ 펩 티 드, α-synuclein, 및 타우 또한 보고 되었습니다. 이와 관련, LCOs 별개 집계 morphotypes의 광학 지정을 위한 뛰어난 도구를 되도록 표시 되었습니다. 프리온 변형 관련 단백질 집계, 단백질 예금 조직의 amyloidosis, 다형 Aβ의 여러 종류에서 발견 하 고 타우 집계는 LCOs에서 관찰 하는 conformationally 유도 광학 현상으로 인해 구별 되어 있다.

아 밀 로이드 증 착 분자 정밀도의 생화학 또는 생물 방법으로 침투 하기 어려운 조직에서 수행 되는 이벤트입니다. 이벤트 전 비보 vivo에서, 그리고 생체 외에서 동일한 LCO 분자를 사용 하 여 검색을 vivo에서 에서 비보 전 또는 에 적용 하는 기술을 사용 하 여 발생 하는 분열 이벤트 무대 세트 체 외 ^11,17를 샘플링. 최근 보고 된 고해상도 구조 모델 쇼는 LCO pentameric FTAA (pFTAA) 바인딩합니다 6 레지스터에 병렬 베타 가닥¹⁸, 스패닝 fibril 축과 평행 하 게 정렬 된 사이드 체인에 의해 형성 된 구멍에 다는 것을 보여주는 원자 해상도 LCO 대상의 항목에 대 한 지식을 얻기 위해 가능 합니다. 본질적으로 pFTAA의 바인딩 구멍 및 바인딩 모드가 비슷합니다 콩고 레드¹⁹, 반복적인 긍정적인 충전된 리스 사이드-체인 늘어서 groove에 의해 규정. LCOs의 선호도 콩고 레드 체인 유연성과 소수 성 구멍으로 thiophene 링의 황 원자의 강한 반 데르 발스 상호작용으로 인해에 비해 더 나은 것으로 나타납니다. (전에 ThT 응답) prefibrillar 종^5,20 의 탐지 반복적인 β 시트, 레지스터에 병렬-베타-가닥, 두 thiophene 단위 pFTAA 이상 되 고 hFTAA에 대 한 어느 것이의 구성에 따라 표시 최대 8 베타 가닥의 교차점을 스팬.

얼룩 프로토콜 문제가 다음 단계에서 촬영에 주의 기울이고 필요 합니다: (i) 고정: 조직 샘플의 광범위 한 고정 녹말 체 구조 수 고에 의해 유도 된 형광 스펙트럼에서 변화를 감지 하는 가능성을 제한 hFTAA 분자의 구조적 왜곡입니다. 신선한 냉동 재료에서 cryosections의 가벼운 고정 최적의 스펙트럼 분해능을 달성 하기 위해 선호 된다. 그러나, hFTAA 얼룩 하 고 아 밀 로이드 고정된 조직에서 그러나 감소 효능으로 갈수록 스펙트럼 변화를 형광. (ii) Epitope 노출: epitope 노출 항 체 바인딩 때때로 때문에 바인딩할 hFTAA에 대 한 능력을 줄일 수 있습니다에 대 한 달성 하기 위해 조직의 사전 치료 중단 녹말 체 구조. 이 문제가 있다면 epitope 노출 얼룩 프로토콜, 항 체 및 hFTAA에 대 한 연속 섹션을 사용 하 여 항 체에 있는 중요 한 단계 이다, 각각 수 간주 됩니다. (iii) overstaining: hFTAA은 매우 민감 하다. 작업 솔루션 nM의 낮은 농도에서 유지 되어야 한다. 배경 얼룩 문제가 경우 hFTAA의 농도 줄입니다. HFTAA 바인딩 요소는 조직에 스파스, hFTAA의 초과 집계 하 고 설치 매체에 누적 될 수 있습니다. 이것은 조직 자체의 초점 평면에 있지 않은 형광으로 인식 됩니다. 이 나타나면, 담가 PBS에 탑재 된 슬라이드 때까지 커버 슬립 섹션의 미끄러져 질 수 있다, PBS, 세척 신선한 설치 매체와 새로운 커버 슬립 다시 탑재. (iv) 필터 기반 이미징: 긴 패스 필터 또는 여러 탐지 채널을 사용 하 여 주로 괴기 하 게 해결된 형광 이미징이이 종이 설명 합니다. hFTAA 또한 짧은 패스 필터를 사용 하 여 모니터링할 수 있습니다. 이 대비 감소 되며 여러 색상 검출 하는 가능성을 폐지 유의 하시기 바랍니다.

지난 년 동안 그것은 분명로 연구 도구, 형광 LCOs와 특히 hFTAA 매우 유망한 속성 표시 되고있다. 결과 다양 한 단백질 및 질병 상태, 혈 청 아 밀 로이드 A, transthyretin, 면역 글로불린 경 쇄의 전신 아 밀 로이드 (타우, 포함 신체 근육), 셀 안에 hFTAA 감지에서 배열에 대 한 증명 되었습니다 (카파과 람다) seminogelin 1, 프리온 단백질 (를 포함 하 여 임상 샘플)²¹, 작은 섬 녹말 체 폴 리 펩 티, 그리고 인슐린^7,15. 진단 도구로 hFTAA의 구현에 대 한 제한 요소는 그 형광 현미경 일상적인 녹말 체 병 리 실험실에서 광범위 하 게 사용 되지 않습니다. 또한, 그의 제공 되지 않습니다 쉽게 병원에. 그러나, hFTAA 녹말 체 얼룩 및 형광 현미경 필터 기반된 형광 현미경에서 임상 실험실에서 사용 되 고 한다무료 진단 방법으로 간주 됩니다. 이 최근 근 생 검에 transthyretin amyloidosis 자동된 패션²²에 형광에 대 한 기본 설정을 사용 하 여 함께 시연 했다.

또한, 뿐만 아니라 다양 한 단백질, hFTAA 형광 fibril 형식과 미리 원 녹말 체 집계, 예를 들어다양 한 인식, 경로 원 종 감지 되 고 특징. 이 책에서 우리 3 현미경 검사 법 기술을 사용 하 여 다양 한 샘플 형식에 대 한 LCO를 증명 하고있다. 제어 합성의 사용 또한 바이오 대상의 다양 한 검색 예를 들어, 표면 플라스몬 공명 (SPR)²³ 에 의해 상호 작용의 기록 및 양전자 방출 radiolabeling LCOs의 개발에 대 한 수 있다 컴퓨터 단층 촬영 (PET)²⁴.

날짜 하려면,과 25 다른 LCOs 출판 되었습니다. 어떻게 이러한 질병 관련 집계 조립, 분해, 및 기관과 개인 존재 하는 방해의 이해와 지식을 녹말 체 예금의 이미징 LCOs의 증가 사용을 증가할 것 이다.