通过“Acufection”和它的皮肤研究中的应用的经济型DNA递送系统的开发

皮肤是机体防御的第一线。角质形成细胞（KCS）在人类和小鼠的皮肤中的主要细胞类型。响应环境刺激（ 例如阳光，氧气，化学品和病原侵入），枯否细胞被活化并产生宽促炎细胞因子和趋化因子如IL-8，IL-6，IL-1α，IL-1β，TNF-α的阵列α和GM-CSF ^1。他们一起引发免疫细胞在皮肤的招聘。加重皮肤炎症常常与许多人类疾病，包括急性异位接触性皮炎，慢性T细胞介导的炎症（ 例如过敏性接触性皮炎和银屑病^）2相关联。通过抑制KC活化调节皮肤炎症反应是治疗皮肤炎症一个可行的办法。本协议描述了一种新方法，瞬时表达在表皮细胞因子基因，以研究免疫RESponse继发于皮肤这样的处理。

表皮组成的皮肤最表面的一层。它作为一个物理屏障保持外部物质如核酸和病原体进入皮肤的更深层这样。一些无针技术已经建立了表皮DNA转移^3，4。在溶液中的DNA或与阳离子脂质体或腺病毒载体相关联的已被直接施加到与技术修饰表皮如除去角质层的或与脱毛试剂的治疗。角化上皮的去除促进DNA交叉的表皮屏障，并与角质形成细胞和朗格汉斯细胞相互作用以诱导免疫应答^5。虽然大的表面积可用于DNA转移而这种做法不涉及针，也有缺点，包括要求对于大批量DNA（10 – 100微克），在皮肤上的苛刻处理通过汽提，并且在没有诱导DNA递送增压器⁶在免疫动物的免疫应答的结果不一致。裸DNA到皮肤的微粒介导的细胞内递送已被证明是高效的和可再现的用于诱导免疫应答^7,8。一种手持式基因枪已被用于轰击皮肤目标部位用质粒DNA包被的金颗粒直径微米大小2通过加压氦气气流⁹的装置。质粒DNA被想必在皮肤采取了由KCsand树突细胞（DC）和蛋白质被局部表示或树突¹⁰被输送到引流淋巴结。尽管基因枪系统简单，需要有限的技术经验，为准备和提供的“DNA BUL成本让“（ 即金粉末，氦气）和基因枪本身限制了它的一般应用。另外，当实验在不同的位置进行了氦气输送系统的要求限制了便于基因枪交通工具。Microseeding已经证明，以实现基因转移比单次注射和粒子轰击¹¹的更高的效率。Microseeding使用纹身枪无需使用微粒珠递送DNA至皮肤^11。振荡上使用该方法对皮肤的微针是有可能直接刮细胞膜，从而在同一时间传送到DNA多个小区。然而，随着大量注射用0.254毫米直径针相关的疼痛是不利的。

在这里，我们提供一种替代的方法来在体内 DNA递送。该“acufection” </str翁>我们在这里描述的方案提供了一种经济和有效的方式来在小鼠皮肤递送质粒DNA。简言之，将10针灸针（直径0.2mm×13毫米长）在通过胶粘带束被束缚。将10μL的PBS用含有感兴趣的转基因的质粒DNA的10微克体积置于剃毛，脱毛霜处理的侧面上的皮肤。通过使用针刺针束产生振荡的皮肤表面（1厘米×1cm）的，在角质层的角蛋白被松开，并且施加到所述表面上的质粒DNA被吸收进入表皮。皮肤损害进行监测，发现是最小的。在acufected皮肤转基因的表达通过定量实时PCR（定量RT-PCR）和ELISA证实。使用IMQ处理的小鼠模型¹² acufection递送IL-15ΔE7对皮肤炎症的免疫调节效果进行了论证。虽然acufection证明是一个简单的，少DEMAnding方法用于体内 DNA递送，DNA为不同的基因和时代刺破皮肤的最佳量必须仔细优化以获得可再现的结果。