Obtención de imágenes de alteración celular de la forma y el movimiento celular en<em> Drosophila</em> Uso de la gastrulación DE-cadherina Reporter moscas transgénicas
Özet
Herein we describe a procedure to capture live images of Drosophila gastrulation. This has enabled us to better understand the apical constriction involved in early development and further analyze mechanisms governing cellular movements during tissue structure modification.
Abstract
La gastrulación es el primero conjunto de eventos morfológicamente dinámicas que se producen durante el desarrollo embrionario de los animales multicelulares tales como Drosophila. Esta alteración morfológica también es reconocida como transición epitelial a mesenquimal (EMT). La desregulación de EMT está asociado con la fibrosis y la metástasis del cáncer. Hay pruebas de que EMT es controlado por un número de mecanismos moleculares. Como también se conocen tales muchos genes, clave que controlan la constricción apical a ser factores importantes en la EMT observado en la metástasis del cáncer. Como EMT durante la gastrulación Drosophila, las células epiteliales pueden ser inducidas a cambiar su forma y ser reprogramadas para redirigir el destino celular hacia otros diversos tipos de células. Aquí se proporciona un método de formación de imágenes robusta de Drosophila gastrulación para ensayar la iniciación de los movimientos celulares morfogenéticos y la identificación del destino celular durante esta etapa del desarrollo embrionario. Usando este método, identificamos cell reordenación en el momento de la gastrulación y demostrar la importancia de la constricción apical durante la gastrulación usando GFP etiquetados DE-cadherina.
Introduction
La gastrulación es el primero conjunto de eventos morfológicamente dinámicas que se producen durante el desarrollo embrionario de los animales multicelulares tales como Drosophila 1,2. Curiosamente, la evidencia emergente sugiere que este proceso está regulado a través de la interacción entre los mecanismos mecánicos y moleculares 3. Por otra parte, la transición epitelial a mesenquimal (EMT), que es un proceso crucial en la gastrulación, también está implicada en procesos de enfermedades humanas, tales como metástasis de cáncer de 4-8. Como también se conocen tal, muchos genes que controlan la constricción apical ser factores clave en la EMT observado en la metástasis del cáncer 9. Por lo tanto, la constricción apical en el momento de la gastrulación es un excelente modelo para investigar los mecanismos de regulación mencionados anteriormente y para mejorar nuestra comprensión de la metástasis del cáncer. La ventaja de esta técnica es que se puede observar el movimiento de células en el momento de la gastrulación en tiempo real y por lo tanto, estaremoscapaz de pantalla genes implicados en la gastrulación, así como la metástasis del cáncer.
Aunque relativamente desconocido, se cree que la adhesión célula a célula para jugar un papel central en la constricción apical 1. La genética de Drosophila es muy adecuado para las investigaciones nivel de células individuales que exploran los mecanismos moleculares de regulación. Este modelo nos permitirá descubrir la importancia de la constricción apical durante la gastrulación. Por otra parte, este método se puede utilizar para detectar los genes implicados en la metástasis del cáncer. La captura de imágenes en directo de Drosophila gastrulación nos ha permitido además a entender con mayor detalle los mecanismos moleculares que regulan el reordenamiento de los tejidos. En este documento, se proporciona una descripción completa de un método simple para lograrlo.
Protocol
Representative Results
Discussion
Although we have previously reported a similar procedure to capture live images of the gastrulation process in Drosophilla1, the method we describe here is detailed and easy to trace endogenous cadherin expression and thus is quite useful for genetic screening of key factors involved in gastrulation. To maximize success with this imaging procedure, it is essential to use an indented slide. Mechanical pressure sometimes causes embryonic death. Therefore, it is also important to handle the embryos as ge…
Açıklamalar
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
This study was supported by the Astellas Foundation for Research on Metabolic Disorders (HT), Takeda Science Foundation (HT), and MEXT-Supported Program for the Strategic Research Foundation at Private Universities (HT).
Materials
| Halocarbon oil 700 | Sigma | MKBH 5726 | |
| Vacuum grease Silicone | Beckman | 335148 | |
| Glass coverslip | Matsunami glass | Thickness No1 | 24-36mm |
| Embryo stariner | Corning | Corning3477 | |
| Plastic Drosophilla Stock Bottles | Hitec | MKC-100 | |
| DE-Cadherin knock-in flies | REF (10) |
Referanslar
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