Heterotópico Renal autotransplante em um modelo suíno: Um Protocolo Passo-a-Passo

Todos os animais receberam cuidados humanos e todos os estudos que efectuados em conformidade com as políticas e diretrizes do Canadian Council on Animal Care. Todos os procedimentos foram realizados sob o uso de animais protocolos que foram aprovadas pelo Comité de Cuidados University Health Network Institucional Animal. Nota: Uma vista geral esquemática do protocolo de estudo é apresentado na Figura 1. Figura 1. Protocolo do estudo. Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura. 1. Os animais Use masculinos porcos Yorkshire (30 kg) neste protocolo. 2. Kidney Graft Retrieval Procedimento pré-operatório Casa do Yorkshir masculinoe porcos em uma instalação de pesquisa para pelo menos uma semana para aclimatar-los. Use injecção intramuscular de uma cefalosporina de terceira geração, tais como ceftiofur, durante 3 dias para reduzir o risco de infecções com Streptococcus suis e Salmonella. Jejuar os porcos para um mínimo de 6 horas antes da indução anestésica para prevenir a aspiração. Iniciar a anestesia do porco por uma injecção intramuscular de cetamina (20 mg / kg), atropina (0,04 mg / kg) e midazolam (0,3 mg / kg). Posteriormente, o transporte do animal a partir da instalação de alojamento para a sala de cirurgia (OR). Coloque o porco em decúbito dorsal sobre a mesa da OR. Permitir que o porco para respirar 2 L de oxigênio com 5% de isoflurano espontaneamente. Expor as cordas vocais com um laringoscópio e pulverizá-los com solução tópica de lidocaína a 2% para evitar laringoespasmo induzida por intubação. Depois de intubação com um tubo de 6,5 milímetros, bloquear a braçadeira com 3-5 ml de ar. Nota: capnometria confirma a positio corretan do tubo traqueal. Diminuir o gás isoflurano a 2,5%. Definir o ventilador para 14-16 respirações / min e o volume corrente de 10-15 ml / kg de peso corporal. Monitorar o porco perto. A frequência cardíaca e saturação de oxigênio são registradas por oximetria de pulso. Confirmar anesthetization adequada, frequência cardíaca reduzida (abaixo de 150 batimentos / min) e pressão arterial (sistólica abaixo dos valores de 100 mmHg), bem como ausência de movimentos de suíno (sem o uso de relaxantes musculares). Sob condições estéreis, introduzir um 9.5 Fr. lúmen único cateter permanente na veia jugular interna utilizando a técnica de Seldinger 27. Resumidamente, utilizam uma agulha para perfurar a veia. Após a introdução do fio-guia, substituir a agulha com o introdutor peel-away, seguido por substituição do fio com o cateter vascular. Fixar o cateter à pele utilizando uma sutura de seda 3-0 ou monofilamento não absorvível. Administrar 500 mg de metronidazole, 1 g de cefazolina, e 20 mg de pantoprazole. de Anúnciosministra 200 ml de solução de Ringer com lactato com dextrose a 5% (D5W) e 1 mL de citrato de fentanil por via intravenosa por hora durante toda a cirurgia. Aplicar pomada oftálmica veterinária nos olhos para evitar a secura e sob anestesia. Procedimento cirúrgico Seguindo a desinfecção e cobertura do campo cirúrgico estéril, faça uma incisão na linha média de 25 cm de comprimento. Insira um afastador. Cubra intestinos pequenos e grandes com uma toalha e colocá-los para o lado esquerdo para acesso ideal ao rim direito. Livre o ureter e do próprio rim direito a partir de qualquer tecido aderente utilizando o cautério. Dissecar a veia renal direita e artéria utilizando o cautério até a sua origem a partir da veia cava inferior e aorta, respectivamente, são livres. Para evitar o espasmo vascular arterial, administração de 30-65 mg de papaverina deve ser considerada. Após a dissecção completa renal, laço (seda, 3-0) e cortar o ureter distalmente. preparea bacia de gelo e um saco órgão estéril. Em primeiro lugar, fixar a artéria renal perto da aorta e, segundo, fixar a veia renal perto da veia cava usando braçadeiras dos vasos. Em seguida, ressecção do enxerto renal e imediatamente canular a artéria renal com uma cânula na artéria renal. Use 500 ml de solução gelada histidina-triptofano-cetoglutarato (HTK) para lavar o sangue. Armazenar o rim no gelo até o transplante. In situ, fechar a artéria renal restante com uma ligadura (seda, 2-0) ea veia renal com uma sutura em execução (prolene, 6-0). Depois de verificar a área dissecados para sangramento, fechar a parede abdominal com uma sutura de correr (monofios, 1) e a pele com seda 3-0 ou um fio de sutura de monofilamento não absorvível .. Procedimento pós-operatória Fixar a via subcutânea cateter venoso com uma sutura (seda, 3-0) e do túnel para as costas do porco para evitar a manipulação indesejada. Depois de colocar o porco propenso, suture (seda, 3-0) o cateter firmemente à pele. Desmamar o porco do ventilador e deixá-lo recuperar em sua área de habitação após a extubação. Administrar Ringer lactato por via intravenosa para a expansão do volume e administrar 0,3 mg de buprenorfina para analgesia. Não deixe um animal sem supervisão até que tenha recuperado a consciência suficiente para manter decúbito esternal. 3. Kidney Graft Transplantation Procedimento pré-operatório Anestesiar o porco usando injecção intravenosa de propofol (1-2 mg / kg de peso corporal) seguida de uma infusão contínua de propofol a uma taxa de 50-100 mg / h. Re-entubar o porco como descrito no passo 2.1.3 e 2.1.4 e definir o gás isofluorano a 3-4%. Administrar 1 g de cefazolina e 20 mg de pantoprazol iv Durante a cirurgia, usar o mesmo protocolo anestésico, conforme descrito no 2.1.4. Seguindo a desinfecção esterilizado, fazer um corte de 4 cm ao lado da traquéia. Dissecar a tissue para expor a artéria carótida. Passe uma pinça over-Holt e uma gravata de seda (2-0) em torno da artéria. Usar a técnica de Seldinger para introduzir um cateter de plástico para medir continuamente a pressão arterial durante toda a cirurgia. Alternativamente, técnicas de medição de pressão arterial não invasivos podem ser utilizados. Procedimento cirúrgico Após desinfecção estéril, reabrir a cavidade abdominal através do corte dos pontos de malha da pele e fáscia suturas, reintroduzir o afastador cirúrgico para expor a cavidade abdominal, e reposicionar o intestino para o lado esquerdo para permitir um melhor acesso aos vasos infra. Transplante de ponta para o lado do enxerto renal preservada para a veia cava infra-renal e aorta. Portanto, dissecar veia cava e aorta ao longo 5-8 cm acima da bifurcação ilíaca utilizando captadores e cauterização. Se possível, não perturbe os vasos linfáticos; se não for possível, feche-os com 5-0 prolene. Depois de completar a dissecção, verifique for sangramento e remover o tecido restante dos vasos. Certifique-se de que completa de aperto da veia cava e na aorta com uma braçadeira Satinsky é viável. Em seguida, ressecar o rim contralateral (esquerda). Para isso, posicionar o intestino para a direita; dissecar o ureter, a própria renal, veia renal, artéria renal e a partir de tecido aderente. Amarrar as embarcações ureter e sangue e ressecção do rim. Verifique se há sangramento. Reposicionar o intestino para a esquerda para expor a aorta infra-renal e veia cava. Injectar heparina (100 IU / kg de peso corporal) e aguardar durante pelo menos 2 min. Anastomose venosa: Utilize uma braçadeira para fixar Satinsky completamente a veia cava e fazer uma incisão fenda que corresponde ao tamanho da abertura da veia renal, utilizando uma lâmina 11. tesouras Pott pode ser usado para ampliar ainda mais a fenda. Após envolvendo o rim em um pano contendo gelo estéril, retire-a do gelo e posicioná-lo para o campo cirúrgico. Use dois double-armado 6-0prolene suturas para realizar um cranial e um ponto de canto caudal. Aproximar o rim, amarrar o canto superior e realizar uma sutura running usando 6-0 prolene, começando com a parede traseira. Depois de ter terminado 03/02, utilizar a outra extremidade do laço para completar o fio de sutura no lado da frente. Depois de amarrar os pontos cranianos, amarre os pontos no canto caudal. Posicionar uma braçadeira bulldog na veia renal e abra a braçadeira Satinsky. Verifique a anastomose para o sangramento. Anastomose arterial: Use o Satinsky apertar novamente para fixar completamente a aorta. Usar uma lâmina 11 para fazer uma incisão de fenda, correspondentes a abertura da artéria renal. Use um soco rodada 4,0 mm, para fixar uma abertura limpa. Use um 6-0 prolene para realizar a anastomose arterial, começando no lado do destinatário. Certifique-se de que o endotélio arterial é incluído em cada sutura para evitar uma dissecção. Enquanto isso, iniciar um gotejamento contínuo de 10 ml norepinephrINE (16 mg / 250 ml) diluída em 500 ml de lactato de Ringer e titulação para manter a pressão acima de 100 mmHg sistólica. Injectar verapamil intra-arterial antes da conclusão da anastomose arterial e administrar topicamente papaverina para o exterior do vaso para impedir que o vasoespasmo. Posicionar uma braçadeira bulldog na artéria renal e abra o grampo Satinksy. Verifique as anastomoses para o sangramento. Desmontar o rim a partir do pano e remover o gelo. Abrir o grampo buldogue venosa em primeiro lugar, seguido pela braçadeira buldogue arterial. Após a reperfusão, a produção de urina deve começar imediatamente. Use um pano para garantir uma posição favorável para o enxerto transplantado e manter um reperfusão homogênea. Ureteral Anastomose: Utilize uma tesoura para abrir a Pott ureter do enxerto e do receptor ao longo de um comprimento longitudinal de 0,5 cm. Use duas 6.0 poliéster, poli (p-dioxanona) fios de sutura para a ure lado-a-ladoanastomose teral. Executar uma Stich canto em cada um dos lados, em seguida, executar a parede traseira de uma maneira contínua em primeiro lugar, seguido pela parede frontal. Após a verificação de sangramento, remova o pano e enrole alguns do intestino delgado ao redor do rim para segurá-la na posição. Fechar a parede abdominal com dois monofios 1 suturas. Feche a pele com seda 3-0 ou sutura de monofilamento não absorvível. Manter a pressão sistólica acima de 100 mmHg continuamente titulando cuidadosamente a infusão de norepinefrina até o porco foi colocado em decúbito ventral. Procedimento pós-operatória Após o fechamento abdominal como mencionado acima, mantenha o porco aquecer usando uma almofada de aquecimento e cobertor de circulação de calor. Remova a linha arterial, fechar o buraco punção na artéria com um prolene stich 6-0 e fechar o local da incisão. Vire o porco na posição prona, parar o gotejamento norepinefrina e desmamar o porco do ventilador. albaixo o porco para recuperar em sua área de habitação e monitorá-lo de perto para garantir sua recuperação suave do procedimento. Recolher amostras de gases de sangue a cada hora através do cateter jugular implantado. Fornecer Ringer lactato ao volume substituto e administrar 0,3 mg de buprenorfina para analgesia. Após extubação, monitorar o porco de perto até que ele é capaz de beber espontaneamente. Não deixe um animal sem supervisão até que tenha recuperado a consciência suficiente para manter decúbito esternal. Não devolva um animal que foi submetido a uma cirurgia para a companhia de outros animais até que esteja totalmente recuperado. 4. pós-cirúrgica Follow Up Administrar 0,3 mg de buprenorfina iv todas as 8 horas durante pelo menos 2 dias após a cirurgia ou mais longo, se necessário. Rotineiramente administrar uma única dose profiláctica de antibióticos durante a cirurgia. No caso de sinais de infecção, administrar cefazolina 1 g duas vezes por dia IV e metronidazol iv uma vez por dia atémelhoria clínica ocorre. Administrar Ringer lactato até o porco bebe água suficiente. 1000 UI de heparina pode ser utilizada para bloquear o cateter para prevenir a coagulação. Recolher amostras de sangue venoso através do cateter jugular e amostras de urina para avaliar a condição clínica do porco e da função renal. Para a eutanásia, induzir a anestesia do porco com iv propofol (5-10 ml) e mantê-lo com isoflurano 5%. Entubar o porco como descrito acima. Após relaparatomy e coleta de amostra de tecido renal, induzir a parada cardíaca por injecção intravenosa de 40 Mval KCl.