ブタモデルにおける異自家腎移植：ステップバイステップのプロトコル

すべての動物は、人道的なケアを受け、すべての研究私たちは動物管理上のカナダの評議会の方針やガイドラインに従って行います。すべての手順は、大学健康ネットワーク施設内動物管理委員会によって承認された動物の使用プロトコル下で行いました。 注：試験プロトコールの概略を図1に示されています。 図1.研究プロトコル。 この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。 1.動物このプロトコルで男性のヨークシャーブタ（30キロ）を使用します。 2.腎移植検索術前の手順ハウスオスYorkshirそれらを慣らすために、少なくとも1週間のための研究施設での電子豚。 ストレプトコッカス・スイス（Streptococcus suis）やサルモネラ菌による感染の潜在的なリスクを軽減するために3日間、このようなセフチオフルとして、第三世代セファロスポリンの筋肉内注射を使用してください。誤嚥を防ぐために麻酔の導入前に、6時間の最小値のための豚を速いです。 ケタミン（20 mgの/ kg）を、アトロピン（0.04ミリグラム/キログラム）、及びミダゾラム（0.3ミリグラム/キログラム）の筋肉内注射により豚の麻酔を開始します。その後、手術室（OR）に収容施設から動物を輸送します。 ORのテーブルの上に仰臥位で豚を置きます。豚が自発的にイソフルランの5％と酸素の2 Lを呼吸することを可能にします。喉頭鏡で声帯を公開し、挿管誘発性喉頭痙攣を防ぐために2％リドカイン局所用溶液でそれらをスプレー。 6.5ミリメートル管と挿管後、空気3〜5 mlのカフをブロックします。 注：カプノメトリが正しいpositioを確認します気管チューブのn個。 2.5パーセントにイソフルランガスを減少させます。 14-16呼吸/分、10〜15ミリリットル/ kg体重一回換気量に人工呼吸器を設定します。密接に豚を監視します。心拍数および酸素飽和度は、パルスオキシメトリによって記録されます。減少した（150拍/分以下）心拍数と血圧（100 mmHgの収縮期値以下）だけでなく、ブタの動きの欠如（筋弛緩剤の無使用）によ​​り、適切な麻酔を確認してください。 無菌条件下で、9.5神父を紹介セルジンガー法27を用いて、内頸静脈へのシングルルーメン永久カテーテル。簡単に言えば、静脈を穿刺するために針を使用しています。ガイドワイヤを導入した後、血管カテーテルとワイヤの交換が続くピールアウェイイントロデューサ針を交換してください。 3-0シルクまたは非吸収性モノフィラメント縫合糸を使用して皮膚にカテーテルを修正しました。 メトロニダゾール500mgの、セファゾリンの1グラム、およびパントプラゾール20mgを投与します。広告大臣5％デキストロース（D5W）および静脈内手術を通して、毎時1ミリリットルのフェンタニルクエン酸と乳酸リンゲル液の200ミリリットル。麻酔下ながら乾燥を防ぐために、目に獣医の眼軟膏を適用します。 外科手術滅菌消毒や手術野の報道に続いて、長さ25cmの正中切開を行います。開創器を挿入します。タオルで大小の腸を覆い、右の腎臓への最適なアクセスのために左側にそれらを配置します。 焼灼を使用して、任意の付着組織から尿管と右腎自身を解放します。 下大静脈と大動脈からその起源までメスを使用して、右腎静脈と動脈を解剖、それぞれ、自由です。動脈血管攣縮を回避するために、パパベリンの30〜65 mgの投与を考慮すべきです。 完全な腎解剖、ネクタイ（シルク、3-0）の後および遠位尿管を切りました。 Prepar氷のEAボウルと滅菌オルガンバッグ。 まず、血管クランプを使用して、大静脈に近い腎静脈をクランプ、大動脈および第二の近くに腎動脈をクランプします。次に、腎臓移植片を切除し、直ちに腎動脈カニューレと腎動脈にカニューレを挿入。血液を洗い流すために氷のように冷たいヒスチジン – トリプトファン – ケトグルタル酸（HTK）溶液500mlを使用してください。移植まで氷上に腎臓を保管してください。 その場では 、結紮糸（絹、2-0）と連続縫合（プロレン、6-0）で腎静脈と残りの腎動脈を閉じます。 出血のための解剖エリアを確認した後、実行している縫合糸（モノフィラメント、1）及び3-0絹または非吸収性モノフィラメント縫合糸で皮膚と腹壁を閉じます.. 術後の手順それは、不要な操作を防止するために、豚の背中に静脈カテーテルの縫合糸（絹、3-0）を皮下トンネルを修正しました。発生しやすい豚を配置した後、Suture（シルク、3-0）皮膚にしっかりとカテーテル。 人工呼吸器から豚を離乳させると、それは抜管後の住宅地で回復しましょう​​。体積膨張のために静脈内に乳酸リンゲル液を投与し、鎮痛のために0.3 mgのブプレノルフィンを管理します。それは胸骨横臥位を維持するのに十分な意識を取り戻したまで無人の動物を放置しないでください。 3.腎移植移植術前の手順 50-100ミリグラム/時間の速度でプロポフォールの連続注入に続いて、プロポフォールの静脈内注射（1-2 mg / kg体重）を使用して豚を麻酔。ステップ2.1.3と2.1.4で説明したように豚を再挿管と3から4パーセントにイソフルランガスを設定します。 2.1.4に記載したのと同じ麻酔プロトコルを使用し、手術の間、セファゾリン1g及びパントプラゾールIV 20mgを投与します。 滅菌消毒した後、気管の横4センチメートルのカットを行います。 TIを解剖頸動脈を露出させるssue。動脈の周りにオーバーホルト鉗子や絹のネクタイ（2-0）を渡します。継続的に手術全体の動脈圧を測定するためにプラスチック製のカテーテルを導入するためにセルジンガー法を使用してください。あるいは、非侵襲的な血圧測定技術を利用することができます。 外科手術滅菌消毒した後、皮膚および筋膜縫合糸のステッチを切断することにより腹腔を再度開き、腹腔を露出させ、そして腎臓下の血管へのより良いアクセスを許可するように左側に腸を再配置する手術用開創を再導入。 腎臓下の大静脈と大動脈に保存腎移植端側を移植。したがって、5-8以上のcmのピックアップや焼灼を使用して、腸骨分岐の上大静脈と大動脈を解剖。可能な場合は、リンパ管を邪魔しません。可能でない場合は、5-0プロレン縫合糸でそれらを閉じます。 解剖を完了した後、foをチェック出血Rおよび血管から残りの組織を除去します。 Satinskyクランプと大静脈と大動脈の完全なクランプが実現可能であることを確認してください。 次に、対側（左）の腎臓を切除。これを行うには、右に腸を配置。尿管、腎臓自体、腎静脈、および付着組織から腎動脈を解剖。尿管や血管を結ぶと腎臓を切除。出血を確認してください。 腎臓下の大動脈と大静脈を露出するために左に腸を再配置します。ヘパリン（100 IU / kg体重）を注入し、少なくとも2分間待ちます。 静脈吻合： 完全に大静脈をクランプし、11ブレードを用いて、腎静脈の開口部の大きさに一致するスリット切開を作るためにSatinskyクランプを使用してください。ポットのはさみは、さらにスリットを拡張するために使用することができます。 無菌の氷を含ませた布に腎臓をラッピングした後、氷からそれを削除し、手術野にそれを配置します。 2重武装6-0を使用します頭蓋と尾コーナーステッチを実行するためのプロレン縫合糸。 腎臓を近似、上部コーナーを結ぶと6-0プロレンを使用して、実行中の縫合を行い、後壁から始まります。 2/3を終えた後、前方側に縫合糸を完了するために、タイのもう一方の端を使用します。頭蓋ステッチを結ぶ後、尾コーナーで縫い目を結びます。 腎静脈上のブルドッグクランプを置き、Satinskyクランプを開きます。出血のための吻合を確認してください。 動脈吻合： Satinskyが完全に大動脈をクランプするために、再度クランプを使用します。腎動脈の開口部に一致する、スリットの切開を作るために11ブレードを使用してください。きれいな開口部を確保するために4.0ミリメートルラウンドパンチを使用してください。 受信者側で開始する、動脈吻合を実行するために、1つ6-0プロレン縫合糸を使用してください。動脈内皮は解剖を防止するために、各縫合糸に含まれていることを確認してください。一方、norepinephr 10ミリリットルの持続点滴を開始INE（16ミリグラム/ 250ミリリットル）は乳酸リンゲル液500mlに希釈し、100 mmHgの上記の収縮期血圧を維持するために滴定します。 動脈吻合が完了する前に、ベラパミル動脈内に注入し、血管攣縮を防止するために、容器の外側に局所パパベリンを投与します。 腎動脈上のブルドッグクランプを置き、Satinksyクランプを開きます。出血のための吻合を確認してください。 布から腎臓のラップを解除し、氷を取り除きます。動脈ブルドッグクランプ続いて、最初の静脈ブルドッグクランプを開きます。再灌流後、尿産生はすぐに開始する必要があります。 移植移植のための有利な位置を確保し、均質な再灌流を維持するために布を使用してください。 尿管吻合： 移植片から尿管および0.5センチ縦の長さにわたって受信者を開くには、ポットのはさみを使用してください。 横方向のUREのための2つの6.0のポリエステル、ポリ（p-ジオキサノン）縫合糸を使用してくださいテラル吻合。前壁に続いて、最初に連続的に後ろの壁を実行し、各側のコーナーシュティッヒを実行します。 出血を確認した後、布を取り外し、位置に保持するために腎臓の周りに小腸の一部を包みます。 2モノフィラメント1縫合糸で腹壁を閉じます。 3-0シルクまたは非吸収性モノフィラメント縫合糸で皮膚を閉じます。 豚が発生しやすい位置に配置されたまで慎重にノルエピネフリンの注入を滴定することによって連続的に100 mmHgの上記の収縮期血圧を維持します。 術後の手順前述したように腹部の閉鎖後、豚加熱パッドと熱循環毛布を使用して温めておきます。 、動脈ラインを取り外し6-0プロレンシュティッヒと動脈に穿刺孔を閉じ、切開部位を閉じます。 、腹臥位に豚を回しノルエピネフリン点滴を停止し、人工呼吸器から豚を離乳させます。アル手順からのスムーズな回復を確実にするために、その住宅地に回復し、密接にそれを監視する低豚。移植された頸静脈カテーテルを介して血液ガスサンプルを各時間を取ります。代替ボリュームに乳酸リンゲル液を提供し、鎮痛のために0.3 mgのブプレノルフィンを投与します。 自然に飲むことができるようになるまで抜管後、密接に豚を監視します。それは胸骨横臥位を維持するのに十分な意識を取り戻したまで無人の動物を放置しないでください。完全に回復するまで、他の動物の会社に手術を受けた動物を返さないでください。 4.術後フォローアップ必要に応じて、少なくとも2日後に手術以上0.3ミリグラムのブプレノルフィン静脈ごとに8時間を管理します。日常的に手術中に抗生物質の単予防的用量を投与。感染の徴候が発生した場合、1日に1回、昼とメトロニダゾールIV二回までセファゾリン1グラムIVを管理します臨床症状の改善が発生します。豚は十分な水を飲むまで、乳酸リンゲルを管理します。千IUヘパリンは、凝固を防ぐために、カテーテルをロックするために使用することができます。 豚の臨床症状や腎機能を評価するために頸静脈カテーテルと尿のサンプルを介して、静脈血サンプルを採取します。 安楽死のために、プロポフォール静脈（5〜10 ml）で豚の麻酔を誘導し、イソフルラン5％でそれを維持します。上記のように豚を挿管。 relaparatomyおよび腎組織サンプル採取後、40 mvalのKClの静脈内注射により心停止を引き起こします。