تعظيم الاستفادة من الفحص الجرح خدش للكشف عن تغيرات في الفئران الوسيطة اللحمية الهجرة الخلية بعد الأضرار التي كتبها القابلة للذوبان استخراج دخان السجائر

الهجرة الخلية منسقة للغاية وحيوية لكثير من العمليات الفسيولوجية مثل تطوير الأنسجة، وإصلاح، وتجديد، وكذلك العمليات المرضية مثل ورم خبيث من السرطان وتصلب الشرايين ^1. فهم هجرة الخلايا أهمية خاصة بالنسبة إلى العلاجات الناشئة تستخدم لإصلاح الأنسجة التالفة وعلاج الحالات المرضية، بما في ذلك تكنولوجيات زرع الخلايا والأنسجة الاصطناعية التطعيم ^2. ونظرا للاهتمام الحالية في دور الخلايا اللحمية الوسيطة (اللجان الدائمة) في التوسط في إصلاح الأنسجة ^3، قياس القدرة المهاجرة من هذه الخلايا باستخدام الفحص التي هي قابلة للقياس بدقة، قابلة للتكيف، وفعالة من حيث التكلفة والفائدة. الأهم من ذلك، يجب أن يكون مثل هذا الفحص حساس بما فيه الكفاية للكشف عن التغييرات الطفيفة نسبيا في قدرة المهاجرة الخلوية بعد الضرر. الأساليب الحالية لقياس الهجرة الخلية، بما في ذلك فحوصات الصفر، المقايسات الهجرة غير المشبعة جيدا (بويدن الفصلالكهرمانات)، صفائف micropillar، والمقايسات منطقة الحظر الخلية تمتلك مجموعة من القيود في التكاثر، والتفصيل، الكمي، وفعالية التكاليف ^1،4،5. مقايسة الصفر الأمثل الموصوفة هنا يوضح نتائج قوية، وقدرات التحليل قابلة للقياس الكمي والصورة القائمة، وفعالية التكاليف، والقدرة على التكيف مع تطبيقات أخرى.

وقد استخدمت المقايسات الصفر في قدرات متعددة لتقييم هجرة الخلايا وانتشارها في ظل ظروف تجريبية مختلفة ^5. الفحص يستلزم بذر خلايا معينة، وتزايد لهم لإكمال أو التقاء القريب، وخدش أحادي الطبقة الناتجة بإبرة معقمة أو طرف الماصة ^6. يتم إجراء تحليل الأكثر شيوعا بمقارنة عرض الصفر على نقاط زمنية متعددة في مواقع مختارة عشوائيا ^7-9. على الرغم من استخدامه بارز، هو مرتبك فحص الصفر التي كتبها القضايا مع استنساخ النوعي والكمي. التباين فيجيل من الصفر لا يغير فقط المكروية من الخلايا، ولكن يمكن أيضا أن تعيق الهجرة الخلية عن طريق إتلاف سطح اللوحة والكامنة خارج الخلية مصفوفة ^5. وتجرى فحوصات في كثير من الأحيان أكثر من 7-12 ساعة، ولكن لخطوط الخلايا التي تظهر الهجرة أبطأ ومرات الفحص أطول، يصبح انتشار والخلط متغير ^7،10. وأخيرا، يمكن للخلايا هرمة الناتجة عن عملية الخدش الافراج عن العوامل التي تتداخل مع إشارات الخلية المطلوبة لسد الفجوة في أحادي الطبقة ^1. الاستفادة المثلى من مقايسة الصفر يتطلب خلق فجوة متسقة لا تتداخل مع خصائص السطح، والتقليل من فحص طول الوقت، ومنع موت الخلايا غير المرغوب فيها خلال التلاعب. مقايسة سدادة مقرها هو الأمثل لفحص منطقة الحظر الخلية. هذا الاختبار يستخدم سدادة توضع في منتصف البئر الذي يستبعد نمو الخلايا، ولكن يسمح الخلايا المراد بالذهب في جميع أنحاء منطقة الحظر المركزية.لتقييم الهجرة، تتم إزالة السدادة، ويوفر منطقة الحظر الناتجة سطح للهجرة إلى أن يحدث. ومع ذلك، هذا الاختبار الصعب تخصيص أو التكيف مع ¹⁰ وبالنسبة لبعض التطبيقات، ويمكن هذا الأسلوب أيضا أن تكلفة باهظة.

وعلى النقيض من المقايسات الصفر ومشتقاتها، المقايسات الهجرة غير المشبعة جيدا (أو بويدن المقايسات الغرفة) تقييم الهجرة عن طريق قياس عدد الخلايا التي تتحرك من غرفة واحدة، من خلال غشاء فلتر الصغيرة التي، في غرفة تحتوي على وكلاء الكيميائي ^{8،11، 12.} هذه التقنية قد فائدة محدودة لالخلايا الملتصقة مثل اللجان الدائمة ليلي الهجرة من خلال غشاء مسامي، وخلايا التمسك الجانب غشاء تتعرض لعوامل الكيميائي، ويمكن أن يكون من الصعب تحديد بدقة. في حين أن الاختبار هو قادرة على دراسة بعض أنماط الهجرة ثلاثية الأبعاد، أنواع الخلايا المقيدة التي أنها قادرة على تحديد بدقة الحد هجرة الخلايا فائدتها ¹⁰. بديل آخر لفحوصات الصفر يستخدم مجموعة الركن الصغير، والذي يقيس الحركة الخلوية من خلال الفضاء ثلاثي الأبعاد باستخدام قدرة الخلايا على تشوه وتهاجر إلى مجموعة كبديل. Polydimethlysiloxane (PDMS) اللدائن الشفاء أكثر من العفن دقيقة وتعامل مع الأوزون وفبرونيكتين تنتج المكروية متجانسة وغير القابلة للتحلل. ويمكن أيضا أن تختلف تباعد الصغرى دعامة حسب الحاجة لقياس قدرة الخلايا على دخول مجموعة ^4. يتم إنشاء قالب من خلال الحفر العميق أيون رد الفعل من رقائق السيليكون لإنشاء نسخة السلبي لارتفاع تبلغ نسبة أبعادها مجموعة ^13. بينما يتعزز فحص من قبل التفصيل في، والقدرة على تصميم نموذج الهجرة ثلاثية الأبعاد، وتحليل من خلال رؤية مباشرة من الخلايا المهاجرة، وصعوبة في خلق المصفوفات الدقيقة عمود تعوق اقتصاديا استخدامه على نطاق واسع.

مقايسة الصفر الأمثل الموصوفة في هذا البروتوكول يوفر كفاءة، كوسفعالية تي طريقة لإنتاج الخدوش تتفق التي يمكن تحليلها باستخدام البرمجيات المتاحة بحرية. بدلا من قياسات عرض بسيطة مصنوعة عبر نقطة الصفر قبل وبعد الهجرة الخلية، والبرنامج يتيح للمستخدم تحديد مجموع المساحات الصفر قبل وبعد الهجرة. هذا التقدم يحد من قضية محاولة لتحديد مكان نقطة الصفر ينبغي أن تؤخذ القياسات العرض، وإذا كان العرض من نقطة الصفر موحد على طول طول انها. بالإضافة إلى ذلك، ناقش الأمثل دقيق لأعداد الخلايا، التقاء الخلية ونوع ودرجة الأضرار التي لحقت الخلايا من أجل زيادة الاستخدام الأمثل للفحص.