Au cours de la mouche des fruits combats, les comportements observés, combattre la dynamique, et l'apprentissage et la mémoire associée sont influencés par les conditions expérimentales. Le protocole présenté ici décrit une nouvelle procédure qui élimine entièrement la manipulation des mouches pendant les expériences. Cela améliore la dynamique de combat et permet la formation d'effets de «perdant» forts.
Le comportement agressif chez Drosophila melanogaster est composé de l'expression séquentielle des comportements stéréotypés (par analyse, voir 1). Ce comportement complexe est influencée par des facteurs génétiques, hormonaux et environnementaux. Comme dans de nombreux organismes, l'expérience de précédents combats influe sur la stratégie de lutte contre les mouches et les résultats des concours ultérieurs: perdre un combat augmente la probabilité de perdre des concours plus tard, révélant des effets de «perdant» qui impliquent probablement apprentissage et la mémoire 2-4. L'apprentissage et la mémoire qui accompagne l'expression de comportements sociaux complexes tels que l'agression, est sensible à la pré-test de la manipulation des animaux 5,6. De nombreux protocoles expérimentaux sont utilisés dans différents laboratoires pour étudier agression 7-9, cependant, pas systématiquement protocole utilisé qui exclut la manutention de vol est actuellement disponible. Nous rapportons ici un nouvel appareil de comportement qui élimine la manipulation de mouches, en utilisant instead leurs réponses négatives geotactic innées de déplacer les animaux dans ou hors des chambres de combat. Dans ce protocole, les petites arènes de combat circulaires contenant une tasse de nourriture sont divisés en deux moitiés égales par une coulisse amovible en matière plastique avant l'introduction des mouches. Les mouches entrent chambres de leurs flacons d'isolement de la maison via des portes coulissantes de chambre et géotaxie. Lors de l'enlèvement de curseurs en plastique, les mouches sont libres d'interagir. Après des périodes déterminées, les mouches sont de nouveau séparés par curseurs pour l'expérimentation ultérieure. Tout cela se fait facilement, sans manipulation de mouches individuelles. Cet appareil offre une nouvelle approche pour étudier l'agression et l'apprentissage et la mémoire associée, y compris la formation d'effets de «perdant» dans les combats de la mouche. En outre, ce nouvel appareil de comportement d'usage général peut être utilisé pour étudier d'autres comportements sociaux des mouches et devrait, en général, être d'intérêt pour l'étude des changements liés à l'expérience dans les processus comportementaux fondamentaux.
Agression dans les systèmes d'animaux est fortement associée à l'acquisition et la détention de ressources telles que la nourriture, le territoire et compagnons. Compte tenu du rôle important que joue dans l'aptitude des individus, il est surprenant que l'agression ne a évolué à travers le règne animal. Comme un trait adaptatif qui bénéficie directement des individus, une forte composante d'apprentissage et la mémoire est associée à l'agression. En concurrence pour le rang social, l'expérience de combat précédent influence le résultat de concours ultérieurs. En général, l'expérience augmente perdantes antérieures, et l'expérience gagnante diminue, la probabilité de perdre concours ultérieurs (appelés «perdant» et les effets «gagnants»). Effets "Loser" ont été observés dans un large éventail d'espèces, et certains rapports suggèrent que ceux-ci peuvent durer plusieurs jours tandis que les effets «gagnants» sont généralement de plus courte durée 2,10,11.
Le premier rapport du comportement agressifdans les mouches des fruits (D. ampelophila) était par Sturtevant en 1915 dans un document concerné avec la reconnaissance du sexe et de la sélection du sexe 12. Un demi-siècle plus tard, des examens plus complets de fruits Male volez agression ont été faites, qui décrit la plupart des comportements observés lors des combats de mouches des fruits. Ces expériences ont été principalement effectués dans de petits groupes de mouches mâles et femelles observées au cours heures 13-15. Récemment, avec l'ajout d'outils génétiques puissants, dyadiques simples configurations de combat du sexe et des temps plus courts de l'observation, D. melanogaster est apparue comme un important système modèle pour l'étude de la biologie de l'agression 1,16. Analyse des combats entre les mêmes paires de sexe de mouches mâles et femelles a démontré que l'agression implique comportements stéréotypés que la transition de l'un à l'autre d'une manière statistiquement fiable 1,17. Certains des modèles comportementaux observés sont spécifiques sexe tandis que d'autres sont observés dans la luttes dans les deux sexes. Combats masculins vont à des niveaux d'intensité plus élevés que les combats féminins et entraîner la formation de relations de dominance avec les «gagnants» et «perdants clairs". À l'heure actuelle, de nombreux laboratoires ont commencé à enquêter sur l'biochimique 18, neuronal 7,19-21, et génétiques 22 fondements d'agression. Malheureusement, une méta-analyse des études pour mieux comprendre la dynamique du combat et de la formation et le maintien des relations de dominance est problématique en raison de l'utilisation d'une multiplicité de procédures expérimentales dans des laboratoires différents. Essentiellement toutes les techniques décrites dans la littérature impliquent la manipulation et la manipulation des mouches pour les introduire dans les arènes 19,23,24 et pendant l'expérience comportementale 3,4 pour transférer les mouches des arènes. Aspiration douce est la façon la plus courante de manipuler les mouches 3,4,23-25, mais froides ou CO 2 anesthésie sont également utilisés 9,26, même si previous études ont déjà rapporté que ces procédures ont des effets délétères sur le comportement à la mouche 27,28. Une période d'au moins 24 heures est recommandée après l'utilisation de tous les anesthésiques pour minimiser leurs effets sur le comportement 29,30.
Mouches apprendre de l'expérience de combat précédent et modifier leur utilisation du modèle de comportement dans des situations nouvelles, ce qui suggère que l'apprentissage et la mémoire accompagnent et sont des conséquences de rencontres agonistes. En ce sens, volent combats ressemblent à des situations d'apprentissage de conditionnement opérant dans laquelle vole apprendre qu'une stratégie a fonctionné et ensuite l'utiliser de plus en plus souvent lors de rencontres ultérieures. Les mouches changent leurs stratégies de lutte après des relations de dominance ont été établis pendant les combats, avec des gagnants se fend plus en plus et les perdants de moins en moins. Après une période de séparation, les perdants précédents montrent un comportement beaucoup plus soumis et sont très susceptibles de perdre 2 ème combat lorsque jumelé avec fl naïves ou les précédents lauréats 3,4. Cependant, l'absence d'une procédure expérimentale qui exclut la manipulation des mouches a fait des études détaillées des effets de «perdant» difficiles. Dans une étude récente, nous avons comparé deux procédures expérimentales utilisées en routine dans les laboratoires (aspiration et froid anesthésie) à introduire des mouches dans les chambres de comportement à la nouvelle procédure qui élimine la manipulation. Les résultats ont montré que l'anesthésie froid avait beaucoup plus des effets négatifs sur l'agression de l'aspiration, mais même aspiration réduit le niveau d'agressivité par les mouches. Aspiration n'a, toutefois, causer des effets très importants sur l'apprentissage et la mémoire qui accompagnent l'agression. Après protocole identique avec deux procédures expérimentales (d'aspiration et aucune manipulation), un effet robuste "perdant" n'a été observée lorsque le traitement des mouches a été éliminé de la procédure expérimentale 5,6.
Idéalement, les études de la drosophile à l'agression labotoires devraient inclure des situations environnementales qui vole normalement rencontrent dans la nature (compétition pour les ressources, pour défendre le territoire et l'espace pour échapper). En outre, les conditions expérimentales devraient être optimisés pour induire de manière fiable, observer et interpréter le comportement en cours d'examen (tentent de minimiser la manipulation des animaux, de limiter l'utilisation du CO 2 comme anesthésique, et de normaliser les procédures expérimentales). En tentant de répondre à la plupart ou la totalité de ces questions, nous avons conçu un nouvel appareil de comportement qui élimine la manipulation de mouches avant, pendant et après les initiant aux arènes de comportement. Avec ces appareils, les mouches utilisent leurs géotaxie négatifs innées à être déplacés et transférés dans et hors des chambres de combat. En éliminant la manipulation de mouches, le protocole vise à: (a) réduire la variabilité de comportement chez les individus; (b) réduire le temps nécessaire pour les mouches d'interagir et de générer des rapports de dominance claires (mâles); et (c) induisent fiable assez forte behavioRAL changements pour permettre la formation d'effets de «perdant».
Ce protocole décrit un nouvel appareil expérimental et une procédure étape par étape pour analyser l'agression et à permettre la formation d'un fort effet "perdant" dans D. melanogaster. Nous nous attendons à ce que cet appareil comportementale peut être facilement adapté pour l'étude d'autres comportements sociaux présentés par les mouches des fruits.
L'ère moderne de l'utilisation de la drosophile avec ses méthodes génétiques puissants comme un organisme modèle pour l'étude de l'agression a commencé il ya environ une dizaine d'années avec l'introduction de nouvelles arènes expérimentales dans lesquelles le comportement de combat fiable n'a pu être obtenu avec des paires simples de mouches 1,7, 8,17,19. Ces arènes inclus ressources souhaitées (une tasse de nourriture, des partenaires potentiels) et un espac…
The authors have nothing to disclose.
Cette recherche a été soutenue par des subventions de l'Institut national des sciences médicales générales (GM099883 et GM074675) à EAK Les bailleurs de fonds ne jouaient aucun rôle dans la conception de l'étude, la collecte et l'analyse des données, la décision de publier, ou de la préparation du manuscrit. Nous remercions les gens de notre magasin de la machine à la Harvard Medical School pour la conception de l'appareil comportementale (contact: http://mikesmachine.com).
Contributions Auteur: ST, BC conçus l'appareil comportementale. ST conçue et optimisée du protocole expérimental. ST et BC réalisées et analysées les expériences. ST, EAK et BC a écrit le papier.
Drosophila melanogaster pupa | Bloomington Stock Center | ||
Standard fly food | Fabricated in-house. | ||
Behavioral chambers | Mike machine | Fabricated in-house. Directly contact the compagny for more informations. | |
Borosilicate glass vials | VWR International | 47729-576 | 16 x 10 mm |
Cotton | Fisherbrand | 22-456-881 | Any brand can be used |
Pasteur pipettes | VWR International | 53300-567 | |
Paintbrush | Blick Art Material | 06157-7030 | Round , Size 3/0 |
Toothpick | N/A | N/A | Any brand can be used |
Acrylic paint (blue/white) | Blick Art Material | 01637-5172/01637-1022 | Any brand can be used |
Dry active yeast | Sigma | YSC2-500G | |
Srew cap tube | VWR International | 10011-394 | 15 mm diameter, 10 mm height |
Eppendorf | VWR International | 22363212 | |
Tape | N/A | N/A | Any brand can be used |
Plastic slices | Electron Microscopy Sciences | 70329-40 | 22 x 40 x 0.25 mm Thickness |
Light source (bulb) | VWR International | 500003-418 | Any brand can be used |
Timer | VWR International | 62344-641 | Any brand can be used |
Incubator | Percival | Directly contact the constructor for more informations. | |
Carbon Dioxide Dry (CO2) | Medical-Technical Gases, Inc | 14H31 | |
Binocular | Nikon | SMZ-745 | Any brand can be used |
Camera (SONY Handycam HDR-CX330) | B&H | SOHDRCX330B | Any brand can be used |
Computer | With a minimum of 1.4 Ghz Processor, running Microsoft Windows or Machintosh HD | ||
ClipWrap | Download online | Any importing software can be used | |
QuickTime Player | Download online | Any reading software can be used | |
GraphPad Software | Online | Any statistical software can be used |