Avaliação da migração de células endoteliais após a exposição a produtos químicos tóxicos

A migração celular é importante em muitos processos fisiológicos e patológicos incluindo desenvolvimento, várias doenças, e a cicatrização de feridas após a lesão da pele.

Após lesão da pele, inflamação remove as unidades de tecido de granulação e danificados ou necróticas fechamento da ferida preliminar e permite a formação de uma rede de novos capilares através vasculogenesis (romance de formação) ou angiogênese (surgimento de vesículas existentes) ^1-3. Ambos vasculo- angiogénese e exige a migração de células endoteliais. A rede de crescimento de vasos sanguíneos é essencial para o transporte de oxigénio e nutrientes para os queratinócitos proliferam que em última análise se submetem a queratinização, formar um novo epitélio e fornecer o fechamento da ferida.

Prejudicada migração de células endoteliais é uma causa subjacente da ferida desordem ^4,5 cura. Assim, os métodos para avaliar a migração de células endoteliais iniciais são necessárias para explorar a pathophysiolgia de distúrbios da migração celular e para identificar novas estratégias para a intervenção terapêutica.

Exposição cutânea aos agentes alquilantes (por exemplo, enxofre e mostardas de azoto) provoca transtorno ⁶ ferida cura. Esses compostos foram utilizados como agentes de guerra química em vários conflitos no século 20 e permanecem motivo para grande preocupação devido à estoques existentes em regiões politicamente instáveis ​​e síntese relativamente simples. Embora mostarda de enxofre foi sintetizado pela primeira vez em 1822, a patologia molecular e clínica de exposição SM não é compreendido em pormenor e um antídoto para a exposição SM foi identificada.

Vários estudos têm sido realizados para compreender e modelar a cicatrização de feridas prejudicada após a exposição SM e para testar compostos potencialmente candidatos capazes de reservar esse efeito. Schmidt et ai (2009). Testaram o efeito de clorambucil, alquilando um composto com propriedades semelhantes a SM em mouSE modelos de corpos embrióides e encontrada uma dramática redução, por vezes mais de 99% na formação dos vasos ^7. Este efeito adverso foi mais pronunciado, numa fase de desenvolvimento que, sob condições fisiológicas, é dominada pela proliferação e migração de células precursoras endoteliais vasculares. Assim, estas células foram identificadas como sendo particularmente sensível a agentes de alquilação. Steinritz et ai (2010). Testados sequestrantes de espécies reactivas de oxigénio (ROS), nomeadamente, N-acetilcisteína (NAC) e ácido alfa-linolénico (ALA) para a sua capacidade para reduzir a toxicidade SM em modelos de ratinho embrióides corpo e, em particular, a ⁸ restaurar a formação de vasos. Foram observados efeitos de protecção temporárias, indicando que a formação de ROS excessiva era susceptível de contribuir para os efeitos adversos da SM na cicatrização de feridas. Estes efeitos não eram permanentes e os dois compostos candidatos pode não ser capaz de restabelecer a formação de vasos e a cicatrização de feridas, a longo prazo ^8. However, esses experimentos foram realizados em um complexo modelo 3D, que permitiu que a investigação de migração celular. Assim, subsequentemente testado NAC e ALA para os efeitos benéficos sobre a migração de células de CEE que têm um papel chave no processo de formação de vasos ^9.

Além disso, há evidências de que a polaridade da célula é necessária para a migração celular. Disfunção mitocondrial conduzindo a formação de ROS foi mostrado para danificar polaridade celular e pode, consequentemente, afectar adversamente a migração celular. Assim, imagens de células vivas em relação à função mitocondrial foi realizada e os efeitos de ROS sequestrantes foram examinados. O protocolo que se segue descreve os requisitos gerais de cultivo da CEE, o ensaio de câmara de Boyden, o ensaio de cicatrização de feridas, incluindo a análise de células e seguimento da utilização de TMRM para a avaliação da função mitocondrial em detalhe. Aspectos importantes de protocolos experimentais para o cultivo CEE ea migração são realçados.