Um Ensaio Behavioral Barato, escalável para medição Ethanol Sedação sensibilidade e tolerância rápida em<em> Drosophila</em

Transtorno de uso de álcool (AUD) é um enorme problema de saúde mundial (revisto em ^1). Embora os mecanismos que conduzem o desenvolvimento de R são complexas, estas perturbações têm um importante componente genético (por exemplo, ^2). O grande herdabilidade de AUD e as respostas comportamentais conservados em etanol através de muitas espécies (revisto em ^3,4) têm gerado grande interesse na utilização de organismos-modelo genéticos para investigar o envolvimento de genes específicos em comportamentos relacionados com o álcool para uma melhor compreensão das bases moleculares de AUD. A mosca da fruta, Drosophila melanogaster, surgiu como um organismo modelo de liderança para explorar mecanismos genético-moleculares de comportamentos relacionados com o etanol (revisto em ^3,4). Estudos em moscas têm destacado papel para várias vias de sinalização em respostas comportamentais ao etanol (revisto em ^5). Curiosamente, alguns dos genes e vias que influenciam respons comportamentaises para etanol em moscas também têm sido implicados em comportamentos relacionados com etanol roedores e / ou R humano (por exemplo, ^6-14). A conservação dos mecanismos de condução comportamentos relacionados com o etanol em toda a espécie, juntamente com o conjunto de ferramentas genéticas disponíveis no sistema modelo de Drosophila, ressaltam a utilidade do modelo mosca da fruta para investigar a genética de respostas comportamentais ao etanol.

Sensibilidade e tolerância ^15,16 (revisto em ¹⁷⁾ ao etanol em seres humanos está associada com o desenvolvimento de AUD. Ambas as respostas comportamentais ao etanol pode ser modelado em moscas através de uma variedade de ensaios laboratoriais (revisto em ^3,4). Todos os ensaios de mosca conhecidos para os autores são baseados quer dependente do tempo induzida pelo etanol sedação / ou descoordenação recuperação dependente do tempo a partir de etanol sedação.

Em um artigo anterior do nosso grupo sobre a genética da sensibilidade etanol e rtolerância APID em Drosophila, um ensaio comportamental, baseada em etanol sedação induzida por vapor de moscas foi utilizado ^18. Testes neste ensaio foi iniciado através da transferência de adulto vivo voa sem anestesia para esvaziar frascos alimentares, aprisionando as moscas em frascos com um tampão de acetato de celulose, adição de etanol para a parte superior (ou seja, o lado não-fly) do tampão de acetato de celulose, e selando o frasco contendo moscas, plugue de acetato de celulose e de etanol com uma rolha de silicone (ver esquema na figura S3, Referência ^18). Vários frascos que representam diferentes grupos de moscas foram avaliados em paralelo, aumenta o rendimento do presente ensaio. Os frascos foram dadas um código anônimo e experimentadores ficaram cegos para grupo de tratamento para evitar viés não intencional na avaliação da sedação. Numa experiência normal, moscas em frascos foram bate-se suavemente a intervalos de 6 min e, após uma recuperação de 30 seg, o número de moscas sedados em cada frasco foi contado e Converted para moscas por cento ativos. Moscas absorvida vapor de etanol a partir do tampão de acetato de celulose de uma maneira dependente do tempo, causando aumentos progressivos em etanol interna ¹⁸ e sedação (cf referência ¹⁸ e Figura 1A e 1B neste relatório). Sedação neste ensaio foi definida operacionalmente como moscas (i) que está na ausência de curta ou (ii) que encontra-se em suas costas com ou sem bater as asas. Aqui, este ensaio de sedação etanol é descrita em detalhe, uma maior optimização operacional relevante para usá-lo é fornecido, e o ensaio é utilizado para tratar a contribuição de opções de suplementação de alimentos sobre a sensibilidade mosca sedação.