절차 흰쥐의 파블로프 에어컨 알코올 추구 행동의 상황에 의한 갱신을 준수합니다

모든 절차는 콩 코디 아 대학에서 동물 연구 윤리위원회의 승인 및 동물 관리에 캐나다위원회의 추천과 동의합니다. 1 동물 (- 도착 240 g을 220) 남성 긴 에반스 쥐를 얻습니다. 오전 7:00 조명 12 시간 명암주기에 온도 (21 ° C)와 습도 (44 %) 제어 동물 보호 시설에서 쥐에 유지한다. 도착시 페어 – 집 쥐. 삼일 후, 개별적으로 베타 – 칩 침구, 나일론 뼈, 표준 쥐 차우와 물을 무료로 이용할 플라스틱 신발 상자 케이지의 집 쥐. 물병에 더하여, 제 병의 후속 배치를 허용하는 두 고리가 케이지 뚜껑을 사용한다. 참고 : 개별적으로 즉시이 동물 보호 시설에 도착 쥐를 수납 할 수있다. 매일 쥐를 처리하기 시작합니다. 참고 : 가이드로 취급 일주는 파이 인에게 적응 충분합니다최대 cked 및 실험자에 의해 처리. 홈 케이지에서 2 간헐적 에탄올 액세스 참고 : 홈 케이지에서 실시 간헐적 에탄올 접근을 쥐 실험의 행동 훈련 단계는 17 ~ 19을 시작하기 전에 에탄올의 생리 학적으로 관련 양을 마실 수 있도록. 이 밝거나 어두운주기 동안 언제든지 초기화 할 수 있지만, 빛 단계에서이 절차를 시작합니다. 각 쥐​​에 대한 두 병을 준비합니다. 100 ml의 플라스틱 에탄올 병 473 ㎖의 표준 플라스틱 물병으로 실린더를 졸업 사용합니다. 때문에 누설 및 증발에 에탄올의 손실을 최소화하기 위해, 거의 최대 볼륨 용량을 가득 상대적으로 작은 용량의 에탄올 병을 사용합니다. 수돗물에 95 % 에탄올을 희석하여 만든 15 % 에탄올, 한 병을 채 웁니다. NOTE : 다른 에탄올 농도, 예컨대 10 % 또는 20 %로, 15 % 에탄올 대신에 사용될 수도있다. 인터넷수돗물 제 병 것이다. 각 병에 누설을 최소화하기 위해 볼 베어링을 포함하는 sipper 튜브, 고무 마개를 삽입합니다. 제어 케이지 쥐 또는 침구 류를 포함하지 않는 제외하고 홈 케이지와 동일하게 취급이 제어 케이지를 설정합니다. 2.1.4 – 2.1.1 단계에 지정된대로 제어 케이지 에탄올과 물을 병을 준비합니다. (- 2.8.2 단계 2.8.1에 설명 된대로) 에탄올 액세스 세션의 과정을 통해 발생할 수있는 유출 및 / 또는 증발 제어하는​​ 제어 케이지에서 얻은 방법을 사용하십시오. 모든 에탄올과 물을 병의 무게를 측정. 모든 무게를 기록한다. 모든 쥐의 무게를 측정. 모든 무게를 기록한다. 에탄올 병 및 각 가정 케이지의 물 한 병을 놓고 동시에 케이지를 제어 할 수 있습니다. 24 시간 동안 케이지에 두 병을 둡니다. 24 시간주기의 끝에서, 두 병에서 제거동시에 케이지. 모든 에탄올과 물을 병의 무게를 측정. 모든 무게를 기록한다. 이를 24 시간 이전에 각 래트의 홈 케이지에 배치 될 때이 병의 중량으로부터 집 케이지로부터 분리 할 때 24 시간 동안 소비 된 양의 에탄올과 물을 결정하기 위해, 각각의 병의 중량을 뺀다. 이 제어 케이지에 대한 동일한 작업을 수행하고 각 유체에 대한 유출의 평균 금액을 계산합니다. 각 쥐​​에 해당하는 에탄올과 물 소비 측정에서 각각 에탄올과 물 유출의 평균 금액을 뺍니다. g / kg, 물의 소비 및 에탄올 선호도 에탄올 소비량을 계산하기 위해 이러한 차이 유출 제어 수단을 사용한다. 에탄올 소비량 (g / kg), 제 전체 용액 (에탄올 + 물 성분)의 농도에 기초하여 부피 (㎖) 에탄올로 소비 된 용액의 중량 (g)으로 변환을 계산하기있어서식 볼륨 (ML) = 무게 (g) / 밀도 (g / ㎖). NOTE : 용액의 에탄올 농도는 농도의 함수로서 변할 것이다. 다음으로, 소비 중량 (g) 에탄올을 수득하기 위해 사용되는 특정 비율 솔루션 스케일링 에탄올의 밀도 (g / ㎖)에 의해 소비 에탄올 용액의 양 (ml)에 곱한다. 에탄올 소비량 g / kg 측정 값을 얻기 위해 래트 체중 (kg)에 의해 소비되는 에탄올의 중량 (g)을 나눈다. 에탄올 선호도를 계산하기 위해, 전체 유체 (에탄올 + 물, ML) 흡기의 비율로 에탄올 섭취 (ml)로 표현한다. 쥐의 홈 케이지 만 다시 물병을 돌려줍니다. 다음 24 시간 동안 물에 쥐에 대한 액세스 권한을 부여하지만, 에탄올 없습니다. 대신 에탄올 병의 홈 케이지에 미리 무게 초 물병을 배치합니다. 24 시간주기의 끝에서, 동시에 케이지에서 모두 물병을 제거. 물 병의 두 세트의 무게를. 녹음 모든 웨이ghts. 이 단계 2.8.1에서 설명 된 바와 같이 제어 케이지에서 얻은 평균 유출 측정 값을 감산하는, 24 시간 이전 홈 케이지에 배치 될 때이 병의 중량으로부터 집 케이지로부터 분리 할 때 각각의 병의 중량을 빼기 – 2.8.2. 물 소비를 계산하기 위해이 유출 제어 차이 방법을 사용하십시오. 2.14 단계 2.1에 기재된 바와 같이, 래트를 에탄올과 물 병 모두를 제공하여 다시 사이클을 시작한다. 에탄올 소비의 높은 안정적인 수준을 유도하는 다수의 (약 12) 세션이주기를 반복합니다. 홈 케이지에서 에탄올 소비의 대표적인 결과 (g / kg)는 그림 1을 참조하십시오. 사이드 환경의 발달을 방지하기 위해 세션을 통해 케이지 뚜껑에 에탄올과 물을 병의 공간적 위치를 교대. 걸쳐 정확하고 안정적​​인 에탄올 농도가되도록 일주일에 한 번씩 신선한 에탄올 용액을 만들기세션. 이 방법을 사용하는 시간의 연장 기간 동안 에탄올을 증발의 영향을 최소화한다. 3 장치 통풍, 사운드 감쇠 부스 내부 하우스 각 조절 실. 각 조절 스테인레스 스틸 금속 막대 바닥의 실, 명확한 폴리 카보네이트 천장, 명확한 폴리 카보네이트 다시 벽과 현관 문, 알루미늄 금속 패널 측벽을 구축합니다. 중앙에서 오른쪽 금속 측벽의 기지 근처에 유체 포트를 설치합니다. 포트에 항목을 감지하는 적외선 광전지와 유체 포트에 입구를 착용. 뭉툭한 팁 바늘을 사용하여 에탄올을 포함하는 20 ML의 주사기에 유체 포트의 뒷면에서 폴리에틸렌 튜브를 연결합니다. 음향 감쇠 부스 밖에있는 주사기 펌프에 주사기를 놓습니다. 파블로프 차별 교육 세션의 경우, 펌프로 배치하기 전에 주사기로 에탄올을로드합니다. 프라임 튜브 나y를 수동으로 펌프를 진행하고 유체 포트에서 초과 에탄올을 닦아. 왼쪽 사이드에서 챔버의 천장 근처 중앙 흰색 houselight를 설치합니다. 식자 (2 Hz에서 사이클)와 왼쪽 사이드의 왼쪽 상단 모서리에 스피커와 화이트 노이즈 발생기를 설치합니다. 독특한 상황을 만들 시각, 후각, 촉각 자극의 특정 구성으로 각 조절 챔버 복장. 두 개의 서로 다른 문맥, 상황에 맞는 하나와 문맥이 같은 다른 절반 조절 실의 지정된 컨텍스트 일​​ 및 상황에 맞는 2 구성의 절반을 사용합니다. 페트리 접시에 검은 마분지 천장과 전면을 통해 패널과 후면 챔버의 벽 (수돗물에 희석 레몬 오일로 만든 10 % V / V) 스프레이 레몬 냄새를 배치하고 중앙에 배치, 상황에 맞는 하나를 만들려면 챔버의 바닥 아래 금속 폐기 트레이, 그리고 금속 R 위에 투명한 폴리 카보네이트 층 패널을 삽입외경 층. 흡수 종이 타월이나 벤치 라이너 폐기물 트레이 라인. 상황이를 만들려면, 그들은 분명 있도록 페트리 접시에 (수돗물 벤즈알데히드를 희석하여 만든 10 % V / V) 아몬드 냄새 스프레이 중앙 배치, 발견 챔버의 천장과 전면 및 후면 벽을두고 챔버의 바닥 아래 금속 폐기 트레이 및에 금속봉 위에 바닥 천공 금속 플로어 패널을 삽입한다. 흡수 종이 타월이나 벤치 라이너 폐기물 트레이 라인. 4 습관화 행동 훈련 방에 쥐 습관화 및 공기 챔버 내에서이 컨텍스트의 각. 실험이 단계의 경우, 20 ml의 주사기로 에탄올을로드하지 않습니다. 이 짧은 습관화 세션의 실험실에서 행동 훈련 방에 동물 보호 시설에서 이송되는 과정에 쥐를 길들. 첫 번째 세션에서, 래트를로드 나n은 그들의 집 동물 관리 시설에서 휠 카트 상 케이지, 및 실험실 행동 트레이닝 실에 전송. , 실내 조명을 밝히는 각 사운드 감쇠 부스에서 팬을 켜고 방을 종료하고, 문을 닫고 카트에 자신의 홈 케이지에 남아있는 동안 쥐가 20 분 동안이 새로운 환경에 적응 할 수 있습니다. 이 20 분의 기간이 종료되면, 동물 관리 시설에 쥐를 반환. 두 번째 세션에서, 실험실에서 행동 훈련 방에 쥐를 가지고. 이전으로, 객실의 조명과 칸막이 팬을 둡니다. 문이 혼란을 최소화하기 위해 폐쇄와 함께 방에 남아 있고, 처리하고 행동 훈련 방에 각각 쥐의 무게. 무게를 기록하고 동물 보호 시설로 쥐를 반환합니다. 이 짧은 습관화 세션에서 조절 챔버에 쥐를 길들. , 행동 훈련 방에 쥐를 운반 각 쥐의 체중을 기록,그리고 그 지정 조절 실에 각각 쥐를로드합니다. 첫번째 습관화 세션에서 절반 상황 1과 챔버와 문맥이 같은 나머지를 설정합니다. 제 습관화 세션에서 이전 세션에서 사용하지 않은 콘텍스트 각 챔버를 설정. , 쥐의 이러한 절반은 제 이상적 상황 1이어서 제 문맥이 노출되는 상황이, 다른 절반이어서, 콘텍스트 (1)에 노출되어, 카운터 방식 습관화 세션을 수행 모두 습관화 세션을 수행 필요한 경우가 이일에 분산 될 수 있지만 같은 날. 습관화 세션의 경우, 프로그램이 실행 된 후 1 분 houselight을 조명하는 컴퓨터 프로그램을 사용한다. 20 분 세션 중에 유체 포트 항목의 총 수를 기록한다. 세션의 끝에서, 해제 houselight 프로그램. 습관화 세션 중에 에탄올 또는 단서를 제공하지 마십시오. </l난> , 챔버에서 쥐를 제거 자신의 홈 케이지에 반환하고, 동물 보호 시설로 다시 운반 할 것. 장비 (예를 들면, 플로어 패널, 폐기물 운반, 페트리 접시)를 청소합니다. 자세한 내용은 단계 5.7를 참조하십시오. 5 파블로프 차별 교육 (PDT) 행동면에 기차 쥐 에탄올이 아닌 초 청각 신호와 결합되어 한 청각 신호를 구별합니다. 실험이 단계의 경우, 15 % 에탄올로 20 ml의 주사기를 입력합니다. 단계 3.3.2 및 3.3.3에 기술 된 바와 같이, 특유의 콘텍스트를 생성하는 시각적, 후각의 특정 구성, 및 촉각 자극과 각 조절 실을 옷 에탄올 소비 및 선호도에 따라, 컨텍스트 1과 카운터 방식이 문맥에 나머지 절반에 쥐의 절반이 할당 홈 케이지 에탄올 액세스 과정의 마지막 2 세션에서 평균화. 계속 참조내선 상황에 맞는 A. 참고로 PDT 동안 사용 : 각 쥐은 훈련이 단계에서 하나의 상황을 경험해야합니다. 후각 자극이 각 조절 실에 추가 할 수있는 마지막 상황에 맞는 자극이 있는지 확인합니다. 후각 자극을 포함하는 서로 다른 냄새의 comingling을 최소화하기 위해 챔버와 음향 감쇠 부스의 문을 닫습니다. , 행동 훈련 방으로 쥐를 가져와 각 쥐의 체중을 기록하고 그 지정 조절 실에 각각 쥐를로드합니다. 각 PDT 세션 동안 다음과 같은 일련의 이벤트를 제어하는​​ 컴퓨터 프로그램을 시작합니다. 프로그램 후 5 분가 발급 된에서, houselight을 밝히는. 백색 잡음 자극을 제시하고 리모콘은 16 회를 자극. CS +로 이러한 청각 자극 중 하나를 지정하고 다른 두 컨텍스트 걸쳐 카운터 방식, CS-한다. 각 CS + 및 CS – 시험 리터를 확인대서양 표준시 10 초. CS +의 마지막 6 초 동안 유체 포트에 0.2 ㎖의 에탄올을 제공합니다. CS- 중에 에탄올을 제공하지 마십시오. 각 PDT 세션 평균 마지막 58 분을합니다. 변수 시간 67 초 일정에 CS + 및 CS – 각을 제시한다. 10 초 CS 간격 동안 기록 유체 포트 항목 (CS 프레 젠 테이션 도중 10 초), 10 초 미리 CS 간격 (직전 CS 발병에 10 초), 그리고 10 초 후 CS 간격 (즉시 10 초 다음 CS는 CS + 및 CS – 프리젠 테이션뿐만 아니라, 전체 세션에 대한 총 유체 포트 항목 모두에 대해) 오프셋 (offset). 또한 이러한 간격 중에 각 포트 항목의 지속 시간을 기록한다. 세션의 끝에, houselight을 해제. , 챔버에서 쥐를 제거 자신의 홈 케이지에 반환하고, 동물 보호 시설로 다시 운반 할 것. 쥐가 각 PDT의 배달 에탄올 3.2 ml의 소비되도록 유체 포트 확인ession. 소량의 물을 함유하는 60 ml의 시린지로 폴리에틸렌 튜브에서 에탄올 세척. 그리고, 건조 있는지 확인하기 위해, 둘째, 빈 주사기를 사용하여 튜브를 통해 공기의 60 ML을 전달합니다. 장비를 청소합니다. 매일 청소를 들어, 바닥 패널, 폐기물 트레이 및 배양 접시를 씻으십시오. 주되면 전체 조절 챔버 청소. 실험 장치에 원치 않는 냄새를 도입 피하기 위해 향수 청소 제품을 사용하지 마십시오. 쥐 CS- 대 CS +에 자신의 포트 항목 응답 안정적 차별을 표시 할 때까지 매일 PDT 세션을 계속합니다. 참고 : CS-에 대한 응답으로 만든 포트 항목이 낮게 유지해야하는 반면 CS +에 대한 응답으로 만든 포트 항목이 세션을 통해 증가 할 전망이다. 필요한 PDT 세션의 정확한 수는 가이드로에 약 20 세션을 계획 다를 수 있습니다 응답 조건 차별, 그러나 달성하기 위해. 6 소멸 각 조절을 참 복장BER 시각, 후각, 촉각 자극으로 쥐 PDT 세션 동안 경험 한 별개의 컨텍스트를 만들 수 있습니다. 컨텍스트 1 PDT에 사용 된 경우, 예를 들어, 소쇠 세션 문맥이 같은 챔버를 구성. B. 콘텍스트로서 흡광 동안 사용 컨텍스트를 참조 동일 PDT 세션에 멸종 세션을 실시하지만, 연사 + 중에 에탄올을 제공하지 않습니다. CS +와 CS-을 제시 PDT 동안 사용 된 동일한 컴퓨터 프로그램을 사용합니다. 실험 단계에 걸쳐 일관성을 유지하기 위해, 주사기 펌프에 빈 주사기를로드하고, 펌프를 온 떠난다. 폴리에틸렌 튜브 멸종 세션 전에 에탄올이 포함되어 있는지 확인합니다. 쥐가 더 이상 쇼 CS + 및 CS – 사이에 응답 차별까지 매일 멸종 세션을 계속합니다. 참고 : 더 differe이 없을 때까지 CS +에 대한 응답으로 만든 포트 항목은 점차 멸종 세션에 걸쳐 감소 할 전망CS-에 대한 응답으로 만든 CS +에 대한 응답으로 만든 포트 항목 및 포트 항목 사이 후부. 다를 수 있습니다 응답 이었지만, 가이드로에 약 8 세션을 계획 소화 필요한 멸종 세션의 정확한 숫자. 단계 14.4에 기재된 바와 같이, 각 세션의 끝에 장비를 청소한다. 7 컨텍스트에 의한 갱신 테스트 PDT 세션 동안 경험 한 상황을 만들 시각, 후각, 촉각 자극 각 조절 챔버를 착용. 예를 들어, 주어진 쥐 PDT 세션에서 문맥을 경험 한 경우, 테스트 세션 컨텍스트 한 그의 챔버를 구성. 컨텍스트 A와 갱신 테스트 중에 사용되는 컨텍스트를 참조하십시오 동일 PDT 세션에 상황에 의한 갱신 시험을 실시하지만, 갱신 테스트 중에 에탄올을 제공하지 않습니다. 제시 에탄올을 보류 CS +와 PDT 세션 동안 이전과 CS-하지만. 같은 컴퓨터의 홍보를 사용하여CS + 및 CS -을 제시 PDT 동안 사용되었다 ogram. , 단계에 걸쳐 일관성을 유지 주사기 펌프에 빈 주사기를로드하고 나가려면 펌프가 켜져. 폴리에틸렌 튜브 테스트 세션 전에 에탄올이 포함되어 있는지 확인합니다. 파블로프 에어컨 알코올 추구 행동의 맥락에 의한 갱신을 준수하십시오. 주 :이 갱신 효과는 CS + 및 CS- 상대적 CS-에 응답하여 만들어진 포트 엔트리 동작 변경없이, CS +에 응답하여 만들어진 포트 항목의 수를 선택적 증가에 의해 명백 할 것이다는 관찰이 응답 멸종 훈련의 끝. 단계 14.4에 기재된 바와 같이, 세션의 끝에서 장비를 청소한다.