Обонятельных нейронов, полученных с помощью носовой биопсии в сочетании с лазерной съемки микродиссекции: возможный подход к исследуемым препаратом ответ психических расстройств

Биполярное расстройство (BD) является серьезным психоневрологических расстройств, характеризующихся патологическим изменениям в настроении, драйв и познание ^1. Литий используется для лечения BD было показано, чтобы изменить состояние стабильный уровень мРНК большого числа генов в исследованиях на животных ^2, но остается неизвестным, если любой из этих молекул связана с клинической реакции в организме человека ^2. Понимание механизма ответа лития потребует расследования литий-индуцированной молекулярные изменения в нервных тканях. К сожалению, это не практично, чтобы получить мозга биопсии пациентов BD пред- и пост-литиевой терапии для определения молекулярных подписей ответ лития. Посмертный ткани мозга были использованы для изучения биомаркеров в БД, однако, они не могут быть использованы для оценки молекулярных маркеров, связанных с динамическими изменениями в эмоциях, познания и управлять; и действия ретроспективно констатировали ответа на лечение лития может быть проблематичным ⁴, Лимфоциты и другие клетки крови могут быть полезны, но молекулярные изменения в клетках крови может не отражать нейронов изменения ^3-5. Спинномозговой жидкости может быть недостаточным для получения информации о внутриклеточных молекул, которые могут отражать, ассоциированных с заболеваниями и лекарства обратимым внутренние изменения.

Обонятельный эпителий (OE) является уникальной частью центральной нервной системы (ЦНС), эмбриологически связанных с лимбических структурах ^6; и это легко доступны через носовые биопсии. Он состоит из глиальных типа поддержки (т.е. sustentacular) клетки, базальные пролиферирующих клеток, и обонятельные нейроны рецептора на разных стадиях развития ^7-9. Таким образом, OE предоставляет уникальную возможность доступно исследования динамических изменений в ЦНС у больных с нервно-заболеваний ^7. Исследования демонстрируют полезность OE в качестве суррогатной ткани для исследования болезней, связанных события, которые отражают эти ОККurring мозговых нейронов ^8,9. Например, исследования использовали OE исследовать молекулярные профили, которые связаны с психическими заболеваниями ^10-14. Обонятельная система также служит для идентификации клинических endophenoytpes, такие как дефицит запах, которые ассоциируются с негативными симптомами шизофрении ^15. Кроме того, с развитием нервной системы процессы продолжают в OE в течение всей жизни, обеспечивая полезный форум для моделирования патофизиологии психических расстройств ^8,9.

Однако недостатком в использовании этой ткани является значительное загрязнение обонятельные биопсии с не-нейрональных клеток ^16. Например, общая РНК использовали для исследования экспрессии генов в предыдущих исследованиях OE содержится РНК, выделенной из всей носовой биопсию ткани, включая РНК из не-нейрональных клетках ^17. Таким образом, предыдущие подходы были ограничены качества клеток. Чтобы преодолеть эту проблему, новый подход, чтобы получить обогащенные популяции нейрональных клеток путем объединения носовые биопсии с лазерной захвата микродиссекции (LCM) была разработана ^18.

LCM является метод, который позволяет для селективного выделения клеток с использованием УФ лазерной резки в сочетании с инфракрасной лазерной ^19-21. Сочетание МДК с OE подход минимизирует загрязнение значительное OE не-нейрональных клеток, тем самым повышая обогащение нейрональных клеток ^18. Кроме того, слой нейронов можно отличить от подслизистой слоя под микроскопом, тем самым устраняя необходимость в окрашивании. Нейронные клеточные типы дополнительно можно отличить от других клеточных популяций с использованием первичных антител, которые выражены по типу клеток, представляющих интерес ^7. Таким образом, эта процедура устанавливает легкий способ для обогащения почти исключительно нейронов популяции клеток, которые могут быть использованы для исследований экспрессии генов, иммуногистохимии и других морфологических исследований.

ve_content "> Это исследование направлено создать экспериментальную площадку для расследования молекулярные изменения в обонятельных нейронов, связанных с болезненными состояниями и реакции на лечение. Для решения этой проблемы, небольшой набор пациентов для некурящих, которые имели диагностические критерии DSM-IV для BD на основе диагностическое интервью для генетических исследований (DIG) ²² был принят на работу пройти два носовых биопсии: один биопсия предварительная обработка с литием и второй биопсии, после 6 недель ежедневного перорального лечения лития Кроме того, исследование включали больных BD должны быть:. симптоматично для депрессии на основе забил ≥10 из 60 в клинициста в ведении Монтгомери-Asberg Rating Scale (MADRS) ^23; симптоматический гипомании или мании, на основе баллов ≥10 из 56 на врача в ведении Young-Mania Rating Scale (YMRS) ^24;. или ≥10 на обоих MADRS и YMRS коэффициента Rater Интер-Rater соглашения между клиницистами для обеих шкал> 0,96 После биопсии, нейроны ENRI.Чед от ОЕ по LCM. После дополнительных мер по контролю качества, чтобы обеспечить добычу высокого качества РНК из тканей и нейронов обогащения, в режиме реального времени RT ПЦР проведено расследование до и экспрессии после лечения уровни генов, представляющих интерес. Последующие разделы содержат описание проверки этого подхода, подчеркивая оптимизации протокола и стратегии, которые были применены для поиска и устранения неисправностей протокола.