通过鼻腔活检获得联合激光捕获显微切割的嗅觉神经元：一种可能的方法来研究治疗反应的精神障碍

双相情感障碍（BD）是一种严重的神经精神疾病，其特点是情绪的病理变化，驱动器和认知^1。用于治疗BD的锂已经显示出改变的在动物研究²的大量基因的稳态mRNA水平，但它仍然是未知的，如果任何这些分子与在人体²的临床响应相关联。理解锂反应的机制将需要调查在神经组织​​锂诱​​导分子变化。不幸的是，它是不实用的，得到了​​BD患者的脑活检前后锂疗法，以确定锂反应的分子签名。验尸脑组织已经被用于研究在BD中的生物标记物，但是，它们不能被用来评估与情绪，认知和驱动的动态变化有关的分子标记;回顾性确定的锂治疗反应的有效性可能会产生问题⁴。淋巴细胞和其他血细胞可能是有用的，但在血细胞的分子变化可能不反映神经元的变化^3-5。脑脊液可能不足以获得对细胞内的分子，可能反映疾病相关和药物可逆固有变化的信息。

嗅觉上皮（OE）是中枢神经系统（CNS）的一个独特的部分，胚胎学相关于边缘结构^6;它是通过鼻腔活检方便。它由胶质状的发展^7-9的不同阶段支撑（ 即 sustentacular）细胞，基底细胞增生，和嗅觉受体神经元。因此，OE提供了通俗易懂的学习与神经精神疾病的⁷动态变化的病人中枢神经系统的独特机会。研究，展示了OE的效用作为替代组织调查反映这些OCC相关疾病事件urring在大脑神经元^8,9。例如，有研究利用OE调查与精神疾病相关的^10-14分子型材。嗅觉系统也可用来识别临床endophenoytpes如与精神分裂症¹⁵阴性症状相关的气味赤字。此外，神经发育过程中的OE持续终生，提供了一个有用的途径精神病条件^8,9的基本病理生理学模型。

然而，一个缺点使用这种组织的是嗅觉活检与非神经元细胞¹⁶的实质性的污染。例如，在先前的OE研究中所用的基因表达研究中的总RNA含有从整个鼻腔活检组织，包括从非神经细胞¹⁷的RNA提取的RNA。因此，先前的方法已经由小区的质量的限制。为了克服这个问题，一种新颖的方法，得到丰富的神经元细胞群结合鼻腔活检使用激光捕获显微切割（LCM）已开发^18。

LCM是一种技术，其允许使用紫外激光切割结合红外线激光^19-21细胞的选择性分离。结合LCM使用OE方法由非神经元细胞减少的OE大量污染，从而提高神经元细胞¹⁸的富集。此外，神经元层，可以从下层层在显微镜下区分，从而省去了染色。从其他细胞群使用其通过感兴趣⁷的细胞类型表达的初级抗体的神经元细胞类型可以进一步进行区分。因此，该过程建立了几乎纯的神经元细胞群可用于基因表达研究，免疫组织化学等形态学调查富集更简单的方法。

ve_content“>这项研究的目的是建立一个实验平台，进行调查与疾病状态和治疗反应相关的嗅觉神经元的分子变化。为了解决这个问题，一小套非吸烟患者谁见了DSM-IV诊断标准BD的基础上诊断访谈为遗传研究^（DIG）22被招募进行两次经鼻活检：1的活检预处理与锂和第二活检，6周每日口服锂治疗后此外，合格的BD患者必须是：症状为抑郁症的基础上，给予蒙哥马利-艾森贝格量表^{（MADRS）23，}临床医生得分≥10出60;对于有症状或轻躁狂躁狂，根据得分≥10出来的56对管理扬躁狂量表临床医生（YMRS） ^24;或≥10两个MADRS和两个尺度医生之间的协议YMRS评价者-间信系数> 0.96活检后，神经元ENRI。通过LCM从OE地交付。以下附加的质量控制措施，以确保从组织和神经元的富集提取高质量的RNA，实时RT-PCR进行，调查所关注的基因的前后的治疗表达水平。接下来的部分包含了这种方法的有效性的描述，突出了协议的优化，并申请了故障排除的协议的策略。