Мышиные Гетеротопическая пересадке сердца Техника

Все животные были размещены под свободных от патогенов условиях в Университете Колорадо Барбара Дэвис Центр вивария под одобрения IACUC и заботу в соответствии с директивами NIH. Глубина анестезии судят по ног крайнем случае первоначально и соблюдением частоты дыхания как только процедура началась. 1. Донорского сердца Урожай Обезболить мыши-донора путем введения пентобарбитала (60 мг / кг IP). Остановите мышь на 4-полосных ограничений и клип мех. Протрите кожу спиртом. После вскрытия от кожи, вскрыть брюшную полость, сделав поперечный разрез просто уступает диафрагмы. Отрежьте заднюю мембраны до реберной вставки и поднимите переднюю грудную стенку вперед и сверху подвергая сердце. Расширение полную толщину разрезать заднюю боковую грудную полость на левой и правой сторонах груди. Изолироватьнижняя полая вена (НПВ) и поместите свободную 5-0 шелковой нити вокруг IVC, прилегающей к его включения в правом предсердии. Введите 1.0 куб.см. 4 ° C гепаринизированным физиологическим раствором (200 ед / см) в НПВ, то перевязывать сосуд с 5-0 шелковой нити и разделить. Изолировать правильный верхней полой вены (rSVC) аналогичным образом и перевязывать с 5-0 шелковой нити и разделить. Аккуратно свернуть сердце к правой стороне животных и изолировать левую верхней полой вены (LSVC), перевязывать с 5-0 шелковой нити и разделить подвергая левую легочную артерию. Закрепите сердце под мокрой марли в то время как тимус является тупым, расчлененный от главной легочной артерии (ПА) и левой и правой ветвей ПА и восходящей аорты арку. Блант препарировать дуги аорты без окружающих тканей. Микро-ножницы используются для разделения аорты проксимальнее правой плечевой-головной артерии, то есть не должно быть никаких филиалов между сердцем и разделенияточка аорты. В этом разделе дуги аорты формирует артериальное манжету для процесса имплантации. Отражение аорты манжету книзу, чтобы выставить багажник PA и левые и правые ветви ПА. Блант рассекают левую и правую ветви PA от окружающих тканей, как недалеко от сердца, как это возможно. Это позволяет легко рассечения ствола Звуковая от окружающих тканей. Разделите ствол PA как дистально это возможно, только проксимальнее ее бифуркации. В этом разделе легочной артерии формирует венозный манжету для процесса имплантации. Поместите 5-0 шелковой нити вокруг основания сердца и галстук. Сердце затем разрезают бесплатно в основе, и помещают в 4 ° C физиологического раствора. Общее время сбора урожая составляет ок. 10-15 мин. 2. Сердце Имплантат Техника Обезболить мышей-реципиентов пентобарбиталом (60 мг / кг IP начальная доза 25 мг / кг IP дополнительной дозы при необходимости). Клип мех ииммобилизации мышь на 4-полосных ограничений и приготовительному кожу повидон-йода и драпировка в стерильных моды. Сделайте 2 см срединный вертикальный разреза брюшной полости и проникновения в брюшную полость. Уберите кишечника сверху и вовне на груди. Держите завернутый в стерильный влажной марлей (стерильный физиологический раствор) в течение случае. Изолировать брюшной аорты и нижней полой вены (НПВ) ниже почечных сосудов и поместить 4-0 хлопка связей вокруг аорты и IVC превосходит то уступает анастомоза. Выявление любых поясничные сосуды внутри области и перевязывать с 10-0 нейлоновой ниткой. Узел хлопковые связей, в первую уступает затем начальника. Таким образом некоторые сохраняется в крови в аорте решений aortotomy легче. Сформируйте aortotomy с иглой 30 G, чтобы войти в просвет аорты. Расширить разрез с мелкими микро ножницами до длины примерно 2 мм. Этот разрез сделан по прямой линии вдоль длиннойпродольный оси судна. Сделать конец в сторону анастомоза доноров аорты в аорту получателя в следующем виде. Наведите 10-0 нейлона шов пребывания стежок в в донорской аорты и в нижний угол разреза в аорте получателя и галстук. Поместите вторую 10-0 нейлона напротив первой в донорской аорты и верхней углу разрез в брюшной аорте и галстук. Сделайте работает линии шва от начальника к уступают в боковой стенке аорты и галстук против ранее размещенных пребывания стежка. Не забудьте принести интим (поверхностные Внутренний сосуд) вместе, как вы стежка. Тогда шов медиальной стороны в бегущей моды и галстук. Первый и последний стежок на каждой стороне должны быть размещены как можно ближе к отдыху стежков, насколько это возможно. Тогда цель иметь 3 равномерно расположенных швов между этими двумя, делая в общей сложности 5 строчек. Сделать конец в сторону анастомоза доноров легочной артерии получателю IVC в следующим образом. PunctЮр IVC с 30 G иглы и продлить разрез для ок. 2 мм с мелкими микро ножницы. Этот разрез сделан по прямой линии вдоль продольной оси судна. Свяжите доноров легочной артерии к нижней углу разрез в НПВ с 10-0 нейлона. Поместите вторую 10-0 нейлона напротив первой в донорской артерии и верхней углу разрез в НПВ и галстук. Сделайте работает линии шва между легочной артерией и НПВ и галстук. Первый и последний стежок на каждой стороне должны быть размещены как можно ближе к отдыху стежков, насколько это возможно. Тогда цель иметь 5 равномерно расположенных швов между этими двумя, делая в общей сложности 7 строчек. Отпустите дистального 4-0 хлопка галстук восстановлении венозный приток. После того, как было отмечено, гемостаз венозной анастомоза ближний 4-0 хлопок галстук постепенно ослабил и артериальная анастомоза наблюдается для гемостаза. Когда оба анастомозы считаются безопасными, удалите грОттон связывает с помощью мыши. Вернуться кишечника в брюшную полость. Брюшная стенка закрыта в два слоя с использованием 5-0 шелковых шва в запущенном моды. Администрирование 1,0 мл болюс стерильной теплой физиологического раствора в брюшную полость в виде инфузионной терапии при закрытии, и 0,8 мл физиологического раствора вводят подкожно после операции. Никакие другие меры поддержки не требуется во время операции. Восстановление животное на потепление одеяло. Всего имплантат время составляет ок. 90-120 мин для начинающих, 45-60 мин с опытом. Администрирование бупренорфин обезболивание, 0,05 мг / кг, SC, 0,1-0,2 мл в начале процедуры и каждые 6-12 ч в течение 72 ч после соч. 3. Оценка трансплантата Оценка функции трансплантата ежедневно транс-пальпации живота. Держите мышь, как будто это были быть переданы внутрибрюшинным. Аккуратно нажмите на кончик указательного пальца по отношению к брюшной стенке и выяснить, как бьется улength и регулярность трансплантата. Дайте КАЧЕСТВА пальпации оценку от 4 (нормальная амплитуда и частота) в 0 (не избиение отклонил трансплантата). ВАЖНЫЕ ПРИМЕЧАНИЯ: Все инструменты стерилизуются, стерильные перчатки носят в течение всей процедуры и стерильный поле поддерживается. Донор и реципиент операции выполняются с использованием операционного микроскопа. Убедитесь, что анастомозы "чистыми". То есть, что задние стены не поймали при размещении швов. Это приведет к значительным сужение течь, что, скорее всего, результат в неудачной трансплантата и в крайних случаях, чтобы задних конечностей паралич. Это также важно, чтобы толщина полный проходит в том числе адвентиции сосудов и внутренней оболочкой из шовной иглы будут достигнуты. Evertion краев также гарантирует, что есть интим-на-интиме контакт, который помогает в герметизации и заживление анастомоза. Другой жизненно важный фактили является обеспечение того, натяжение анастомоза линий швов, также является оптимальным. Слишком свободный и там будет необратимым утечка, слишком туго и стриктуры течь приведет. Если на артериальной стороне это приведет к недостаточной перфузии трансплантата, если на венозной стороне сердца перегруженным приведет.