Murin de transplantation cardiaque hétérotopique Technique

Tous les animaux ont été logés dans des conditions exemptes d'agents pathogènes à l'Université du Colorado Barbara Davis Centre animalerie sous l'approbation du IACUC et soignés selon les directives du NIH. Profondeur de l'anesthésie est jugée par pincement de l'orteil d'abord et par le respect des taux de respiration une fois la procédure a commencé. 1. Donateurs coeur de récolte Anesthésier la souris donneuse par injection de pentobarbital (60 mg / kg IP). Immobiliser la souris par 4 voies restrictions et couper la fourrure. Essuyez la peau avec de l'alcool. Après dissection loin la peau, ouvrir la cavité abdominale par une incision transversale juste inférieure à la membrane. Couper la membrane postérieure à l'insertion costale et soulever la paroi thoracique antérieure en avant et en haut exposer le coeur. Étendre une épaisseur pleine couper le postérieur latéral cavité thoracique sur les côtés gauche et droit de la poitrine. Isoler l'veine cave inférieure (VCI) et placer un lâche 5-0 soie suture autour de l'IVC à côté de son insertion dans l'oreillette droite. Injecter 1,0 cc de 4 ° C saline héparine (200 u / cc) dans la veine cave inférieure, puis ligaturer le vaisseau avec la suture et fracture 5-0 soie. Isoler le droit veine cave supérieure (rSVC) de la même façon et ligaturer avec 5-0 suture de soie et de diviser. Roulez doucement le cœur vers le côté droit des animaux et isoler la veine cave supérieure gauche (LSVC), ligaturer avec un fil de soie 5-0 et diviser exposer l'artère pulmonaire gauche. Fixez le cœur sous une gaze humide tandis que le thymus est blunt dissection de la principale artère pulmonaire (AP) et la PA branches gauche et droite et croissant crosse aortique. Blunt disséquer l'arc aortique sans les tissus environnants. Micro-ciseaux sont utilisés pour diviser l'aorte proximale de l'artère brachiale-céphalique droit, c'est à dire qu'il devrait y avoir aucun branches entre le cœur et la divisionpoint de l'aorte. Cette section de la crosse de l'aorte forme le brassard artériel pour le processus d'implantation. Tenir compte de la manchette aortique en bas pour exposer le tronc et les branches PA gauche et droit de la PA. Blunt disséquer les branches PA gauche et droite à partir des tissus environnants dans la mesure du cœur que possible. Cela permet de dissection facile du tronc PA de tissus environnants. Diviser le coffre PA comme distale que possible, juste en amont de sa bifurcation. Cette section de l'artère pulmonaire veineuse constitue le brassard pour le processus d'implantation. Placez une suture en soie 5-0 autour de la base du cœur et une cravate. Le cœur est ensuite découpé libre à la base, et placée dans 4 ° C une solution saline. Moment de la récolte totale est d'env. 10-15 min. 2. Coeur Implant Technique Anesthésier les souris receveuses avec du pentobarbital (/ kg de dose initiale IP 60 mg, 25 mg / kg dose supplémentaire IP si nécessaire). Clip de la fourrure etimmobiliser la souris par 4 voies restrictions et préparer la peau avec de la povidone-iode et drapé dans un mode stérile. Faire un 2 cm ligne médiane verticale incision abdominale et entrer dans la cavité abdominale. Retrait de l'intestin haut et externalisé sur la poitrine. Gardez enveloppé dans de la gaze humide stérile (solution saline stérile) tout au long de l'affaire. Isoler l'aorte abdominale et la veine cave inférieure (VCI) sous les artères rénales et placez 4-0 liens de coton autour de l'aorte et IVC supérieur puis inférieur au site d'anastomose. Identifier tous les navires lombaires dans le domaine et ligaturer avec 10-0 suture en nylon. Nouer des liens de coton, d'abord l'inférieur suivi par le supérieur. De cette manière, un peu de sang est retenu dans la prise de l'aorte aortotomie plus facile. Former le aortotomie avec une aiguille 30 G pour entrer dans la lumière de l'aorte. Elargir l'incision avec de fines micro ciseaux pour une longueur d'environ 2 mm. Cette incision est faite dans une ligne droite le long de la longuetudinal axe de la cuve. Faire une fin anastomose de l'aorte du donneur à l'aorte bénéficiaire de la façon suivante. Placez un nylon 10-0 séjour de suture point dans l'aorte des bailleurs de fonds et à l'angle inférieur de l'incision dans l'aorte du destinataire et une cravate. Placez un deuxième nylon 10-0 opposée à la première dans l'aorte du donneur et le coin supérieur de l'incision dans l'aorte abdominale et une cravate. Faire une ligne de suture allant de supérieur à inférieur à la paroi latérale de l'aorte et cravate contre un séjour point précédemment placé. N'oubliez pas d'apporter les intimas (surface intérieure du vaisseau) ainsi que vous assemblez. Puis suturer la partie médiane de façon courante et une cravate. Le premier et le dernier point de chaque côté doit être placé au plus près des points de séjour que possible. Puis objectif est d'avoir trois points espacés entre ces deux pour un total de 5 points. Faire une fin anastomose de l'artère pulmonaire de donneur au receveur IVC de la façon suivante. Puncture la VCI avec une aiguille 30 G et étendre l'incision pendant env. 2 mm avec de beaux ciseaux micro. Cette incision est faite dans une ligne droite le long de l'axe longitudinal du navire. Attachez l'artère pulmonaire des bailleurs de fonds dans le coin inférieur de l'incision dans la veine cave inférieure avec nylon 10-0. Placez un deuxième nylon 10-0 opposée à la première dans l'artère du donneur et le coin supérieur de l'incision dans la veine cave inférieure et une cravate. Faire une ligne de suture s'étendant entre l'artère pulmonaire et la veine cave inférieure et une cravate. Le premier et le dernier point de chaque côté doit être placé au plus près des points de séjour que possible. Puis objectif est d'avoir 5 points régulièrement espacés entre ces deux soit un total de 7 points. Relâchez le coton rétablir le flux veineux distal 4-0 cravate. Une fois l'hémostase de l'anastomose veineuse a été observée proximale 4-0 coton cravate est progressivement desserré et l'anastomose artérielle observée pour l'hémostase. Lorsque les deux anastomoses sont considérés comme sûrs, retirez le cotton cravates de la souris. Retour de l'intestin à l'abdomen. La paroi abdominale est fermée en deux couches en utilisant 5-0 suture de soie dans un mode course. Administrer un bolus de 1,0 ml de solution saline stérile normale chaud dans le ventre comme la réanimation liquidienne à la clôture, et 0,8 ml de solution saline normale est injecté par voie sous cutanée post-opératoire. Pas d'autres mesures de soutien sont nécessaires pendant la chirurgie. Récupérer l'animal sur une couverture chauffante. Temps implant totale est d'env. 90-120 min pour les débutants, 45-60 min avec l'expérience. Administrer la buprénorphine analgésie, 0,05 mg / kg, SC, 0,1-0,2 ml au début de la procédure et tous les 6-12 h pendant 72 heures post-op. 3. Évaluation de la greffe Évaluer la fonction du greffon quotidiennement par palpation trans-abdominale. Garder la souris comme si elle devait être reçu une injection intra-péritonéale. Appuyez doucement sur la pointe d'un index contre la paroi abdominale et de déterminer la str battantongueur et la régularité de la greffe. Offrir la qualité de la palpation un score de 4 (amplitude et la fréquence normale) à 0 (non-battant rejeté la greffe). NOTES IMPORTANTES: Tous les instruments sont stérilisés, des gants stériles sont portés tout au long de la procédure et un champ stérile est maintenu. Les chirurgies donateurs et bénéficiaires sont effectués avec l'utilisation d'un microscope opératoire. Veiller à ce que les anastomoses sont «propres». C'est que les parois arrière ne sont pas pris en plaçant des points. Cela entraînera un rétrécissement important de s'écouler qui sera plus que probablement suite à une greffe échoué et dans les cas extrêmes à des membres postérieurs paralysie. Il est également essentiel que toute l'épaisseur passe y compris l'adventice vasculaire et l'intima de l'aiguille de suture sont atteints. Evertion des bords garantit également qu'il n'y a intima-à-intima de contact, ce qui contribue à l'étanchéité et à la cicatrisation des anastomoses. Un autre fait d'importance vitaleou est de s'assurer que la tension des lignes de suture des anastomoses est également optimale. Trop lâche et il y aura une fuite irréversible, trop serré et une sténose de s'écouler entraînera. Si du côté artériel cela se traduira par une mauvaise perfusion du greffon, si sur le côté veineux cœur congestionné entraînera.