Muizen Heterotope Heart Transplant Techniek

Alle dieren werden gehuisvest onder-pathogeen-vrije omstandigheden aan de Universiteit van Colorado Barbara Davis Center Animal Facility onder IACUC goedkeuring en verzorgd volgens de NIH richtlijnen. Diepte van de anesthesie wordt beoordeeld door teen knijpen in eerste instantie en door de naleving van de ademhalingsfrequentie, zodra de procedure is begonnen. 1. Donorhart Harvest Verdoven van de donor muis door het injecteren van pentobarbital (60 mg / kg IP). Immobiliseren de muis door het 4-way beperkingen en knip de vacht. Veeg de huid met alcohol. Na het ontleden weg van de huid, opent de buikholte door een dwarse insnijding net inferieur aan het middenrif. Snijd het middenrif posterior aan ribben inbrengen en til de voorste borstwand ventraal en superiorly blootstellen van het hart. Verleng een volledige dikte verknipt de posterieure laterale borstholte aan de linker-en rechterkant van de borst. Isoleer deonderste vena cava (IVC) en plaats een losse 5-0 zijden hechtdraad in de IVC naast de insertie in het rechter atrium. Injecteer 1,0 cc van 4 ° C gehepariniseerde zoutoplossing (200 u / cc) in de IVC, dan afbinden het vat met de 5-0 zijden hechtdraad en delen. Isoleer de rechter superieure vena cava (rSVC) op dezelfde manier en afbinden met 5-0 zijden hechtdraad en delen. Schud het hart naar de rechterkant van de dieren en het isoleren van de linker vena cava superior (lSVC), afbinden met een 5-0 zijden hechtdraad en verdeel het blootstellen van de linker longslagader. Beveilig het hart onder een natte gaasje terwijl de thymus is stomp verwijderd van de belangrijkste longslagader (PA) en de linker en rechter PA takken ontleed en oplopende aortaboog. Blunt ontleden de aortaboog vrij van de omliggende weefsels. Micro-schaar worden gebruikt om de proximale aorta verdelen rechts brachialis-cefale arterie, dwz er mogen geen vertakkingen tussen het hart en de verdelingpunt van de aorta. Dit gedeelte van de aorta-boog vormt de arteriële manchet voor het implantaat proces. Afspiegeling van de aorta manchet inferiorly aan de PA romp en links en rechts takken van de PA bloot. Stompe ontleden de linker en rechter PA takken van het omringende weefsels ver van het hart mogelijk. Dit maakt gemakkelijke ontleding van de PA stam van omringende weefsels. Verdeel de PA romp zo distaal mogelijk, net proximaal van de splitsing. Dit gedeelte van de longslagader vormt de veneuze manchet voor het implantaat proces. Plaats een 5-0 zijden hechtdraad rond de basis van het hart en stropdas. Het hart wordt dan vrij gesneden op de basis, en geplaatst in 4 ° C zoutoplossing. Totale oogst is ca.. 10-15 min. 2. Hart Implant Techniek Verdoven de ontvangende muizen met pentobarbital (60 mg / kg IP initiële dosis 25 mg / kg IP supplementaire dosis indien nodig). Knip de vacht enimmobiliseren de muis door het 4-way beperkingen en prep de huid met povidonjood en laken in een steriele wijze. Maak een 2 cm middellijn verticale incisie in de buik en vul de buikholte. Trek de darm superieur en naar buiten gebracht op de borst. Houd verpakt in steriele vochtig gaas (steriele zoutoplossing) gedurende het geval. Isoleer de abdominale aorta en inferior vena cava (IVC) in de niervaten en plaats 4-0 katoen banden rond de aorta en IVC beter dan inferieur aan de anastomosisplaats. Elke lumbale schepen binnen het veld te identificeren en afbinden met 10-0 nylon hechtdraad. Knoop de katoenen banden, eerst de inferieure, gevolgd door de leidinggevende. Zo bloed wordt vastgehouden in de aorta die de aortotomy vergemakkelijken. Vorm het aortotomy met een 30 G naald in het lumen van de aorta voeren. Verleng de incisie met fijne micro schaar om een ​​lengte van ongeveer 2 mm. De incisie wordt gemaakt in een rechte lijn langs de langeitudinal as van het vat. Maak een einde aan de zijkant anastomose van de donor aorta aan de ontvanger aorta in de volgende mode. Plaats een 10-0 nylon hechtdraad verblijf steek in de donor aorta en de inferieure hoek van de incisie in de ontvanger aorta en stropdas. Plaats een tweede 10-0 nylon tegenover de eerste in de donor aorta en de superieure hoek van de incisie in de abdominale aorta en stropdas. Maak een draaiende hechting van superieur aan inferieure in de laterale wand van de aorta en stropdas tegen de eerder geplaatste verblijf steek. Zorg ervoor dat u de Intimas (oppervlakte binnenvat) bij elkaar te brengen als je steek. Hechten dan de mediale zijde in een lopende mode en stropdas. De eerste en laatste steek aan weerszijden dient zo verblijf steken mogelijk geplaatst. Probeer vervolgens 3 st gelijkmatig tussen beide tot een totaal van 5 hechtingen. Maak een einde aan de zijkant anastomose van de donor longslagader naar de ontvanger IVC in de volgende mode. PunctUre het IVC met een 30 G naald en uitbreiden van de incisie voor ca. 2 mm met fijne micro schaar. De incisie wordt gemaakt in een rechte lijn langs de langsas van het vat. Bind de donor longslagader naar de inferieure hoek van de incisie in de IVC met 10-0 nylon. Plaats een tweede 10-0 nylon tegenover de eerste in de donor slagader en de superieure hoek van de incisie in de IVC en stropdas. Maak een draaiende hechting tussen de longslagader en de IVC en stropdas. De eerste en laatste steek aan weerszijden dient zo verblijf steken mogelijk geplaatst. Probeer vervolgens 5 st gelijkmatig tussen beide tot een totaal van 7 hechtingen. Laat de distale 4-0 katoen tie het herstel van veneuze flow. Zodra hemostase van de veneuze anastomose is waargenomen de proximale 4-0 katoen stropdas geleidelijk losgemaakt en de arteriële anastomose waargenomen voor hemostase. Wanneer beide anastomosen veilig worden beschouwd, verwijdert u de cotton banden van de muis. De terugkeer van de darm naar de buik. De buikwand is gesloten in twee lagen met behulp van 5-0 zijden hechtdraad in een actieve manier. Dien een 1,0 ml bolus van steriele, warme fysiologische zoutoplossing in de buik als vochttoediening bij het sluiten, en 0,8 ml normale fysiologische zoutoplossing wordt subcutaan postoperatief geïnjecteerd. Geen andere ondersteunende maatregelen nodig zijn tijdens de operatie. Recover het dier op een warmtedeken. Totaal implantaat is ca.. 90-120 min voor beginners, 45-60 min. met ervaring. Dien buprenorfine analgesie, 0,05 mg / kg, SC, 0,1-0,2 ml aan het begin van de procedure en elke 6-12 uur gedurende 72 uur na de operatie. 3. Graft assessment Beoordelen graft function dagelijks door trans-abdominale palpatie. Houd de muis alsof het moeten worden om intraperitoneale injectie. Druk zachtjes op het topje van een wijsvinger tegen de buikwand en na te gaan de kloppende strength en regelmatigheid van het transplantaat. Geef palpatie kwaliteit een score van 4 (normale amplitude en frequentie) op 0 (niet-kloppend afgewezen graft). BELANGRIJKE OPMERKINGEN: Alle instrumenten worden gesteriliseerd, steriele handschoenen worden gedragen tijdens de gehele procedure en een steriel veld wordt gehandhaafd. De donor en ontvanger operaties worden uitgevoerd met gebruik van een operatiemicroscoop. Zorg ervoor dat de anastomosen zijn "schone". Dat is, dat de achterwanden niet gevangen bij het plaatsen st. Dit zal leiden tot een significante vernauwing aan die zal meer dan waarschijnlijk resultaat vloeien in een mislukte ent en in extreme gevallen tot achterste ledematen verlamming. Het is ook van vitaal belang dat volledige dikte passeert waaronder de vasculaire adventitia en de intima van de hechtdraad naald worden bereikt. Evertion van de randen zorgt dat er intima-aan-intima contact, hetgeen helpt bij het afdichten en genezing van de anastomose. Een ander vitaal belang feitof is ervoor te zorgen dat de spanning van de anastomose sutuurlijnen is optimaal. Te los en er zal onomkeerbaar lekken zijn, te strak en vernauwing te stromen zal resulteren. Als aan de arteriële kant zal dit leiden tot een slechte doorbloeding van het transplantaat, indien aan de veneuze zijde een overbelaste hart zal leiden.