Murine Heterotope Heart Transplant-Technik

Alle Tiere wurden unter keimfreien Bedingungen an der Universität von Colorado Barbara Davis-Center Tierhaltung unter IACUC Genehmigung untergebracht und versorgt nach den NIH-Richtlinien. Narkosetiefe wird durch Zeh Prise zunächst und durch Einhaltung der Atmungsrate beurteilt, sobald das Verfahren begonnen hat. 1. Donor Heart Ernte Betäuben Donor Maus durch Injektion von Pentobarbital (60 mg / kg IP). Unbeweglichkeitseffekt der Maus durch 4-Wege-Clip Stützen und das Fell. Wischen Sie die Haut mit Alkohol. Nach sezieren entfernt die Haut, öffnen Sie die Bauchhöhle, indem sie einen Querschnitt unmittelbar unterhalb des Zwerchfells. Schneiden Sie die Membran hinter Rippen Einsetzen und heben Sie den vorderen Brustwand nach vorn und oben Aussetzen des Herzens. Erweitern einer vollen Dicke die hinteren seitlichen Brusthöhle geschnitten auf der linken und der rechten Seite der Brust. Isolieren Sie dieVena cava inferior (IVC) und setzen eine lose 5-0 Seidennaht um den IVC angrenzend an sein Einsetzen in das rechte Atrium. Spritzen 1,0 ml 4 ° C Heparin Kochsalzlösung (200 u / cm ³) in die IVC, dann ligieren das Schiff mit dem 5-0 Seidennaht und sich teilen. Isolieren Sie die rechte obere Hohlvene (rSVC) in ähnlicher Art und Weise und zu ligieren mit 5-0 Seidennaht und sich teilen. Rollen Sie das Herz auf der rechten Seite der Tiere und zu isolieren, die linke obere Hohlvene (lSVC), abzubinden mit einem 5-0 Seidennaht und teilen Aussetzen der linken Lungenarterie. Sichern Sie das Herz unter einer feuchten Gaze während der Thymus ist stumpf vom Hauptlungenarterie (PA) und der linken und rechten PA Filialen seziert und aufsteigend Aortenbogen. Blunt sezieren die Aortenbogen frei von den umgebenden Gewebe. Mikroscheren verwendet werden, um die Aorta proximal zu der rechten Arteria brachialis-Kopfteilen, dh es sollte keine Verzweigungen zwischen dem Herzen und der Teilung seinPunkt der Aorta. Dieser Abschnitt des Aortenbogens bildet die arterielle Manschette für den Implantationsprozess. Spiegeln die Aorten-Manschette inferior, um die PA Stamm und die linken und rechten Zweige der PA aus. Blunt die linken und rechten PA Zweige von den umgebenden Geweben weit vom Herzen wie möglich zu sezieren. Dies ermöglicht eine einfache Zerlegung des PA Stamm von umgebenden Geweben. Teilen Sie die PA Stamm als distal wie möglich, nur in der Nähe seiner Gabelung. Dieser Abschnitt der Lungenarterie bildet die Venenmanschette für den Implantationsprozess. Legen Sie ein 5-0 Seidenfaden um die Basis des Herzens und Krawatte. Das Herz wird dann an der Basis frei geschnitten und in 4 ° C Salzlösung gelegt. Gesamterntezeit ca. 10-15 min. 2. Herzimplantattechnik Betäuben die Empfängermäuse mit Pentobarbital (60 mg / kg IP Initialdosis 25 mg / kg IP zusätzliche Dosis, falls erforderlich). Clip der Pelz-undImmobilisierung der Maus durch 4-Wege-prep Stützen und die Haut mit PVP-Jod und Fall steril. Machen Sie eine 2 cm vertikale Mittellinie Bauchschnitt und geben Sie die Bauchhöhle. Fahren Sie den Darm nach oben und auf der Brust externalisiert. Halten Sie in sterilen feuchten Gaze (sterile Kochsalzlösung) in der gesamten Fall gewickelt. Isolieren Sie die Bauch-Aorta und untere Hohlvene (IVC) unterhalb der Nierengefäße und legen 4-0 Baumwolle Krawatten um die Aorta und IVC überlegen dann schlechter als die Anastomose. Identifizieren Sie alle Schiffe in der Lendenfeld und Ligation mit 10-0 Nylonnaht. Knoten Sie die Baumwoll Krawatten, zuerst die untere, gefolgt von der überlegen. Auf diese Weise wird etwas Blut in der Aorta so dass die Aortotomie leichter beibehalten. Bilden die Aortotomie mit einer 30 G-Nadel, um das Lumen der Aorta zu gelangen. Erweitern Sie den Schnitt mit feinen Mikro Schere auf eine Länge von etwa 2 mm. Dieser Schnitt wird in einer geraden Linie entlang der langen hergestelltitudinal Achse des Behälters. Machen Sie Schluss mit Anastomose der Spender Aorta Aorta an den Empfänger in der folgenden Weise. Legen Sie ein 10-0 Nylonnaht Aufenthalt Stich in der Spender Aorta und an den unteren Winkel des Einschnitts in der Empfänger Aorta und Krawatte. Legen Sie eine zweite 10-0 Nylon gegenüber der ersten in der Spender Aorta und der überlegenen Ecke der Schnitt in der Bauchaorta und Krawatte. Mit Anlauf Nahtlinie aus überlegen, unterlegen in der Seitenwand der Aorta und Krawatte gegen die zuvor platzierten Aufenthalt Stich. Seien Sie sicher, die Intimas (innere Gefäßoberfläche) zusammen zu bringen, wie Sie nähen. Dann Naht der medialen Seite in einem laufenden Mode und Krawatte. Die erste und die letzte Masche auf jeder Seite sollte möglichst nahe an den Aufenthalt Stiche wie möglich platziert werden. Dann wollen drei gleichmäßig verteilten Stiche zwischen diesen beiden so dass insgesamt 5 Stiche haben. Machen Sie Schluss mit Anastomose der Spenderlungenarterie an den Empfänger IVC in der folgenden Weise. PunctAbbildung der IVC mit einem 30-G-Nadel und erweitern den Schnitt für ca. 2 mm mit feinen Mikro Schere. Dieser Schnitt wird in einer geraden Linie entlang der Längsachse des Behälters hergestellt. Binden Sie die Spenderlungenarterie in der unteren Ecke der Schnitt in der IVC mit 10-0 Nylon. Legen Sie eine zweite 10-0 Nylon gegenüber der ersten in der Spenderarterie und der überlegenen Ecke der Schnitt in der IVC und Krawatte. Mit Anlauf Nahtlinie zwischen Lungenarterie und der IVC und Krawatte. Die erste und die letzte Masche auf jeder Seite sollte möglichst nahe an den Aufenthalt Stiche wie möglich platziert werden. Dann sollen bis 5 Stiche gleichmäßig verteilt zwischen diesen beiden so dass insgesamt sieben Stiche haben. Lassen Sie die distalen 4:0 Baumwolle Krawatte Wiederherstellung Venenfluss. Sobald die Blutstillung der venösen Anastomose beobachtet worden, der proximale 4:0 Baumwolle Krawatte allmählich gelockert und die arterielle Anastomose zur Blutstillung beobachtet. Wenn beide Anastomosen gelten als sicher, entfernen Sie die cotton Binder von der Maus. Bringen Sie den Darm auf den Bauch. Die Bauchwand wird in zwei Schichten mit 5-0 Seidennaht in einem laufenden Mode geschlossen. Verwalten eines Bolus von 1,0 ml steriler, physiologischer Kochsalzlösung in warmem Abdomen als Flüssigkeitszufuhr beim Schließen, und 0,8 ml physiologischer Kochsalzlösung subkutan post-operativ injiziert werden. Während der Operation sind keine weiteren unterstützenden Maßnahmen erforderlich. Recover das Tier auf eine wärmende Decke. Insgesamt Implantat Zeit beträgt ca.. 90-120 min für Anfänger, 45-60 min mit Erfahrung. Verwalten Buprenorphin Analgesie, 0,05 mg / kg, SC, 0,1-0,2 ml zu Beginn des Verfahrens und alle 6-12 h für 72 Stunden nach der Operation. 3. Graft Beurteilung Bewerten Transplantatfunktion täglich von trans-abdominale Palpation. Halten Sie die Maus, als ob es um eine intraperitoneale Injektion verabreicht werden. Drücken Sie vorsichtig die Spitze eines Zeigefinger gegen die Bauchwand und festzustellen, das Schlagen strength und Ordnungsmäßigkeit des Transplantats. Geben Palpation Qualität eine Punktzahl von 4 (normale Amplitude und Frequenz) bis 0 (nicht-schlag abgelehnt Transplantat). WICHTIGE HINWEISE: Alle Instrumente sind sterilisiert, sterile Handschuhe sind während des gesamten Verfahrens tragen und einen sterilen Bereich erhalten bleibt. Die Spender und Empfänger-Operationen werden durch die Verwendung eines Operationsmikroskops durchgeführt. Stellen Sie sicher, dass die Anastomosen sind "sauber". Das heißt, dass die Rückwände sind nicht bei der Platzierung Maschen verfangen. Dadurch wird eine signifikante Verengung fließen mehr als wahrscheinlich, dass Ergebnis wird in einem gescheiterten Transplantat und im Extremfall zu-Hinterbeinlähmung. Es ist auch sehr wichtig, dass die gesamte Dicke geht einschließlich der Gefäß Adventitia und Intima der Nähnadel erreicht. Evertion der Kanten gewährleistet auch, dass es Intima-zu-Intima-Kontakt, der in Dicht-und Heilung der Anastomose hilft. Eine weitere wichtige Tatsache von entscheidenderoder ist sicherzustellen, dass die Spannung der anastomotischen Nahtlinien ist auch optimal. Zu locker und es wird irreversible undicht zu sein, zu eng und zu fließen Stenose führen wird. Wenn auf der arteriellen Seite wird dies zu einer schlechten Durchblutung des Transplantats führen, wenn auf der venösen Seite eine lasteten Herzen resultieren.