造血前駆細胞の養子移入を使用して、パイエル板におけるマウス形質細胞様樹状細胞の開発を評価

ここでは、一般的な樹状細胞前駆体（のCDP）はパイエル板（PP）の中の形質細胞様樹状細胞（PDC）の人口を生じさせることができるかどうかを評価するためのプロトコルを示しています。この方法を使用しての全体的な目標は、パイエル板（PPたpDC）中のpDCの発生調節を評価することであった。これが重要である理由は、PPのpDCは骨髄、血液および脾臓を含む他の組織に見出さのpDCは異なるので、それはPPのpDCに及び他のpDCの集団が発達および/または機能的に関連しているかどうかは不明であるということである。具体的には、pDCは広く、私はToll様受容体7と迅速なIFNの分泌^1-3による9（TLR-7/9）の刺激に応答して、造血系内（IFN）生産インターフェロンプリンシパルタイプであることで知られています。しかし、PPのpDCは、私がTLRアゴニスト刺激^4,5に応じて型IFNの産生が不足している。また、PPたpDCはまた、骨髄および脾臓で発見さたpDCと異なる型からの信号を必要とする私は（IFN）受容体（IFNAR1）をインターフェロンまたはIFNは彼らの開発および/ ​​または蓄積⁵用の分子STAT1シグナル伝達。これらのデータは、個別の調節機構がPPの他の器官のpDCに対するpDCに（ 例えば 、骨髄、脾臓^）5を制御する可能性を示唆している。

この方法の開発につながった理論的根拠は、樹状細胞（DC）生物学の理解における最近の進歩に基づいていた。ほとんどは、全てではない、DCサブセットがFMS様チロシンキナーゼ3受容体（の^{Flt3）6-10を}発現する造血前駆細胞から派生したが、DCの開発は古典的な骨髄およびリンパ経路に限定されるものではない。たとえば、のFlt3 ⁺は骨髄系共通前駆細胞（CMPの、LIN ^– IL-7R ^– SCA-1 ^–のc-kit ⁺ CD34 ^+FcγRの^{LO / – ）}のCDP（LIN ^–のc-kit ^LO CD115 ⁺のFlt3 ^+）を生じさせる、whicHは、さらにPDCと従来のDC（の^CDC）9,10に分化する。これとは対照的に、のFlt3 ⁺リンパ球系共通前駆細胞（CLPの、LIN ^– IL-7R ⁺ SCA-1 ^LOのc-Kit ^LO）は pDCに¹¹に、主に開発しています。したがって、従来の研究では、典型的な分析は、骨髄、脾臓および/または血液のpDCサブセットに制限されているがpDCには、のFlt3Lの調節下に少なくとも2つの異なる造血前駆細胞集団から生じる示す。このように、PPのpDCを生成前駆細胞集団（S）は、調査を必要とした。 PPのpDCの起源を理解することは、彼らが他のpDC集団と共通の発生経路を共有しているかどうかに光を当てる、または、PPでの生成中に別個の機構を利用します。

ここに記載されたアプローチのユニークな利点は、造血前駆細胞の養子移入の受容体としてのPPのpDCの深刻な不足を示しているマウスを使用することである。遺伝子を持つマウスまたはSTAT1（ のStat1 ^{– / – ）}をコードする遺伝子IFNAR1（ ^{– / –}マウスIFNAR）中チック欠失はPPのpDC ⁵の著しい減少を明らかにした。したがって、これらの株は、養子免疫伝達試験は、例えば、致死的照射のような強力な細胞アブレーションレジームの非存在下で行うことができるように、PP用のpDCが低減された環境を提供する。ここで紹介する方法のさらなる強さのFlt3Lの上昇循環量を刺激する流体力学的な遺伝子導入（HGT）を使用することである。これは、組換えタンパク質の注入に対して、 生体内でのFlt3Lを誘導するためのコスト効果的なアプローチを提供します。私たちの研究室にあるものを含む多数の研究は、実験条件^5,12,13様々なサイトカイン量を誘導するためにHGTを採用しています。

DCの労働力と正確な免疫機能の分割は、免疫学の主要な関心事である。特に、pDCは、経口寛容および全身抗ウイルスの重要なメディエーターである応答は、まだ彼らはまた、自己免疫および癌^14〜17の発展と持続性に貢献すると思われる。ここに記載されているプロトコルは、PPのpDCを規制発達のメカニズムをより十分に検討できるようになります。また、このアプローチは、研究がPP pDCの機能を評価することを可能にし、PPの内の他の集団の免疫調節および機能の理解に拡張することができる。