研究のための気管支肺胞洗浄（BAL）、適切なサンプル利回りの取得

1。被験者は、呼吸器の研究看護師が到着時に満たされている対象は固形食と明確な流体1のための2時間> 4時間絶食されています。 手順は、（標準的な病院のポリシーに従って）適切な前後の手続きのチェックで一日のケースのように行われている。 被験者は、病院のガウンを着ています。 小さ ​​なゲージのカニューレは、（理想的には左手に）挿入され、後の手続きの回復期間1が終了するまでその場に残っている。 観察前処置がとられる（血圧、心拍数、酸素飽和度[SATS]）。 対象は気管支鏡検査スイートに転送されます。 2。被写体が気管支鏡検査の経験が呼吸器研究の臨床医によってSuiteの処置のために準備されている 3誘導心電図、パルスオキシメータ1,10および血圧計、監視装置を含めて取り付けられている。 AnesthetICサポートは、書面によるインフォームドコンセントなど、必要とされていません。 酸素は> 90％1 SATSを達成するために、最大4 L /分で鼻カニューレを介して送達されてもよい。 オペレータは、これは、滅菌生理食塩水を吸引することにより、効果的な吸引力を確保することが含まれ、気管支鏡をチェックします。 リドカインと局所麻酔（キシロカインを使用）（Instillagel 1を使用して）、鼻腔と口腔粘膜で達成される鎮静は、適切な被験者から要求されている場合、静脈内ミダゾラムは、1投与される。適切な逆転エージェント（フルマゼニル）は、すぐに使用可能です。 蘇生装置は1,10容易に利用可能である必要があります。 3。気管支鏡を挿入して配置されている挿管は経鼻通常。これが原因で鼻ポリープ、炎症を起こした鼻甲介、または任意の不快感にできない場合は、被写体が口から挿管されている（口ガードを防止するのに使用されているスコープまたは被験者の歯の損傷）。 喉頭での局所麻酔た。通常は4-6 mLの合計が使用され、4％リドカインを使用して完成する。一般的にこれは点滴で咳が発生します。 声帯を通過し、さらに粘膜麻酔は右下葉（RLL）と右中葉（RML）の一部門で、かつ、RMLの入り口に、カリーナで2％リドカイン2mlのアリコートを使用しています。 気管支鏡は、吸引が（ 'ウィンクテスト'吸引ボタンを使用して適用されたときに気道が崩壊するように、それが安全な位置にあると十分に遠位が、あまりにも遠位ない位置で、理想的に内側区域において、RML内に配置されている）。 良い位置決めが完全に気管支鏡検査、すぐに穏やかな吸引で完全に閉じない気道によって所定の位置に保持することができる気管支鏡でウインクテスト中に示されている。 4。 BALが実行される四60ミリリットルの注射器は、事前です60ミリリットル、50ミリリットル、50ミリリットル、連続注射器内の40ミリリットル – 温め生理食塩水で満たされた。件名と気管支鏡検査の準備が整ったら気管支鏡検査は、RMLの位置を維持しながら、生理食塩水の最初の注射器は気管支鏡アシスタントで点眼しています。 手で穏やかに吸引が同じポートと50ミリリットル注射器を使用アシスタントperformed is。 この手順は、次いで、我々の具体的な手法で用い200mlを最大容量で、さらに3回繰り返す。 検索されたBAL液は、すでに溶融氷上に保持した容器にゆっくりと放出される。ガラス容器は、細胞の付着を阻害し、細胞のリターンを最大化するためにpresiliconizedてもよい。 BAL液は、界面活性剤によって形成される表面シャボン玉と光に対してかすん表示されます。 気管支鏡をゆっくりと完全に引き出される。 BAL液は、即時処理のために氷上で遅滞なく輸送される。 5。件名の回復</p> 被験者は、病棟での呼吸の研究看護師が2〜4時間、回収される。 この時間の間に、彼らは（彼らのツバメが安全であると評価されている場合）手順の後に、順番に誤嚥のリスクを軽減休息してからだけ食べて、> 60の分1を飲むことを許可されています。 処置後の観察は監視され、記録されている。臨床検査は、退院前に発生します。 被験者は、一般的な副作用（発熱、軽度の右乳腺下胸部不快感、のどの痛み）についての予備放電を説明を受け、重大な副作用は1を発生した場合の連絡先の電話番号が与えられる。 被写体が続くアップされている1-5日後の手順で臨床接点と。これは電話で、または個人のいずれであってもよい。 6。細胞は、研究室で単離される – 溶ける氷の上で実行可能な場合は BAL液の容積を、無菌ガーゼ綿棒の二重層を通して記録し、濾過し予備冷却し、50mlの滅菌遠心管に粘液栓を除去した。 細胞を5〜10分間、4℃で500×gの遠心分離によってペレット化し、50mlの冷生理食塩水をボルテックスすることにより洗浄する。遠心分離を1回繰り返す。 細胞（RPMI-1640 + 10％ウシ胎児血清+ 2mMのL-グルタミン+ペニシリン[40 IU / mlの]、ストレプトマイシン[75 IU / mlの]、およびアンホテリシンB [0.5 IU / mlの]）と培養培地中に再懸濁する差動計数をトリパンブルーの等しい容積と血球計数器を用いて行う。 細胞懸濁液は、適切な組織培養プレートにピペッティングにより導入、（我々が1×10 6細胞/ mlを使用）、およびマクロファージ付着を可能にする3時間37℃でインキュベートし、必要な濃度に正規化される。ウェル当たりこの細胞懸濁液1mlを24ウェル培養プレートに適している。 リンパ作業のため、インキュベーションの3時間後に、培養培地を穏やかに上下に3回ピペッティングし、そして回収される。この培地は、リンパ球を含有する非付着及びマクロファージおよびリンパ球機能を評価するために使用することができ、それは、マクロファージを除去するためにCD14磁性ビーズで、例えば精製工程でも使用することができる。 マクロファージの仕事のため、インキュベーションの3時間後に、培地を慎重に最小限のピペットで除去し、抗生物質を含まない新鮮な温かい培地（RPMI 1640 + 10％ウシ胎児血清+ 2mMのL-グルタミン）で置き換えた。マクロファージは（ 図1参照）組織培養プレートに接着性である。