Deze nieuwe methode maakt het gelijktijdig intracellulaire opname van een volwassen muis motoneuron en de meting van de kracht die door de spiervezels. De gecombineerde onderzoek van de elektrische en mechanische eigenschappen van motoreenheden in normale en genetisch gemodificeerde dieren is een doorbraak voor de studie van het neuromusculaire systeem.
De spinale motoneuron al lang goed model voor het bestuderen neurale functie omdat het een neuron van het centrale zenuwstelsel met de voordelen van (1) met omlijnd targets (spiervezels) en dus met een zeer bekende functie (spier contractie beheersen); (2) is de convergente doelwit van vele spinale en dalend netwerken, vandaar de naam "uiteindelijke gewone weg", en (3) met een grote soma die het mogelijk maakt om te penetreren met scherpe elektroden intracellulaire . Bovendien, als in vivo, is het mogelijk tegelijkertijd de elektrische activiteit van de motoneuronen en de kracht die door de spier targets. Uitvoeren intracellulaire opnamen van motorneuronen in vivo daarom het experimentator in de unieke positie te kunnen bestuderen, tegelijkertijd, alle compartimenten van de "aandrijving" (de naam van de motoneuron, het axon ende spiervezels het innerveert 1): de ingangen afbreuk te doen aan de motoneuron, de elektrofysiologische eigenschappen van het motoneuron, en de impact van deze eigenschappen op de fysiologische functie van de motoneuronen, dwz de kracht die door de motor. Deze benadering is uitdagend omdat de bereiding niet kan verlamd en daarmee de mechanische stabiliteit voor de intracellulaire opname verminderd. Zo heeft dit soort experimenten alleen bereikt bij katten en ratten. Anderzijds kan de studie van spinale motorische systemen maken een enorme sprong of het mogelijk was om dergelijke experimenten in normale en genetisch gemodificeerde muizen.
Om technische redenen is de studie van de spinale netwerken in muizen meestal is beperkt tot neonatale in vitro preparaten die de motoneuronen en het ruggenmerg netwerken zijn onvolwassen, zijn de motoneuronen gescheiden van hun doelen, en toen studeerde in plakjes, de motoneurons gescheiden van het grootste deel van hun ingangen. Tot voor kort had maar een paar groepen in geslaagd om intracellulaire opnames van motoneuronen te voeren in vivo 2-4, met inbegrip van ons team die publiceerde een nieuw preparaat die ons toeliet om zeer stabiele opnamen van motoneuronen te verkrijgen in vivo bij volwassen muizen 5,6. Echter, deze opnamen verkregen in verlamde dieren, dus zonder de mogelijkheid om de kracht output van deze motoneuronen nemen. Hier geven we een uitbreiding van deze oorspronkelijke preparaat waarin we konden gelijktijdige opnamen van de elektrofysiologische eigenschappen van de motoneuronen en de kracht die door de aandrijving te verkrijgen. Dit is een belangrijk resultaat, omdat het ons in staat stelt om de verschillende types van motoneuronen te identificeren op basis van hun kracht profiel, en daardoor onthullen hun functie. In combinatie met genetische modellen te storen spinale segmentale circuits 7-9, of reproducting menselijke disease 10,11, verwachten we dat deze techniek een essentieel instrument voor de studie van spinale motorische systeem.
De bereiding hier beschreven is het eerste dat toelaat in de volwassen muis, gelijktijdig intracellulaire opname van een lumbale motoneuron en de meting van de kracht die door de spiervezels geïnnerveerd door de axon.
Door de kleine grootte van het dier, kan de chirurgische vaardigheden voor dit preparaat tegen te verwerven. Echter, zodra de vaardigheden meester is, kan de hele operatie worden uitgevoerd in drie uur en de dieren overleven tot 7 uur na de afloop van de chirurgische procedure…
The authors have nothing to disclose.
Dit werk werd mogelijk gemaakt dankzij de financiële steun van de Fondation pour la Recherche Medicale (FRM), de Milton Safenowitz postdoctoraal fellowship voor ALS onderzoek (ALS Association), NIH NINDS Subsidies NS05462 en NS034382 en ANR Grant HyperMND.
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
Atropine sulfate | Aguettant | ||
Methylprenidsolone | Pfizer | Solu-Medrol | |
Sodium pentobarbitone | Sanofi-Aventis | Pentobarbital | |
Ketamine | |||
Xylazine | |||
Glucose | |||
Plasma expander | Roger Bellon | Plasmagel | |
Blunt scissors | FST | 14079-10 | |
Blunt fine scissors | FST | 15025-10 | |
Vannas Spring Scissors | FST | 15002-08 | |
Fine forceps serrated | FST | 11370-32 | |
Fine forceps serrated | FST | 11370-31 | |
Cunningham Spinal Adaptor | Stoelting Co. | ||
Kwik-Cast sealant | WPI | #KWIK-CAST | |
Ventilator | CWE Inc | SAR-830/AP | |
Capnograph | CWE Inc | μcapstar | |
Heating blanket | Harvard Apparatus | 507221F | |
Intracellular amplifier | Axon Instruments | Axoclamp 2B | |
Pipette puller | Sutter Instruments | P-97 | |
KCl | Sigma-Aldrich | P9333-500G |