Özet

同时细胞内记录的车组在成年小鼠的腰椎运动神经元产生的力<em在体内</em

Published: December 05, 2012
doi:

Özet

这种新方法允许同时细胞内记录一个单一的成年小鼠运动神经元和其肌肉纤维所产生的力的测量。合并后的调查是在正常和转基因动物的运动单位的电气和机械性能的神经肌肉系统的研究的一大突破。

Abstract

脊髓运动神经元长期以来一直是良好的模型系统的研究神经功能,因为它是一种中枢神经系统的神经元与独特的性能(1)因此,具有易于识别目标的(肌纤维)和具有非常著名的功能(来控制肌肉收缩),(2)的收敛许多脊髓和下行网络的目标,故名“最后共同通路”;(3)有一个大的胞体,这使得它可以穿透它们用锋利的内电极。此外,当在体内研究,这是能够同时记录的运动神经元的电活动的和由他们的肌肉目标开发的力。因此, 在体内的运动神经元进行细胞内记录将实验者的研究中的独特地位,在同一时间,所有的隔间“机动装置”(名字的运动神经元,其轴突,和它支配的肌纤维1):撞击的运动神经元的输入,运动神经元的电生理特性,以及这些特性的影响的运动神经元的生理功能, 其运动单位所产生的力。然而,这种方法是非常具有挑战性的,因为该制剂不能瘫痪,从而减少细胞内记录的机械稳定性。因此,这种实验只被实现在猫和大鼠。然而,这项研究对脊髓运动系统可以使一个强大的飞跃,如果有可能进行类似的实验,在正常和转基因小鼠。

由于技术上的原因,大多是在小鼠的脊髓网络的研究仅限于新生儿在体外的准备工作,是不成熟的运动神经元和脊髓的网络,运动神经元分开,他们的目标,并研究时,莫片toneurons分离大部分来自其输入。直到最近,只有几组2-4体内的运动神经元细胞内记录,包括我们的团队出版了一本新的准备,使我们能够获得非常稳定的运动神经元在成年小鼠体内的录音5,6。然而,这些录音瘫痪的动物, 没有可以记录这些运动神经元的输出力。在这里,我们提出了一个延伸,这种原始的准备中,我们能够获得的运动神经元的电生理特性和开发他们的运动单位的力量的同时录制。这是一个重要的成就,因为它使我们能够识别不同类型的运动神经元的基础上的力的分布,从而揭示它们的功能。再加上遗传模型干扰脊髓节段电路7-9,或reproducting人disea本身10,11,我们希望这是一个必不可少的工具,为研究脊髓运动系统的技术。

Protocol

1。第一步麻醉前用药:麻醉诱导前10-15分钟,注射阿托品(0.20毫克/千克)和皮下methylprenidsolone(0.05毫克),以防止唾液分泌和水肿,分别。 2。第二步诱导麻醉:注入戊巴比妥钠(70毫克/千克)或它们的混合物的氯胺酮/甲苯​​噻嗪(100毫克/千克和10毫克/公斤,分别)腹膜内。让鼠标可以得到下,直到没有脚趾掐反射。如果麻醉似?…

Representative Results

图1显示了如何识别渗透后小腿三头肌组运动神经元。在低的刺激强度,仅可观察到单突触EPSP( 图1A)。在较高的强度,在EPSP可能会对大到足以触发“顺”尖峰( 图1B)。在刺激强度更高,出现一个全或无的逆向秒杀,用更短的等待时间比单突触EPSP( 图1C)。如果有足够的电流被注入通过微电极触发一个尖峰,EMG活动可以记录对肌肉一个短暂的…

Discussion

这里所描述的制备是首先,允许,在成年小鼠的腰部的运动神经元和其轴突支配肌肉纤维所产生的力的测量,同时细胞内记录。

由于体积小的动物,这个准备所需的手术技巧可以是具有挑战性的收购。然而,一旦这些技能掌握,整个手术可以在三小时内进行,并能根据动物存活长达7个小时的手术过程结束后录音。这项技术的成功,本质上是对麻醉的管理队伍。这是至关重要?…

Açıklamalar

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

这项工作可能要归功于金融支持基金会POUR LA RECHERCHEMédicale(FRM),的米尔顿Safenowitz的博士后研究人员为研究ALS(ALS协会),美国国立卫生研究院的NINDS资助NS05462和NS034382,ANR格兰特HyperMND。

Materials

Name of the reagent Company Catalogue number Comments (optional)
Atropine sulfate Aguettant
Methylprenidsolone Pfizer Solu-Medrol
Sodium pentobarbitone Sanofi-Aventis Pentobarbital
Ketamine
Xylazine
Glucose
Plasma expander Roger Bellon Plasmagel
Blunt scissors FST 14079-10
Blunt fine scissors FST 15025-10
Vannas Spring Scissors FST 15002-08
Fine forceps serrated FST 11370-32
Fine forceps serrated FST 11370-31
Cunningham Spinal Adaptor Stoelting Co.
Kwik-Cast sealant WPI #KWIK-CAST
Ventilator CWE Inc SAR-830/AP
Capnograph CWE Inc μcapstar
Heating blanket Harvard Apparatus 507221F
Intracellular amplifier Axon Instruments Axoclamp 2B
Pipette puller Sutter Instruments P-97
KCl Sigma-Aldrich P9333-500G

Referanslar

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Manuel, M., Heckman, C. Simultaneous Intracellular Recording of a Lumbar Motoneuron and the Force Produced by its Motor Unit in the Adult Mouse In vivo. J. Vis. Exp. (70), e4312, doi:10.3791/4312 (2012).

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