두개골 방사선 치료에 의한인지 감소를 Quantifying

우리인지 테스트 패러다임 간략하게 구조 그림 1에 diagrammed 있습니다. 인지 검사는 조사 후 일개월 시작하고 수술 절차가 수행됩니다. 소설 장소 인식 (NPR) 작업을 실시 소설 장소 인식 (NPR) 작업은 Mumby 및 동료 (2002)에 기술된 절차에 따라, 그리고 해마 4 의존 공간적 인식 메모리 작업입니다. 쥐 먼저 사흘 동안 한 번 하루 20 분 (사용자 정의 – 만든, 흰색, 아크릴, 오픈 상단 박스, 70cm X 70cm X 40cm 높이) 시험 무대에서 그들을 배치하여 테스트 컨텍스트와 함께 친숙하고 있습니다. 나중에 테스트에 사용되지 않습니다 객체는 이러한 요법 이니 세션 동안 무대에 배치됩니다. 녹음 및 행동 추적 필요하지 않습니다 동안 요법 이니 단계 들면, 탐험 행동 매뉴얼 관찰은 주목하여야한다. NPR 작업의 모든 단계에 대한, 경기장은 혼란함을 주죠 악취 단서를 최소화하기 위해 70 % 에탄올을 사용하여 동물 사이에 철저하게 청소됩니다. 모든 시련 들어, 일관된 방향에서 테스트 경기장 중앙에 경험 장소 동물은 동물이 단순히 그들 옆에 배치하는 그런 일이 블록을 모색할 것입니다 그 기회를 최소화하기 위해. 친하게 함 단계와 5 분 테스트 단계는 네 번째 날짜에 시행됩니다. 친하게 함 단계 들면, 철저하게 70 % 에탄올로 세척하고 두 동일한 플라스틱 블록 (8cm X 3cm X 10cm 높이)는 테스트 경기장 내의 특정 위치에 배치됩니다. 한 동물은 5 분 동안 각 분야에 배치하고 자유롭게 탐구 허용됩니다. 두 똑같이 – 친숙한 공간 위치의 탐구는 자동 추적 시스템을 사용하여 채점합니다. 모든 단계에 대한, 탐사는 동물의 코를 지점의 반경 4cm되고 있으며 블록 향해 지시로 정의됩니다. 에친하게 함 단계 llowing, 동물은 5 분 지연 간격을위한 작은 개최 케이지에 배치됩니다. 이 시간 동안 테스트 경기장은 70 % 에탄올로 세척하고, 블록의 동일한 사본이 추가되며, 친하게 함의 단계에서와 같은 동일한 공간적 위치에, 소설 공간적 위치에 하나. 쥐가 친하게 함 단계에서 블록의 공간적 배열을 기억한다면, 그것은 소설 공간적 위치에있는 블록을 탐험 더 많은 시간을 보내는 것입니다. 5 분 지연 간격 후, 동물은 5 분 테스트 단계에 대한 시험 무대로 반환됩니다. 그들은 3 분 자유롭게 탐험. 24시간 친하게 함 단계의 끝 후에, 동물은 24 시간 테스트 단계에 대해 다시 시험 무대로 반환됩니다. 이 단계 들어, 하나의 블록은 친하게 함 5 분 테스트 단계 동안 같은 위치에 그대로 남아 있으며, 다른 블록은 새로운 소설 공간적 위치에 배치됩니다. 다시 쥐 다시하는 경우회원은 친하게 함 단계에서 차단 전날의 공간적 배열, 그는 소설 공간적 위치에있는 블록을 탐험 더 많은 시간을 보내는 것입니다. 이제 다양한 공간 위치에있는 블록을 탐험 보낸 시간 금액은 자동 추적 프로그램을 사용하여 수집하고, 실험 집단 간의 차이에 대한 통계 분석하실 수 있습니다. 친하게 함 단계 들면, 총 시간은 전체 재판을 통해 모두 공간적 위치가 계산됩니다 탐험 보냈다. 그들이 동등하게 익숙한 / 동물 (그림 2A)에 익숙하지 않은으로이 단계 동안 두 공간적 위치를 탐구 보낸 시간에 차이가있을 수 없습니다. 또한, 실험 집단 사이의 총 탐사에 큰 차이가 탐구 동기를 부여하거나 불안 수준에서 그룹 변화를 나타낼 수 있으며 두 시험 단계에서 공간 인식 메모리 결과를 해석 할 때 고려되어야합니다. 모두5 분 및 24 시간 테스트 단계, 탐구 비율은 다음과 같이 계산됩니다 : 시간은 소설의 위치를 탐험 소비 – 시간이 익숙한 위치 / 총 시간 (그림 2B) 탐험 지출을 탐험 보냈다. 이러한 방법으로 개체를 탐색하기 위해 동기 부여의 개별 다양성이 고려됩니다. 일반 동물은 5 분 및 24 시간 지연 간격 (그림 2B) 다음과 같은 기회 (점선으로 표시)에 의해 예상보다 소설 공간적 위치를 탐색 훨씬 더 많은 시간을 보냅니다. 탐사 비율은 일반적으로 5 분 및 24 시간 테스트 4의 첫 번째 60 초 동안 계산됩니다. 테스트 실험 진행으로 소설 공간 위치가 동물에 더 익숙한되어 있기 때문입니다. 따라서 테스트 실험의 첫 번째 분 공간적 인식 메모리의 가장 정확한 평가를 제공합니다. 2. 고가 플러스 미로 (EPM) 작업을 실시 고가플러스 미로 (EPM) 작업은 Walf와 프라이 2007 년 5 절차에 따라 달라집니다. EPM 작업은 설치류 동물에 불안을 평가하는 데 사용됩니다. EPM 장치가 4 암 미로이다 (45 "X 4") 플러스 형태로 배열 무기와 바닥 수준에서 "45 높였다. 두 팔을 묶어 두가 열려 있습니다. 표시된 장치는 클럽메드 어소 Inc의 제조입니다 . 이 작업 도중 문제는 쥐의 자연 소설 환경을 탐구 동기를 부여 (쌍수에서 보낸 시간) 및 보호 지역 (폐쇄 무기)에 남아에 대한 선호 사이의 갈등을 반영합니다. 실험 객실 밝게 폐쇄보다 dimly 조명 무기를 선호하는 적절한 동기 부여를 위해 미로에서 지적 스포트 라이트와 조명입니다. 미로는 최초의 동물이 테스트되기 전에 철저히 세척하고 각 시험 사이입니다. 동물이 떨어져있는 오픈 팔을 마주 앞발 밑에 잡고 미로의 중앙 부분에 배치하여 장치에 배치됩니다실험자. 각 시험은 5 분 동안 지속됩니다. 동물의 경로가 자동 추적 소프트웨어 있도록 항목과 개방적이고 닫힌 품안에서 보낸 시간 금액의 수를 계산할 수를 사용하여 추적할 수 있습니다. 이러한 장치의 측면을 통해 양육, 미용 및 머리 저러나 같은 추가 행동을 모니터링할 수 있습니다. 동물의 중앙 지점에 십자가 팔 때 항목이 계산됩니다. 쥐가 미로를 일인 경우, 그것은 빠르게 떨어진하는 오픈 팔에 다시 배치하고, 이벤트가 관찰 노트에 기록됩니다. 쥐가 오랜 기간 동안 얼어있다면, 어떠한 원인 (시험 방 밖 예를 들어 갑자기 큰 소음)와 함께 동작이 알려져 있으며, 테스트는 모든 실험 동물과 비슷한 노출 시간을 갖도록 계속 진행됩니다. 무기의 무기 / 총 시간 오픈 시간 : 오픈 대 닫힌 품에 보낸 시간은 비율을 계산하는 데 사용됩니다. 마찬가지로 항목의 비율은 전체 대 무기를 엽니다팔 항목은 계산됩니다. 자동 추적 소프트웨어를 사용하여, 총 거리는 여행과 속도는 실험 그룹간에 모터 기능에 차이를 평가하기 위해서는 측정할 수 있습니다. 증가 불안, 공포가 닫힌 무기에 보낸 많은 시간과 관련된하는 동안 감소 불안은 오픈 팔에 보낸 시간보다 비중과 관련된 것입니다. 일반 동물 기회 (점선, 그림 3.로 표시)에 의해 예상보다 쌍수에 훨씬 적은 시간을 보내고. 덜 불안 동물 오픈 무기 (예를 들어, 미로 또는 다음 anxiolytic 약물 치료에 여러 개의 노출 이후)에 더 많은 시간을 보내고되지만 더 불안 동물, 오픈 무기에 비례 적은 시간을 보내고 있습니다. 3. 콘텐츠 및 보이기 두려움 컨디셔닝 (FC) 작업을 실시 콘텐츠 및 보이기 두려움 컨디셔닝 (FC) 작업 설명은 Schaf의 절차를 기반으로전자 외., 1999, Winocur 외., 2006 MacLeod 외., 2007 6-8. 무조건 자극, 유해 자극 (일반적으로 가벼운 footshock로 페어링하여, 두려움 컨디셔닝 (FC) 작업은 동물이 이전에 중립적인 자극을 (에어컨 자극 맥락, 빛 또는 톤) 두려워해야하는 행동 패러다임이다 ). 학습은 신속, 강력하고 오래 지속되며, 따라서 FC 작업은 학습 및 설치류에서 메모리의 신경 생물학 회로를 공부하기 위해 자주 사용됩니다. FC 기기는 30cm X 30cm X 40cm 높이 동봉 챔버 (Phenotyper, 모델 3000, Noldus 정보 기술). 챔버의 바닥은 충격 자극을 전달하는 데 사용되는 스테인리스 격자로 구성되어 있습니다. Phenotyper은 냉방 자극 역할을 수요에 2300Hz, 90dB 톤을 방출 스피커를 갖추고 있습니다. 충격은 충격 생성기 (클럽메드 어소 주식 회사)를 통해 제공됩니다. 충격은 라스를 생산없는 순간 불편함이다ting의 통증이나 조직 손상. 교육 및 테스트 시험 모두 들어, 충격 및 톤 자극의 전달이 초과 자동으로 Ethovision XT를 사용하여 제어됩니다 평가판 및 하드웨어 제어 모듈 (버전 7.0, Noldus 정보 기술)에 추가할 수 있습니다. 첫 날, FC 훈련이 실시됩니다. Phenotyper은 70 % 에탄올로 철저히 세척하고, 하나의 동물은 챔버에 배치됩니다. 교육 재판은 세 단계로 구성되어, 어떤 충격이나 음색이 시행되지 않습니다 (1) 기본적인 단계, (2) 교육 단계, 톤 – 충격 pairings가 제공되며, (3) 후 교육 단계, 언제 없습니다 충격이나 음색이 관리합니다. 각 단계는 동물마다 15 분 총 교육 시범 시간 약 5 분 정도. 훈련 단계 동안 톤 30 초 톤의​​ 끝 부분과 일치를위한 관리이고, 1mA 충격은 1 초 격자로 배달됩니다. 이 톤 – 충격 페어 링은 변수 10-60 seco으로 5 회 총 반복각 페어 링 사이에 차 간격 간격. 훈련 단계에서 시간의 비율은 각 동물은 움직이지, 또는 동결 지출은 초기 기준선 단계 (톤 – 충격 pairings 전에 자발적인 동결을 수립)의 마지막 60 초를하고 포스트의 마지막 60 초를 측정 – 훈련 단계 (톤 – 충격 pairings에 대응 동결 동작을 설립). 일반 동물은 기준 단계에서 동결의 매우 낮은 수준을 표시하고 사후 교육 단계 (그림 4) 중 냉동 수준 (~ 95 %) 매우 높은. 24 시간 후에, 동물은 동일한 상황에 반환하고 오분 콘텐츠 FC 시험을 관찰합니다. 더 충격이나 음색이 단계에서 전달되지 않습니다, 그리고 시간 동안 냉동의 비율은 전체 재판을 계산합니다. 훈련에서 컨텍스트 테스트 컨텍스트가 지속 유지의 중요성을 확인합니다. 사실, 같은 실험자 두 일 동물을 처리하고 테스트하는 것이 NE입니다cessary. 일반 동물 냉동 행동 (그림 4)에 종사하고 상황에 맞는 재판의 약 70 %를 지출. 보이기 FC 시험 한 시간 후에 실시됩니다. 챔버의 문맥은 격자 층을 제거 챔버 외부에 패널을 추가하고, 향수 가정용 청소기로 바닥 청소로 변경됩니다. 동물의 동결 문제는 첫째 분에 대한 관찰, 그리고 컨텍스트가 충분히 (그림 4) 변경되었는지 동결 수준은 매우 희박합니다. 음색은 다음 냉동이 계산됩니다 보냈다 최종 침묵의 분, 백분율 시간에 따라 다음 3 분 동안 재생됩니다. 일반 동물이 시간 (그림 4) 중 냉동 높은 수준을 보여줍니다. 전체에서 동결 행동 5 이산 조치가 수집되며 (1) 기준을, (2) 사후 교육 (3) 문맥 테스트 (4) 사전 큐 테스트 (5) 신호 및 사후 큐 테스트합니다. 기준 단계에서 동결 부재는 정상적인 불안 수준을 수립하면서 substan이후 교육 단계에서 tial 냉동은 그대로 감각 모터 기능을 제안합니다. 컨텍스트 테스트 중에 동결은 그대로 hippocampal와 편도의 기능 9 의존 훈련 컨텍스트에 대한 24 시간 메모리를 설정합니다. 사전 큐 테스트 동결의 부족은 초기 훈련 컨텍스트 충분한 변경을 제안합니다. 큐 및 사후 신호 냉동은 그대로 편도체 기능 9 의존 톤 자극에 대한 24 시간 메모리를 설정합니다. 4. 모리스 물 미로 (MWM) 작업을 실시 모리스 물 미로의 작업 절차는 이전 설명 10,11 기준으로 산정됩니다. 모리스 물 미로 (MWM) 작업은 불투명 물을 대형 수영장에서 잠수 탈출 플랫폼을 찾을 수 말초 단서의 사용을 필요로 설치류에 대한 공간적 학습의 시험입니다. 대형, 독특한 시각적 단서는 특정, 일정한 위치에있는 수영장 주변에 위치하고 있습니다. 동물은 스와로 이동 이러한 단서를 사용하는 방법을 배우게플랫폼을 bmerged. 동물은 모니터들이 수영을 수없는 경우 물에서 제거됩니다. 공간적 학습 반복 실험 및 참조 메모리 플랫폼 부재시 플랫폼 영역에 대한 환경 설정을 평가에 의해 결정됩니다 걸쳐 평가입니다. 반전 실험은 공간 장애의 검출을 향상, 그리고 전두엽 피질 10 추가 두뇌 영역을 세금 있습니다. MWM 작업은 8 일 동안 관리 및 4 단계로 구성되어있다; 보이기 테스트, 인수 단계, 이용하려면 프로브 테스트 및 반전 학습 테스트를. 수영장, 직경 200cm 높은 60cm 사용자 정의 – 만든 흰색, 폴리에틸렌 탱크입니다. 그것은 약 30cm 깊이과 흰색, 무독성 페인트 불투명 만든 물을 가득합니다. 물 온도가 유지 20 ~ 22 ° C (68 72 ° F). 탈출 플랫폼은 직경 원형 최고 측정 10cm로 맞춤 제작, 투명한 플라스틱 스탠드입니다. 그것은 wate의 표면 아래 약 1.5cm 앉아R. 보이기 검사는 하루에 1 사 관리 시험으로 구성되어 있습니다. 탈출 위치는 동물 분명되도록 이러한 시련 들어, 뚜렷한 검은색과 흰색 깃발이 플랫폼의 중간에 배치됩니다. 이 단계 동안 공간 정보의 사용을 최소화하기 위해 벽 단서가 제거되며 플랫폼과 시작 위치는 재판에서 재판에 다양하고 있습니다. 이 단계는 수집 단계를 시작하기 전에 실험 집단 사이에 감각 모터 관련 차이점을 배제하는 데 도움이됩니다. MWM 작업의 모든 단계에 대한, 동물은 앞발에 의해 구속되고 부드럽게 수영장의 벽을 마주보고, 지정된 시작 위치에서 물속에 위치. 동물은 4 매일 실험의 각 사이의 상호 재판 간격 8-10분가 그러한 8 동료로 테스트됩니다. 상호 재판 간격 동안, 동물들은 저체온증을 방지하기 위해 새장을 온난 화를에 보관됩니다. 보이기 테스트를위한 30 초 최대의 수영 시간에 올라 동물 허용플랫폼입니다. 최대 시간이 동물 사라지기 전에 도달하면 실험자 손으로 플랫폼에 가이드 및 플랫폼에 위치. 동물 온난 케이지에 배치되고 20 초가의 휴식 기간 동안 플랫폼에 남아 있습니다. 각 보이기 테스트 재판의 경우 동물은 수영장 주변에 다른, 미리 정해진 시작 위치에서 시작되며,이 플랫폼은 또한 4 개의 사분면의 위치 각 이동합니다. 수집 단계는 다음 날 시작과 5 연속 일 동안 하루 4 실험으로 구성되어 있습니다. 이 단계 동안, 숨겨진 플랫폼은 말초 방 단서를 사용하여로 이동 배울 동일한 위치와 동물에 남아 있습니다. 다시 4 시련의 각, 동물은 다른, 미리 정해진 시작 시점에서 수영장에 배치됩니다. 하루의 시작 지점 두 왼쪽에 있으며, 시작 포인트의 두 egoc의 발전을 피하기 위해, 무작위 순서로, 플랫폼의 오른쪽에있는 아르작업을 해결하기 위해 entric 공간 전략. 각 수집 재판의 최대 수영 시간은 동물로 안내하고 실험자에 의해 플랫폼에 배치되는 후 60 초입니다. 동물 탈출 다음 20 초 동안 플랫폼에 남아 있습니다. 일 7, 이용하려면에 대한 최종 훈련 시험 후 60 초 프로브 재판은 플랫폼이 제거되는 관리합니다. 이 단계는 플랫폼을 포함하는 데 사용하고 공간 참조 메모리 10 조치로 사용되는 사분면에 대한 동물의 환경 설정을 결정합니다. 프로브 재판 다음, 플랫폼이 같은 사분면과 3 정기적으로 수집 재판에 반환되는가 시행됩니다. 일 8 테스트를 학습 반전 들어, 플랫폼은 반전 학습 능력을 평가하기 위해 새 위치로 이동합니다. 시간 동물의 양을 측정하면 새로운 위치에 대 이전 위치에있는 플랫폼에 대한 검색 지출 perseveration의 평가, 또는 인애를 제공합니다플랫폼 한번 이전 위치로 응답 억제 bility 10 이동되었습니다. 인수 및 프로브 단계에 관해서는, 4 60 초 시험이 시행됩니다. 보이기 테스트 들어, 플랫폼과 속도를 찾을 지연은 각각, 시각 및 운동 기능의 대책으로 사용됩니다. 이 단계 동안 실험 집단 간의 차이가있을 수 있습니다 그룹 간의 감각 모터 기능의 차이로 인수 및 메모리 결과의 해석에 고려되어야합니다. 수집 단계 들어, 플랫폼 및 / 또는 경로 길이 찾는 공간 학습 대책으로 사용되는 지연 시간을 뜻합니다. 정상적인 동물에서 점차 의미 탈출 시간이 5 일째 15~20초 (그림의 5A) 주위는 이러한 다섯 가지 인수 일 동안 감소 지연 탈출. 프로브 단계 들어, (그림 5C 먼저 플랫폼의 이전 위치를 도달 플랫폼 거리 (그림의 5B) 및 / 또는 지연을 의미 </strong>)을 참조 공간 메모리의 대책으로 사용됩니다. 반전 단계 들어, %의 시간은 플랫폼 perseveration의 측정으로 사용됩니다 포함된 오래된 비해 새로운 사분면에 보냈습니다. 새로운 플랫폼 위치에 대한 선호도가 설립로 네번이나 재판 동안, 기존의 플랫폼 위치를 환경 설정 (그림 5D) 감소한다. 5. 대표 결과 : 그림 1. 우리인지 테스트 패러다임의 도식 표현. 그림 2. 소설 장소 인식 작업을 제어 동물에서 대표 발생합니다. A) 두 공간적 위치를 탐구 동안 총 시간은 친하게 함의 단계에서 대략 동일해야합니다. B) 탐사 비율 (시간이 소설 PO를 탐험 보냈다sition / 시간 모두 위치를 탐험 지출)는 5 분 및 24 시간 지연 간격으로 다음과 같은 소설 공간적 위치에 대한 명확한 환경 설정을 보여줍니다. 점선은 기회의 성능을 나타냅니다. 그림 3. 고가 플러스 미로에서 컨트롤 동물의 대표 발생합니다. 일반 동물 열린 무기 (점선으로 표시)의 기회로 예상보다 적은 시간을 보내고. anxiolytic 에이전트와 미로하거나 치료하기 위해 여러 노출은 쌍수에서 보낸 시간이 증가합니다 반면 불안 동물, 컨트롤에 비해 쌍수에 비례 적은 시간을 보내고 있습니다. 그림 4. 두려움 컨디셔닝 작업을 제어 동물에서 대표 발생합니다. 냉동의 낮은 수준은 실로 초기 노출 (기준 기간 동안 관찰), 그리고 문맥이 큐 테스트 (사전 큐 테스트)하기 전에 변경되었을 때. 반대로 정상적인 동물 냉동 행동에 종사 후 연수 기간의 대부분을 보냅니다. 동물 훈련 이용하려면 다음의 지연 발생되는 문맥을 기억한다면, 그들은 5 분 컨텍스트 재판의 약 70 %에 대한 냉동 행동에 참여할 것입니다. 동물의 주도권을 기억한다면 마찬가지로, 그들은 신호 및 사후 큐를 검사하는 동안 동결 높은 수준을 보여줍니다. 그림 5. 모리스 물 미로의 작업을 제어 동물에서 대표 발생합니다. A) 이스케이프 지연은 수집 단계에서 진보적인 교육과 함께 감소하게된다. B) 및 C) 공간 참조 메모리의 대책으로 사용됩니다 먼저 이용하려면 프로브 테스트 동안 이전 플랫폼 위치를 건너에서 거리와 대기 시간을 의미합니다. D) 반전 학습 tes의 마지막 날에 플랫폼의 위치를​​ 변경하여 평가합니다ting. 4 시련 동안 정상적인 동물은 점차 오래된 사분면을 검색 중지하고 플랫폼이 새 위치에 그것을 배운다.