ここで、我々は、"腫瘍外植法"と呼ばれる脳腫瘍の手術標本での薬効試験のための方法を確立した。この方法では、我々は、固形腫瘍の微小環境を壊すことなく、薬効を評価することができます。この方法の信頼性を検証するために、我々は、現在のファーストラインの化学療法剤による治療を受けた私たちの神経膠腫の標本とテモゾロミドの代表的なデータを記述する。
悪性神経膠腫のための現在の治療は姑息的効果を持っている。治療法の開発のために、一つのハードルは、現在の薬効試験や患者への有効性によって決定される有効性の不一致です。したがって、薬効を評価するための新規かつ信頼性の高い方法は、前臨床段階では保証されています。細胞株を含む腫瘍組織のin vitro培養 、細胞培養の人工的な環境によって引き起こされる癌細胞の実質的な、表現型の遺伝、およびエピジェネティックな変化を持って、どのその場で元の腫瘍の生物学を反映しない場合があります。免疫不全マウスを用いた異種移植モデルも限界、すなわち、免疫システムの欠如があり、微小環境における遺伝的およびエピジェネティックな矛盾を種間。ここで、我々は、治療効果を評価するために解離していない腫瘍のブロックなどの悪性神経膠腫の手術標本を用いて新規な方法を示しています。この方法を検証するために、現在のファーストラインの化学療法剤、テモゾロミド(TMZ)、とのデータが記載されている。
我々は我々の実験のための悪性グリオーマの新たに除去された手術標本を用い。我々は手術標本でのインキュベーションおよび分析に続いて、TMZまたは他の医薬品候補の腫瘍内注入を行った。ここでは、我々は、少なくとも、現在いくつかの制限を克服し、現在の実験の間に、既存のギャップを埋めることができるかもしれないように、新規抗がん治療の有効性を決定するためのプラットフォームとして腫瘍組織の外植片の方法を確立しようとしたデータと実際の患者の腫瘍に対する有効性。このメソッドは、固形がんの治療のための新規化学療法剤を同定する加速する可能性があるかもしれません。
現在前臨床実験モデルにおける薬効および患者における有効性の間にギャップがある。具体的には、脳腫瘍の研究分野、新たな信頼性の高い方法で現行の方法や患者の有効性と薬物評価との間の既存のギャップを埋める手助けすることを要求される。この研究では記載のアッセイは、影響を受けた患者の実験データと結果の不一致を充填容易にするソリューションを、追加の資産であり、そうでない場合。
in vitroの培養細胞に優先的に関係なく、培養条件の特定の腫瘍細胞のタイプを展開し、腫瘍全体の唯一の亜集団を表す。5を加えて、人工的な細胞の増殖の遺伝子と表現型の変換が発生し、長期的な細胞培養では避けられない。悪性神経膠腫を治療するための主要なハードルの1つは、単一の腫瘍内および腫瘍サンプル6,7の間に両方とも、腫瘍細胞の不均一性である。したがって、関係なく、一種類または別の腫瘍細胞の特定の集団の選択的濃縮には、異種腫瘍細胞上の任意の化学療法剤の有効性を判断するために適切な手段ではありません。の亜集団から派生した脳腫瘍の8 9任意の動物モデル腫瘍細胞は小集団での薬効のランプではなく、腫瘍全体を流した。
いくつかの制限が、その一方で、依然としてこの腫瘍外植法に残ります。そのような制限は、治療の比較的短い期間です。悪性腫瘍の細胞が時間をかけて治療、ほとんどに耐性を獲得すると考え、すべてではないされているので、最近で報告されたとして、短期的な腫瘍細胞増殖の初期制御は、長期的な患者の予後に反映されない場合があります抗血管新生阻害剤、ベバシズマブ10。したがって、長時間の組織を維持するために、この植アッセイのためのプロトコルの改善は今後の調査で必要になります。別の質問では、腫瘍のSCLTC上でテストされた薬剤の特定の効果です。 SCLTCは悪性神経膠腫のための現在の治療に比較的耐性のある、強力SCLTCを根絶する新規抗がん剤の同定が正当化されることを考える。この点に関し、我々は現在、ニューロスフェア形成アッセイなどのin vitroの実験、(データは示さず) の後続でこの外植片アッセイを組み合わせることを目指しています。我々は、これらを組み合わせたアッセイを通してSCLTCで薬剤候補の、もしあれば、効果についての詳細を学ぶことを期待しています。最後に、腫瘍サンプルの小さなブロックを使用するなどの手術標本から、従来の腫瘍細胞株や初代培養の場合と同様に、腫瘍全体の細胞集団を反映していない場合があります。さておき、これらの問題は、血管ニッチを含む腫瘍間質を、維持し、腫瘍細胞のための環境要因を特徴付けるのに有用です。したがって、このアッセイでは、より生理学的に妥当な条件の下で任意の治療戦略を評価する可能性があります。
ここでは、GBMの手術標本の植付薬効試験のためのアッセイを確立した。実際には、テスト済みの手術標本で、我々は、TMZの直接注入がGBMの試料の増殖を減少させることがわかった。この組織片の方法は、他の固形がんへの理論的に適用でき、うまくいけば私たちはがんの臨床試験で別の障害を回避することに役立つ患者の腫瘍に対する薬物の有効性を、決定するために資産を提供します。
The authors have nothing to disclose.
米国癌協会(MRSG – 08 – 108 – 01)、ビンセントJ. Sgro /アメリカ脳腫瘍協会、と私は中野カーンファミリー財団。
Name of the reagent | Company | Catalogue number |
Fetal Bovine Serum, Qualified, Heat-Inactivated | GIBCO | 16140-071 |
D-MEM/F-12 (1X) Liquid 1:1 | Invitrogen | 10565-042 |
Agar-Agar Purified, Granulated | EMD | 1.01614.1000 |
DPBS for staining | Invitrogen | 14190 |
Hematoxyllin | Richalrd allan sci | 7211 |
10% w/v formalin Caspase-3 | Ricca chemical company | 3810 |
Caspase-3 | R&D systems | AF835 |
Ki67 | Dako | 15626 |
DMSO | Sigma | D2650 |
Envision system- anti-mouse | Dako | 2012-07 |
Envision system- anti-rabbit | Dako | 2011-12 |
DAB-kit | Vector Lab. | SK-4100 |
Table 1. Materials.
Name of the equipment | Company | Catalogue number |
6 Well Plate | Greiner-bio one | 657160 |
Petri dish | VWR | 25384-302 |
Serological pipette | Axygen | |
Filter tips | USA scientific | |
500 μm polyester mesh Netwell insert | Costar | 3480 |
Matrigel Matrix | BD Biosciences | 354230 |
BD 10 mL syringe | BD biosciences | 309604 |
Hypodermic needle Aluminum Hub. | Tyco Health Care | 2000029 |
Tissue culture flask | Corning | |
Centrifuge tubes | Basix | 5539800 |
Thin wall tubes | Eton | 1107A |
Surgical Blade stainless steel | Feather | 2976#10 |
Insulin Syringe | Comfort point | 26027 |
50mL flat top screw cap tube | Basix | 5539802 |
Dissection microscope | Tritech | |
Fluorescence microscope | Olympus | DP-72 |
Forcep | Fisher Sci |
Table 2. Equipment.