Utilizzando luciferasi di infezioni batteriche immagine in topi

Imaging è una tecnica preziosa che può essere utilizzata per monitorare i processi biologici. In particolare, la presenza di cellule tumorali, cellule staminali, specifici tipi di cellule immunitarie, agenti patogeni virali, parassiti e batteri possono essere seguiti in tempo reale all'interno di animali viventi ^1-2. Applicazione di imaging bioluminescenza per lo studio di agenti patogeni presenta vantaggi rispetto alle strategie tradizionali per l'analisi delle infezioni in modelli animali ^3-4. Le infezioni possono essere visualizzati all'interno di un singolo animale, nel tempo, senza richiedere l'eutanasia per determinare la posizione e la quantità del patogeno. L'imaging ottico permette la visione completa di tutti i tessuti e organi, piuttosto che il campionamento dei siti precedentemente nota l'infezione. Inoltre, l'accuratezza della inoculazione in tessuti specifici possono essere direttamente determinato prima di portare gli animali in avanti che sono stati inoculati senza successo in tutto l'intero esperimento. Variabilità tra gli animali possono essere controllati per, dal momento che l'imaging permette ad ogni animale da seguire individualmente. Imaging ha il potenziale per ridurre notevolmente il numero degli animali necessari a causa della possibilità di ottenere dati da numerosi punti di tempo, senza dover tessuti campione per determinare il carico patogeno ^3-4.

Questo protocollo descrive i metodi per visualizzare le infezioni negli animali vivi utilizzando l'imaging bioluminescenza di ceppi di batteri ricombinanti che esprimono luciferasi. Lo scarabeo clic (CBRLuc) e luciferases lucciola (FFluc) utilizzano come substrato luciferina ^5-6. La luce prodotta da entrambe le CBRluc e FFluc ha una lunghezza d'onda largo da 500 nm a 700 nm, rendendo questi giornalisti luciferases eccellente per l'imaging ottico in modelli animali che vivono ^7-9. Ciò è dovuto soprattutto lunghezze d'onda della luce superiore a 600 nm sono necessari per evitare l'assorbimento da parte dell'emoglobina e, quindi, i viaggi attraverso il tessuto dei mammiferi in modo efficiente. Luciferasi è geneticamente introdotto i batteri per produrre segnale luminoso ^10. I topi sono polmonare inoculati con batteri bioluminescenti intratracheally per consentire il monitoraggio delle infezioni in tempo reale. Dopo l'iniezione luciferina, le immagini sono acquisite con il Imaging System IVIS. Durante l'imaging, i topi vengono anestetizzati con isoflurano utilizzando un XGI-8 Sistema Gas Anethesia. Le immagini possono essere analizzati per localizzare e quantificare la sorgente del segnale, che rappresenta il sito di infezione batterica (s) e il numero, rispettivamente. Dopo l'imaging, la determinazione CFU viene effettuata sul tessuto omogeneizzato per confermare la presenza di batteri. Diverse dosi di batteri vengono utilizzati per correlare numeri batterica con luminescenza. L'imaging può essere applicato allo studio della patogenesi e la valutazione dell'efficacia di composti antibatterici e vaccini.