ويمكن استخدام [أليغنوكليوتيد] إلى موقع بديل على وجه التحديد النوكليوتيدات واحد من الجينات المستهدفة في كل من transfected<em> الأنوفيلة الغامبية</em> و<em> الأنوفيلة stephensi</em> الخلايا.
وتنتقل الطفيليات المتصورة ، العامل المسبب للمرض الملاريا ، عن طريق لدغات البعوض المصابة الأنوفيلة الناتجة في أكثر من 250 مليون إصابة جديدة سنويا. رغم عقود من البحث ، وأنه لا يوجد لقاح ضد الملاريا ، وتسليط الضوء على الحاجة إلى استراتيجيات مكافحة الرواية. نهج واحد هو استخدام مبتكرة من البعوض المعدل وراثيا لمكافحة الملاريا بفعالية انتقال الطفيلي. تم العثور على التعديلات المتعمدة من مسارات إشارات الخلية في البعوض عن طريق الطفرات المستهدفة ، لتنظيم الطفيلي التنمية 1. من هذه الدراسات ، ويمكننا أن نبدأ في تحديد الأهداف المحتملة للتحول الجينات. وقد اعتمد الطفرات المستهدفة تقليديا على إعادة التركيب مثلي بين الجينات المستهدفة وجزيء DNA كبيرة. ومع ذلك ، وبناء واستخدام مثل هذه جزيئات الحمض النووي لتوليد معقدة من خطوط الخلايا تحولت ستابلي غير مكلفة ، وتستغرق وقتا طويلا وغير فعالة في كثير من الأحيان. ولذلك ، ووضع استراتيجية استخدام حمض النووي مؤمن المعدلة [أليغنوكليوتيد] (LNA فيرفكس) يوفر بديلا مفيدا لإدخال بدائل اصطناعية النوكليوتيدات واحد في episomal والكروموسومات الجينات أهداف الحمض النووي (التي استعرضت في 2). وقد استخدمت LNA – ON بوساطة الطفرات التي تستهدف إدخال طفرات الجينات في نقطة من الفائدة في خلايا الخميرة المثقف على حد سواء والفئران 3،4. نعرض هنا التي يمكن استخدامها LNA الإضافات إلى إدخال تغيير واحد في النوكليوتيدات استهداف episomal transfected أن النتائج في التحول من اللون الأزرق الفلورسنت التعبير (BFP) البروتينات الفلورية الخضراء إلى التعبير (GFP) البروتين في الأنوفيلة الغامبية على حد سواء والخلايا الأنوفيلة stephensi . يوضح هذا التحويل للمرة الأولى التي يمكن أن تكون الطفرات بوساطة فعالة من الجينات المستهدفة في الخلايا بواسطة البعوض LNA الإضافات ويشير إلى أن هذه التقنية يمكن أن تنطبق على الطفرات الكروموسومية من الأهداف في المختبر والمجراة.
نحن هنا في طريقة تقديم الأدلة والمختبر لتحويل المستهدفة من النوكليوتيدات واحد في الهدف الجين episomal التالية ترنسفكأيشن من LNA الإضافات إلى A. وألف stephensi خلايا الغامبية. LNA – ON بوساطة التحويل الجيني يتطلب استحثاث موقع محدد الحمض النووي ردا الإصلاح ؛ الب…
The authors have nothing to disclose.
نود أن نشكر آبي سبينر في المركز الوطني للبحوث الرئيسيات في كاليفورنيا للحصول على المساعدة لها مع التدفق الخلوي. وأيد هذه الدراسة بتمويل من المعهد الوطني لأمراض الحساسية والأمراض المعدية التابع لمعاهد الصحة الوطنية (NIH) AI073745 ، AI080799 وAI078183.
Material Name | Tip | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
Effectene transfection reagent | Qiagen | 301425 | ||
GFP control plasmid (pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR-neg) | Invitrogen | K4935-00 | ||
BFP plasmid (pcDNA5/FRT/TO) | Gift from Dr. Concordet3 | |||
LNA-ONs | Gift from Dr. Concordet3 | |||
MEM, Earle’s w/ glutamine | Invitrogen | 11095 | ||
Fetal calf serum (FCS) | Invitrogen | 16000 | ||
Schneider’s Drosophila medium | Invitrogen | 11730 | ||
Non-essential amino acids | Invitrogen | 11140 | ||
10% D-glucose | Sigma | G5767 | ||
Penicillin-streptomycin antibiotic | Invitrogen | 15140 | ||
6-well culture plates | Corning | 3516 |