Intraperitoneale injectie in de Adult zebravis

Intraperitoneale injectie omvat vijf stappen: vasten, wegen, verlamming, injectie, en herstel. Voor elke stap zijn er best practices die kunnen zorgen voor succes. Succes bestaat uit een gezonde vissen patiënt als een goede experimentele resultaat.

Vasten: Een 24-uur snel moet legen van de darm lamp. Deze praktijk is afkomstig van de vis veterinaire literatuur (bijv. Brown 1993). Extra vasten overwegingen worden hieronder besproken.

Langere termijn vasten: We hebben vastgesteld dat een 72-uur vasten is nodig om de bloedglucose verlagen naar een basisniveau voor de injectie (Eames et al., 2010.). We hebben ook geconstateerd dat voor glucose studies zijn er verschillende procedures die nodig zijn om ervoor te zorgen dat de vissen goed zijn vasten. Begin met een schone tank (geen puin op de bodem). Tanks moeten worden offline, duidelijk gemarkeerd als 'vasten', en op een plaats waar enthousiaste vis verzorgend personeel zal niet voeden. Evalueer de externe omgeving van de tank en stappen ondernemen om de vis te voorkomen dat benadrukt van verstoringen, zoals stress is bekend dat de bloedglucose (Chavin en Young, 1970.; Groff et al., 1999) te verhogen. Bijvoorbeeld, hadden we een vasten experiment waarin een radio dagelijks werd gebruikt op de bank, dat hield de vis tanks. We vonden dat het bloed glucose was ongewoon hoog en concludeerde dat de vissen werden benadrukt door de trillingen. Een andere stressfactor is overbevolking. Vis moet worden bewaard bij een dichtheid die in overeenstemming is met goede vis veehouderijpraktijken. Voor aanbevelingen, zie Brand et al.. (2002) en Westerfield (1995). We hebben goede resultaten vasten onze vis bij een dichtheid van 10-12 vis in een 9 liter tank (met 3 lagen knikkers toegang tot een deel van dat volume). Het scheiden van de seksen kan stress veroorzaken, dus we raden het onderhouden van een mixed-sex bevolking tijdens het vasten. Dit betekent dat de eieren kunnen worden gelegd, en de eieren moeten worden afgezonderd, zodat ze niet worden opgegeten. Een eenvoudige manier om eieren afzonderen is om de tank onderkant met 2-3 lagen knikkers. De waterkwaliteit moet worden gehandhaafd door het verwijderen van eieren en afval en door de vervanging van ongeveer 10-15% van de tank water, per dag. Voor het verwijderen van eieren en afval, overhevelen werkt goed.

Wegen: Bij de weging van vis die niet verdoofd zijn, zorg moeten worden genomen zodat er minimaal water uit het net in het bekerglas, om nauwkeurig wegen te garanderen. Als het net (met vis) is uitgewist op papier handdoeken, kan het grootste deel van het overtollige water worden verwijderd, en het gewicht nauwkeurig kan worden gemeten. Het kan makkelijker zijn voor de vissen verdoven voor het wegen, maar we hebben niet getest de mogelijke effecten van de verlamming een vis twee keer op een dag. We hebben onze techniek getest door weging van de vis eerst met de netten / blotting methode en vervolgens opnieuw de vis weegt, nadat het is verdoofd, en voorzichtig drooggedept. We vonden geen significant verschil in gewicht tussen de methodes (P = 0.7927, t-test). Daarnaast hebben we getest of dit gaas / blotting methode beïnvloed bloedglucose, in vergelijking met alleen de overdracht van de vis aan de beker zodra het is gesaldeerd (geen blotting). We vonden geen significant verschil in het bloed glucose-niveau tussen de twee overdrachtsmethodes (P = 0.2241, t-test).

Verlamming: Chemische anesthesie kunnen geschikt zijn voor veel studies. Hier hebben we aangetoond koud water verdoving als een alternatief, omdat veel anesthetica (inclusief tricaine/MS-222 (Brown, 1993)), verhogen bloedglucose. In eerdere studies hebben we vastgesteld dat koud water niet bloedglucose te verhogen in zebravis (Eames et al.., 2010).
Voor koud water anesthesie, dient de temperatuur langzaam worden verminderd. Het tempo van de daling lijkt af te hangen van de grootte van de vis, met kleinere vissen onder te gaan sneller dan de grotere vissen. Na de injectie, kan het zijn dat de vis is te langzaam herstelt van de narcose (zie hieronder). Dit kan ontstaan ​​wanneer het begin-temperatuur te laag is, of wanneer de temperatuur te snel af. De start temperatuur is te laag als de vis buigt zijdelings bij het binnenkomen van het water. Als de begintemperatuur juist is, zal de vis in eerste instantie houden aan haar balans. Het zal draaien zijn borstvinnen naar een horizontale positie, snik, en hebben een snelle operculum bewegingen. Doorgaans zal het zwemmen. Naarmate de temperatuur daalt, zullen de bewegingen verminderen en de vis zal verliezen evenwicht. Een chirurgisch vlak van anesthesie is bereikt wanneer de vis kan worden behandeld zonder te reageren. Handhaving van de vis onder chirurgische anesthesie, moet uw vingers koud zijn, zodat deze vóór te houden in het water om het hanteren van de vis. De spons moet ook worden bewaard koud op dezelfde temperatuur als het water gebruikt voor verlamming van de vis. Het is belangrijk om te verzadigen de spons met water dat is sufficiently koud om narcose te onderhouden als de vis op de plaat legt.

Injectie: Voorafgaand aan de onderneming injecties, wilt u misschien om ten minste een vis ontleden om een gevoel van het lichaam van de wanddikte te krijgen. Dit kan u helpen om te beoordelen hoe ver de naald moet plaatsen om de buikholte te voeren. Bovendien, als je de naald, voel je het lichaam muur "geven" wanneer de naald komt in de buikholte. Tijdens de injectie, stappen ondernemen om de patiënt tevreden. Zorg ervoor dat de spons is verzadigd met de juiste temperatuur koud water om de vissen te voorkomen dat doen herleven tijdens de injectie. Een goed verzadigd en zachte spons is belangrijk voor het minimaliseren van schade aan de schubben en slijm bedekken van de huid. Een goed verzadigde spons is ook belangrijk voor het bijhouden van de kieuwen belucht. We raden het schuim spons hierna vermeld onder Materials. Tot slot, wanneer de vis is verdoofd, snel werken om de tijd dat de vis is onder te minimaliseren.

Herstel: De vissen moeten uit de narcose te herstellen vrijwel bij het ​​betreden van het warme bak water. Als de vis niet begint te zwemmen onmiddellijk voorzichtig krul het water naar de kieuwen het herstel bespoedigen. Als het herstel is traag, dan is de vis onder ging te snel en je moet de anesthesie procedure juiste wijze aan te passen. De mogelijke oorzaken van langzaam herstel worden besproken onder verlamming.