Montagem de Ágar em camadas: preparando embriões de zebrafish vivos para imagens de longo prazo com um microscópio invertido
Published: April 30, 2023
Abstract
Fonte: Upadhyay S., et.al. Um método de montagem em camadas para microscopia confocal de lapso de tempo estendido de embriões inteiros de zebrafish. J. Vis. Exp. (2020).
Este artigo descreve um método para montar embriões de zebrafish vivos para imagens de longo prazo. Este método é econômico e fácil de executar usando pratos regulares de microscopia de fundo de vidro para imagens no Microscópio Invertido. A montagem é realizada em camadas de agarose em diferentes concentrações.
Protocol
1. Preparação de embriões Após o acasalamento, colmeia embriões em E3 em uma placa de Petri e incuba-os a 26,5 °C por cerca de 28 h antes de montar.NOTA: Isso retarda o desenvolvimento dos embriões para que os embriões estejam aproximadamente em 30 estágios de somite no início da imagem. Embriões anestesiadores em 0,016-0,020% Tricaine na E3. Para inibir a pigmentação, adicione PTU a uma concentração de 200 μM. Descorionato os embriões …
Representative Results
Figura 1 : Descrição do método de montagem. (A) Adicione o embrião de zebrafish ao pequeno poço criado pelo fundo de vidro no prato de 35 mm. (B) Adicione a camada 1 à pequena poço para cobrir o embrião. (C) Coloque cuidadosamente um vidro de cobertura sobre o poço pequeno. (D) Adicione a camada agarose 2 em todo o fundo do prato de 35 mm. (E) Adicione E3 ao prato. (F) Desenho esquemático de uma seção transver…
Materials
| Low melting agarose | Sigma-Aldrich, MO | A9414 | Store dissolved solution at 4 °C |
| 35 mm glass bottom dishes with No. 0 coverslip and 10 mm diameter of glass bottom | MatTek Corporation, MA | P35GCOL-0-10-C | |
| Tricaine (MS-222) | Sigma-Aldrich, MO | E10521 | Store dissolved solution at 4 °C |
| N-phenylthiourea (PTU) | Sigma-Aldrich, MO | P7629 | Store dissolved solution at -20 °C |
| DMC4500 digital microscope camera | Leica | NA | |
| Micro cover glass 22×22 mm | VWR | 48366 067 |
Bu Makaleden Alıntı Yapın
Layered Agar Mounting: Preparing Live Zebrafish Embryos for Long-Term Imaging with an Inverted Microscope. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20186, doi: (2023).