Cet article décrit une méthode pour monter des embryons vivants de poisson zèbre pour l’imagerie à long terme. Cette méthode est rentable et facile à utiliser en utilisant des microscopies régulières à fond de verre pour l’imagerie au microscope inversé. Le montage est effectué en couches d’agarose à différentes concentrations.
Protocol
1. Préparation d’embryons Après l’accouplement, récolter les embryons en E3 dans une boîte de Pétri et les incuber à 26,5 °C pendant environ 28 h avant de monter.REMARQUE: Cela ralentit le développement des embryons de sorte que les embryons sont d’environ 30 stade somite au début de l’imagerie. Anesthésier les embryons en 0,016-0,020% Tricaine à l’E3. Pour inhiber la pigmentation, ajouter la PTU à une concentration de 200 μM. Dé…
Representative Results
Figure 1 : Description de la méthode de montage. (A) Ajouter l’embryon de poisson zèbre au petit puits créé par le fond de verre dans le plat de 35 mm. (B) Ajouter la couche d’agarose 1 au petit puits pour couvrir l’embryon. (C) Placer délicatement un verre de couverture sur le petit puits. (D) Ajouter la couche d’agarose 2 sur tout le fond du plat de 35 mm. (E) Ajouter l’E3 au plat. (F) Dessin schématique…
Materials
Low melting agarose
Sigma-Aldrich, MO
A9414
Store dissolved solution at 4 °C
35 mm glass bottom dishes with No. 0 coverslip and 10 mm diameter of glass bottom
Layered Agar Mounting: Preparing Live Zebrafish Embryos for Long-Term Imaging with an Inverted Microscope. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20186, doi: (2023).