Слой Агар Монтаж: Подготовка живых эмбрионов зебры для долгосрочной визуализации с перевернутым микроскопом
Published: April 30, 2023
Abstract
Источник: Upadhyay S., et.al. Многослойный метод монтажа для расширенной конфокаловой микроскопии времени и времени целых эмбрионов зебры. J. Vis. Exp. (2020).
В этой статье описывается метод установки живых эмбрионов зебры для долгосрочной визуализации. Этот метод является экономически эффективным и простым в использовании регулярных стеклянно-нижней микроскопии посуды для визуализации на перевернутый микроскоп. Монтаж выполняется слоями агарозы в различных концентрациях.
Protocol
1. Подготовка эмбрионов После спаривания, урожай эмбрионов в E3 в чашке Петри и инкубировать их при 26,5 градусов по Цельсию около 28 ч до монтажа.ПРИМЕЧАНИЕ: Это замедляет развитие эмбрионов, так что эмбрионы находятся примерно на 30 стадиях сомита в начале изображ?…
Representative Results
Рисунок 1 : Описание метода монтажа. (A) Добавить эмбрион зебры к небольшой хорошо созданный стеклянным дном в 35 мм блюдо. (B) Добавить агарозный слой 1 к небольшой колодец, чтобы покрыть эмбрион. (C) Аккуратно поместите крышку стекла над …
Materials
| Low melting agarose | Sigma-Aldrich, MO | A9414 | Store dissolved solution at 4 °C |
| 35 mm glass bottom dishes with No. 0 coverslip and 10 mm diameter of glass bottom | MatTek Corporation, MA | P35GCOL-0-10-C | |
| Tricaine (MS-222) | Sigma-Aldrich, MO | E10521 | Store dissolved solution at 4 °C |
| N-phenylthiourea (PTU) | Sigma-Aldrich, MO | P7629 | Store dissolved solution at -20 °C |
| DMC4500 digital microscope camera | Leica | NA | |
| Micro cover glass 22×22 mm | VWR | 48366 067 |
Bu Makaleden Alıntı Yapın
Layered Agar Mounting: Preparing Live Zebrafish Embryos for Long-Term Imaging with an Inverted Microscope. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20186, doi: (2023).